结直肠癌中miR-182-5p通过靶向Tiam1抑制肿瘤血管新生

目的:探讨结直肠癌中miR-182-5p是否可以通过靶向Tiam1抑制肿瘤血管新生。方法:选取人正常结肠上皮细胞与结直肠癌细胞,用qPCR检测细胞系中miR-182-5p和Tiam1 mRNA的表达。将对照mimics过表达载体、miR-182-5p mimics过表达载体、对照siRNA过表达载体、Tiam1 siRNA过表达载体及Tiam1过表达载体分别转染至HT-29细胞中,用双荧光素酶报告基因实验验证miR-182-5p与Tiam1 3'UTR的靶向关系,用工程化肿瘤细胞上清培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC）,通过划痕愈合实验及小管生成实验分别检测细胞的迁移及小管生成能力,用Western blot检测相关蛋白的表达,并通过小鼠体内移植瘤模型检测血管新生。结果:miR-182-5p在HT-29细胞中显著低表达（P＜0.01）,而Tiam1在HT-29细胞中显著高表达（P＜0.001）,且Tiam1是miR-182-5p的靶标。迁移实验结果表明,转染miR-182-5p mimics的HT-29细胞上清可以抑制HUVEC的迁移能力（P＜0.01）,Tiam1 基因沉默的HT-29细胞上清也可以抑制HUVEC的迁移能力（P＜0.001）。小管生成及小鼠体内实验表明,过表达miR-182-5p及沉默Tiam1可以有效抑制肿瘤血管生成（P＜0.01）。结论:miR-182-5p可以靶向Tiam1,通过抑制Tiam1的表达水平,从而抑制结直肠癌中的血管新生。     

miR-338-3p靶向PTP1B抑制胃癌细胞迁移和侵袭

目的:探讨miR-338-3p和PTP1B对胃癌细胞迁移和侵袭的影响。方法:Western Blot法测定PTP1B在胃癌标本及癌旁组织中的表达。通过qRT-PCR检测miR-338-3p的表达。用PTP1B质粒和siRNA、miR-338-3p类似物转染SGC7901细胞,用Transwell法测定miR-338-3p和PTP1B对细胞迁移和侵袭的影响。最后,使用双重荧光素酶报告基因来验证miR-338-3p对PTP1B的靶向作用。结果:在这项研究中,我们发现PTP1B蛋白水平在胃癌组织中明显增加,并且PTP1B促进了胃癌细胞的迁移和侵袭。生物信息学分析表明,miR-338-3p可能靶向PTP1B。在胃癌组织中,miR-338-3p与PTP1B负相关（r=-0.653,P=0.013）。我们证明了miR-338-3p可能调节胃癌细胞中的PTP1B,通过靶向PTP1B来调节胃癌细胞的迁移和侵袭。结论:miR-338-3p可抑制胃癌细胞的迁移和侵袭,可能与靶向PTP1B有关,本研究为胃癌治疗提供新的分子靶点和依据。     

靶向抑制miR-155增加骨髓瘤细胞对化疗药物的敏感性

目的:探讨靶向抑制miR-155对骨髓瘤细胞化疗敏感性的影响,并研究其分子作用机制。方法:利用qRT-PCR测定人骨髓瘤细胞株及耐药株中miR-155的表达水平;利用LipofectamineTM 2000 将 miR-155 inhibitor和阴性对照转染至人骨髓瘤耐药细胞株中;利用MTT 法检测转染后人骨髓瘤耐药细胞对化疗药物的敏感性和增殖活性;利用Western-blot实验测定转染后人骨髓瘤耐药细胞中E-cadherin 蛋白的表达量。结果:qRT-PCR实验结果显示,人骨髓瘤耐药细胞中miR-155的表达水平较人骨髓瘤细胞显著上调（P＜0.001）;MTT实验结果显示,转染miR-155 inhibitor抑制miR-155的表达,人骨髓瘤耐药细胞对化疗药物的敏感性显著增加（P＜0.05）,细胞增殖活性显著降低（P＜0.05）;Western-blot实验结果显示,人骨髓瘤耐药细胞中E-cadherin蛋白的表达量显著增加（P＜0.01）。结论:通过靶向抑制miR-155的表达可以增加骨髓瘤细胞对化疗药物的敏感性,其机制可能与上皮间质转化（EMT）生成的逆转有关。     

miR-203抑制食管鳞癌细胞迁移、侵袭及其分子机制探讨

目的:探究miR-203对食管鳞癌细胞(TR146、EC109)迁移、侵袭能力的影响及其分子机制。方法:检测miR-203在食管鳞癌细胞系中的表达水平,并通过转染miR-203激动剂agomir使TR146、EC109细胞稳定高表达miR-203,miR-203 agomir阴性对照组(NC)和无处理组(Blank)作为对照。通过划痕实验、Transwell实验检测miR-203对TR146、EC109细胞迁移、侵袭能力的影响。利用生物信息学分析miR-203潜在的靶基因,并通过双荧光素酶报告基因实验、实时定量PCR（qPCR）实验、Western blot实验验证miR-203靶基因。通过拯救实验探究miR-203是否通过抑制靶基因发挥作用。结果:与正常食管上皮细胞相比,miR-203在食管鳞癌细胞系中表达下调。在TR146、EC109细胞内将miR-203表达水平上调数倍,划痕实验证实miR-203能够抑制TR146、EC109细胞迁移能力,Transwell实验证实miR-203能够抑制TR146、EC109细胞侵袭能力。生物信息学、qPCR实验和Western blot实验表明LASP1(LIM and SH3 domain protein 1)是miR-203潜在的靶基因。拯救实验表明miR-203通过靶向抑制LASP1发挥抑制食管鳞癌细胞迁移、侵袭的作用。结论:miR-203能够抑制食管鳞癌细胞迁移、侵袭,并且该抑制作用可能通过miR-203靶向抑制LASP1介导,为食管鳞癌临床诊断和靶向治疗提供了理论依据。     

Linc00052基因在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的:探究非小细胞肺癌(NSCLC)组织及其细胞系内基因长链非编码RNA00052(long intergenic non-coding RNA 00052,Linc00052)的表达水平,以及Linc00052在肺癌中的临床意义、作用机制及与患者预后的相关性。方法:利用逆转录-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测正常肺细胞系与肺癌细胞系之间Linc00052表达水平的差异,肺癌组织与癌旁组织之间Linc00052表达水平的差异,并分析Linc00052与肺癌临床病理特征的相关性,Kaplan-Meier生存曲线分析Linc00052与肺癌预后之间的相关性。在A549细胞系中过表达Linc00052,采用MTT实验检测过表达Linc00052前后细胞增殖变化,并采用qRT-PCR检测miR-330-3p表达变化。结果:肺癌细胞系较正常肺细胞系中Linc00052明显低表达,同时肺癌组织比癌旁组织中Linc00052明显低表达(P＜0.01);Linc00052的表达与肿瘤的分化程度（P=0.02）、淋巴结转移（P=0.002）、远处转移（P=0.005）和临床分期（P=0.001）有关。肺癌的Linc00052表达水平减低与肺癌患者的预后不良有关（P＜0.05）。过表达Linc00052后可显著抑制细胞增殖（P＜0.05）,qRT-PCR结果证实,过表达Linc00052可显著下调miR-330-3p mRNA的表达水平（P＜0.05）。结论:Linc00052在肺癌组织中表达下调,并与肺癌的发生发展及预后密切相关,Linc00052有可能通过负调控miR-330-3p在肺癌中发挥抑癌作用。     

上皮性卵巢癌血清miR-1294及miR-4443的表达及其与预后的关系

目的:探讨上皮性卵巢癌（epithelial ovarian cancer,EOC）患者血清miR-1294及miR-4443的表达水平及其与患者临床病理特征和预后的关系。方法:选取我院2015年1月至2017年12月收治的106例EOC患者作为EOC组,另选取90例卵巢良性肿瘤患者作为良性组和60例正常健康女性作为对照组,检测血清miR-1294及miR-4443表达水平。以miR-1294及miR-4443的最佳截断值为标准将EOC患者分为高miR-1294组（n=33）、低miR-1294组（n=73）和高miR-4443组（n=36）、低miR-4443组（n=70）。EOC患者预后不良的危险因素应用单因素及多因素COX回归模型进行分析。结果:血清miR-1294表达水平（0.48±0.13 vs 1.16±0.57、1.21±0.62）在EOC组明显低于良性组和对照组（P均<0.001）。血清miR-4443表达水平（0.71±0.18 vs 1.36±0.64、1.45±0.70）在EOC组明显低于良性组和对照组（P均<0.001）。miR-1294和miR-4443高表达组的EOC患者临床分期、分化程度、淋巴结转移及腹膜转移与miR-1294和miR-4443低表达组比较,差异均有统计学意义（P<0.05）。Kaplan-Meier分析显示,EOC患者生存期短与miR-1294及miR-4443低表达有关（P<0.001）。多因素分析显示,EOC患者预后不良的独立危险因素为淋巴结转移［HR（95%CI）=1.885（1.206～4.118）］、腹膜转移［HR（95%CI）=3.106（2.315～6.226）］、miR-1294＜0.73［HR（95%CI）=2.614（1.865～5.512）］及miR-4443＜1.04［HR（95%CI）=1.975（1.508～4.903）］。结论:miR-1294及miR-4443的低表达与EOC患者生存期短有关,是EOC患者预后预测的生物标志物。     

miRNA-101抑制A549细胞增殖作用机制探讨

目的探讨miR-101在非小细胞肺癌(NSCLC)增殖中的作用及机制。方法通过实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测20例NSCLC组织、癌旁组织及NSCLC细胞系A549、H1650、H1975、PC-9和BEAS-2B人正常肺上皮细胞中miR-101的表达。使用miR-101的类似物miR-101-mimic及对照miR-NC分别瞬时转染A549细胞,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期与凋亡;蛋白质印迹法检测SOX2及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Cleaved Caspase-3和Cleaved Caspase-9的表达;双荧光素酶实验检测miR-101结合SOX23′-UTR靶向调控SOX2的表达;免疫组化法和qRT-PCR检测NSCLC组织和癌旁组织SOX2的表达;Pearson相关系数分析NSCLC组织SOX2与miR-101表达的相关性。结果miR-101在10例NSCLC组织和癌旁组织中表达分别为0.29±0.11和0.87±0.08,差异有统计学意义,t=12.54,P<0.0001。A549细胞转染miR-101-mimic和miR-NC后,24h吸光度(A)值分别为0.43±0.04和0.65±0.05,差异有统计学意义,t=3.033,P=0.0387;48hA值分别为0.52±0.05和0.76±0.05,差异有统计学意义,t=7.368,P=0.0018。miR-101-mimic转染A549细胞后S期细胞增多,miR-101-mimic组和miR-NC组分别为(23.43±0.90)%和(9.80±1.32)%,差异有统计学意义,t=14.75,P=0.0001。miR-101-mimic转染诱导A549细胞凋亡,miR-101-mimic组和miR-NC组分别为(22.19±1.92)%和(7.58±1.21)%,差异有统计学意义,t=14.23,P=0.0001。凋亡蛋白Cleaved Caspase-9、Cleaved Caspase-3和Bax蛋白表达升高,抗凋亡蛋白Bcl-2降低。双荧光素酶活性实验得到miR-NC+WT、miR-101+WT、miR-NC+MU1、miR-101+MU1、miR-NC+MU2和miR-101+MU2的相对荧光素酶活性分别为1.003±0.025、0.253±0.015、1.017±0.025、0.510±0.006、0.997±0.021和0.417±0.067。与miR-NC+WT相比,miRNA-101+WT组荧光素酶活性降低,差异有统计学意义,t=44.13,P<0.0001;与miR-NC+MU1相比,miRNA-101+MU1组荧光素酶活性降低,差异有统计学意义,t=13.33,P=0.0002;与miR-NC+MU2相比,miR-101+MU2组荧光素酶活性降低,差异有统计学意义,t=14.40,P=0.0001;与miR-101+WT相比,miR-101+MU1组荧光素酶活性升高,差异有统计学意义;与miR-101+WT相比,miR-101+MU2组荧光素酶活性升高,差异有统计学意义,t=4.14,P=0.0144。Real-time PCR检测结果显示,miR-101有效降低SOX2mRNA的表达水平,miR-101-mimic组和miR-NC组相对表达量值分别为1.331±0.069和0.537±0.034,差异有统计学意义,t=17.72,P<0.0001。蛋白质印迹法检测SOX2蛋白表达亦得到过表达miR-101降低SOX2蛋白的表达,SOX2在肺癌组织及癌旁组织阳性率分别为80.0%(16/20)和25.0%(5/20),差异有统计学意义,χ²=12.13,P=0.0005。SOX2mRNA在肺癌组织和癌旁组织的相对表达量相比为0.267±0.018和0.894±0.347;差异有统计学意义,t=5.705,P<0.0001。肺癌组织SOX2表达与miR-101表达高度负相关,R²=0.9354。结论miR-101可以有效抑制肺癌A549细胞增殖,介导细胞凋亡,其可能的作用机制为靶向抑制SOX2的表达。     

miR-126在急性髓系白血病中的研究进展

急性髓系白血病（acute myeloid leukemia, AML）是血液系统恶性肿瘤中常见的疾病,尽管化学治疗可以清除骨髓中白血病细胞,多数患者的最终结局仍是复发,甚至死亡。miRNAs对急性髓系白血病的诊断、分型及预后往往有指导性意义,其表达水平对化疗敏感性的影响可以提示是否存在化疗耐药。其中,miR-126作为在造血干细胞及内皮细胞均有特异性表达的miRNA,虽然在干细胞中已有详尽的研究,但在AML分化细胞水平尚无完整和确切定论。本文讨论目前miR-126在急性髓系白血病中研究进展及其对干细胞功能的调控。     

miR-143-3p靶向KRAS阻滞PI3K/Akt信号通路抑制分化型甲状腺癌细胞增殖、侵袭和迁移

目的:探讨miR-143-3p对分化型甲状腺癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其作用机制。方法:采用qRT-PCR检测miR-143-3p在30例分化型甲状腺癌组织和对应的癌旁组织,以及人分化型甲状腺癌细胞（TCP-1、FTC-133、SW579、BCPAP）和甲状腺滤泡上皮正常细胞（Nthy-ori3-1）中的表达水平。将miR-143-3p mimic和miR-143-3p mimic+pcDNA3.1-KRAS转染于FTC-133细胞中,采用CCK-8检测FTC-133细胞增殖活力;Transwell检测FTC-133细胞侵袭和迁移能力。双荧光素酶报告基因验证miR-143-3p和KRAS的靶向关系。Western blot检测蛋白的表达水平。结果:miR-143-3p在分化型甲状腺癌组织中的表达水平明显低于对应的癌旁组织。miR-143-3p在分化型甲状腺癌细胞系中的表达水平低于甲状腺滤泡上皮正常细胞的表达,尤其在FTC-133细胞中表达最低。过表达miR-143-3p显著抑制了FTC-133细胞增殖、侵袭和迁移能力。此外,双荧光素酶报告基因证实,KRAS为miR-143-3p的靶基因。进一步,过表达KRAS通过激活PI3K/Akt信号通路缓解了仅过表达miR-143-3p对FTC-133细胞增殖、侵袭和迁移能力的抑制作用。结论:过表达miR-143-3p通过靶向KRAS且阻滞PI3K/Akt信号通路,进而抑制分化型甲状腺癌细胞恶性生物学行为。     

miR-32-5p靶向CEBPA调控EGFR/β-catenin信号通路影响骨髓瘤细胞的增殖、凋亡和侵袭

目的:探究miR-32-5p靶向CCAAT增强子结合蛋白α（CCAAT/enhancer binding proteins α,CEBPA）调控表皮生长因子/β联蛋白（EGFR/β-catenin）信号通路影响骨髓瘤细胞增殖、凋亡和侵袭的机制。方法:qRT-PCR、Western blot检测细胞中miR-32-5p、CEBPA的表达水平;转染慢病毒至骨髓瘤细胞U266,MTT检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡水平;生物信息学预测miR-32-5p的靶基因,双荧光素酶报告基因、Western blot验证miR-32-5p与CEBPA的关系及在骨髓瘤细胞中的作用,Western blot检测miR-32-5p与CEBPA的表达对EGFR/β-catenin信号通路的影响。结果:与正常浆细胞比较,骨髓瘤细胞株H929、U266、IM-9、RPMI-8226中miR-32-5p表达水平显著增高,CEBPA mRNA和蛋白水平显著降低（P＜0.05）;与NC、anti-miR-con组比较,anti-miR-32-5p组miR-32-5p mRNA表达量显著降低,细胞凋亡率显著升高,24 h、48 h、72 h的OD值显著降低,细胞侵袭数目显著减少（P＜0.05）;TargetScan生物信息学预测显示,miR-32-5p与CEBPA 3' UTR存在结合位点,双荧光素酶报告实验、Western blot进一步证实miR-32-5p可与CEBPA直接结合负向调控CEBPA的表达;与NC、pcDNA-control组比较,pcDNA-CEBPA组CEBPA 表达量显著升高,24 h、48 h、72 h的OD值显著降低,凋亡率显著升高,细胞侵袭数目显著减少（P＜0.05）;与anti-miR-con组比较,anti-miR-32-5p组CEBPA蛋白表达量显著升高,EGFR、p-EGFR、β-catenin蛋白表达量显著降低;与anti-miR-32-5p+si-con组比较,anti-miR-32-5p+si-CEBPA组CEBPA蛋白表达量显著降低,EGFR、p-EGFR、β-catenin蛋白表达量显著升高（P＜0.05）。结论:骨髓瘤细胞的增殖、凋亡和侵袭受miR-32-5p和CEBPA的双重调控,miR-32-5p可靶向CEBPA调控EGFR/β-catenin信号通路影响骨髓瘤细胞的增殖、凋亡和侵袭。