补肾固本方对大鼠骨质疏松模型中PI3K/AKT/mTOR信号通路表达的调控研究

目的观察补肾固本方对去卵巢骨质疏松(osteoporosis,OP)大鼠骨组织中PI3K/AKT/mTOR信号通路的影响,探讨补肾固本方干预OP的作用机制。方法将100只SD大鼠随机分为5组:正常组(C组)、模型组(M组)、补肾固本方组(B组)、补肾固本方+PI3k受体特异性阻断剂LY294002组(B+L组)、PI3k受体特异性阻断剂LY294002组(L组),除正常组外,其余4组建立去卵巢大鼠OP模型。药物连续干预12周后,采用ELISA方法检测血清中E2、BGP、ALP水平,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测各组股骨组织中LC3、Beclin1、caspase-9 mRNA的表达情况,蛋白质印迹法(Western blot)检测各组股骨组织中PI3K、AKT、mTOR蛋白的表达。结果补肾固本方可显著增高OP大鼠血清E2水平,降低BGP、ALP水平,显著上调LC3、Beclin1表达水平,降低caspase-9、PI3K、p-AKT、mTOR的表达;而上述变化能够被PI3k受体特异性阻断剂LY294002所阻断,且其差异具有统计学意义(P0.05)。结论补肾固本方减少去卵巢后大鼠OP的发生,其机制可能与抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路及其下游基因蛋白表达有关。     

左、右归丸通过调节AMPK/mTOR通路抑制大鼠股骨成脂化的实验研究

目的基于AMPK/m TOR信号通路初步探讨左、右归丸对绝经后骨质疏松(postmenopausal osteoporsis,PMOP)大鼠成脂分化的调节机制。方法将60只雌性SD大鼠随机分为空白组(KB)、假手术组(SHAM)、模型组(OVX)、左归丸组(ZGW)、右归丸组(YGW)、补佳乐组(BJL)。除KB、SHAM组外,其余大鼠均摘除双侧卵巢,SHAM组大鼠摘除双侧卵巢周围等量脂肪,灌胃12周。应用数字化全身骨密度仪检测大鼠右侧股骨骨密度(bone mineral density,BMD),应用实时荧光定量PCR法检测大鼠右侧股骨PPARγ、AMPK、m TORC1 mRNA的表达,采用Western blot法检测大鼠右侧股骨PPARγ、C/EBPα、C/EBPβ蛋白的表达以及AMPKα、m TOR蛋白磷酸化水平。结果左、右归丸能明显升高PMOP大鼠右侧股骨BMD(P0.01),降低大鼠股骨成脂相关mRNA与蛋白的表达(P0.01或P0.05),降低AMPK mRNA的表达与蛋白磷酸化水平(P0.01),升高m TORC1 mRNA的表达与蛋白磷酸化水平(P0.01或P0.05);与ZGW组相比,YGW组PMOP大鼠右侧股骨BMD没有明显差异(P0.05),股骨成脂分化相关mRNA与蛋白的表达明显升高(P0.01),且AMPK mRNA的表达明显升高(P0.01),m TORC1 mRNA的表达与蛋白磷酸化水平降低(P0.01或P0.05)。结论左、右归丸通过AMPK/m TOR通路改善了PMOP大鼠股骨成脂分化过度,其作用机制可能与调节AMPK、m TOR mRNA的表达与蛋白磷酸化水平有关。     

蒲公英甾醇调控膀胱癌T24 细胞迁移与侵袭能力的作用及机制研究

目的:探索蒲公英甾醇对膀胱癌T24细胞迁移与侵袭能力的作用及机制。方法:体外培养膀胱癌T24细胞,在其中加入不同浓度(10、20、40μg/mL)蒲公英甾醇进行干预。采用划痕实验和Transwell小室法分别观察膀胱癌细胞迁移能力及侵袭能力;Western blotting实验考察细胞中SDF-1/CXCR4信号通路相关蛋白的变化;ELISA试剂盒检测细胞上清中基质金属蛋白酶(MMP)-2/9的水平。结果:蒲公英甾醇可抑制膀胱癌T24细胞的迁移与侵袭能力(P<0.05,P<0.01),降低细胞分泌MMP-2及MMP-9的能力(均P<0.05,P<0.01)。同时蒲公英甾醇能有效抑制膀胱癌T24细胞内基质细胞衍生因子-1(SDF-1)、CXCR4、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)及磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)的表达水平(P<0.05,P<0.01)。结论:蒲公英甾醇通过干扰SDF-1/CXCR4信号通过,下调Akt/mTOR的传导,削弱了细胞分泌MMP-2及MMP-9的能力,从而有效抑制膀胱癌T24细胞的迁移与侵袭。     

蓝萼乙素对三阴性乳腺癌 MDA-MB-231细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的:探讨蓝萼乙素对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、迁移及侵袭的影响及其作用机制。方法:体外培养人乳腺癌细胞MDA-MB-231,加入不同浓度(0、2、4、8μmol/L)蓝萼乙素干预处理,采用MTT法检测细胞增殖能力;划痕实验考察细胞迁移能力;Transwell小室法考察细胞侵袭能力;Western blotting法检测细胞内p38MAPK、p-p38MAPK、FOXO3a及上皮-间质转化(EMT)相关标志物(E-cadherin、Vimentin及N-cadherin)的表达水平。结果:蓝萼乙素浓度为2、4、8μmol/L时,细胞增殖率分别为(83.2±6.90)%、(70.72±6.53)%、(45.43±7.51)%,较空白对照组[(100.00±7.84)%]降低;细胞侵袭数量分别为(300.54±24.91)、(255.44±23.59)、(208.66±36.18),较空白对照组(368.44±28.32)降低;细胞迁移距离分别为(487.11±53.00)μm、(394.93±61.91)μm、(312.88±35.42)μm,较空白对照组[(559.37±75.77)μm]降低;p-p38MAPK表达量分别为(1.38±0.11)、(1.69±0.13)、(2.23±0.19),较空白对照组(1.00±0.09)增加;FOXO3α表达量分别为(1.40±0.16)、(1.97±0.31)、(2.44±0.26),较空白对照组(1.00±0.18)增加;E-cadherin表达量分别为(1.15±0.11)、(1.77±0.22)、(1.86±0.15),较空白对照组(1.00±0.11)增加;Vimentin表达量分别为(0.86±0.04)、(0.49±0.05)、(0.54±0.04),较空白对照组(1.00±0.04)减少;N-cadherin表达量分别为(0.66±0.07)、(0.58±0.08)、(0.42±0.04),较空白对照组(1.00±0.12)减少,差异均有统计学意义(P 0.05)。结论:蓝萼乙素可通过介导p38MAPK/FOXO3a信号传导有效干扰肿瘤细胞EMT进程,发挥其抑制三阴性乳腺癌细胞增殖、迁移及侵袭的作用。     

寻常型银屑病中医三证型形成与皮肤组织中JAK1/STAT3信号通路关系的研究

目的:探讨寻常型银屑病血热、血瘀、血燥证形成与皮肤组织中JAK1/STAT3信号通路的关系。方法:选取2013年10月至2014年10月东直门医院皮肤科门诊和病房收治的寻常型银屑病患者18例(严格中医辨证分为血热证、血瘀证、血燥证三型),正常人受试者6例,记录患者一般情况,用RT-PCR法检测各组受试者皮肤组织中IL-22R1、JAK1、STAT3、Cmyc、VEGF的mRNA表达差异。结果:检测24例受试者皮肤组织,IL-22R1、JAK1、STAT3、C-myc的mRNA表达相互间均呈正相关,差异有统计学意义(P0.05或P0.01);血热证患者皮损中,IL-22R1、JAK1、STAT3、C-myc的mRNA表达均明显高于正常人,差异有统计学意义(P0.01),血燥证IL-22R1、JAK1、STAT3的mRNA表达高于正常人,差异有统计学意义(P0.05)。结论:JAK1/STAT3信号通路的异常活跃,可能是银屑病血热证临床表现形成的重要因素;且JAK/STAT信号通路活化差异可能与血热证向血瘀、血燥证转变的过程相关。     

麻杏二陈三子汤对小儿哮喘急性发作的疗效及其对免疫机制的影响

目的:探讨麻杏二陈三子汤对小儿哮喘急性发作的疗效及其对免疫机制的影响。方法:选取2014年8月至2016年12月宝鸡市中医医院收治的因哮喘急性发作入院治疗的患儿90例,按照随机数表法将入组患儿分为对照组、观察组各45例。对照组患儿接受临床常规治疗,观察组患儿接受常规+麻杏二陈三子汤治疗。比较2组患儿的疗效及Th17/Treg细胞免疫、Th1/Th2细胞免疫水平的差异。结果:治疗后,观察组患儿的治疗总有效率高于对照组患儿(P0.05);观察组患儿外周血中Th17细胞比例、Th17/Treg比值低于对照组患儿,Treg细胞比例高于对照组患儿(P0.05);观察组患儿血清中Th1细胞因子IL-2、IFN-γ的含量高于对照组患儿,Th2细胞因子IL-4、IL-10的含量低于对照组患儿(P0.05)。结论:麻杏二陈三子汤治疗小儿哮喘急性发作,可有效提升整体疗效、优化机体免疫功能。     

纳米碳酸钙及脂质体包覆提高淫羊藿苷生物利用度的研究

目的:以纳米碳酸钙及脂质体作为药物包覆载体材料,制备淫羊藿苷碳酸钙纳米微球(ICA/CaCO_3)、淫羊藿苷固体纳米脂质体(ICA-SLN),并考察其提高淫羊藿苷(ICA)在大鼠体内生物利用度的作用。为ICA临床剂型的合理使用提供实验基础数据,奠定其进一步的开发基础。方法:分别采用恒温振摇装载法制备ICA/CaCO_3,超声乳化与高温熔融低温固化结合法制备ICA-SLN。并运用LC-MS-MS测定灌胃ICA、ICA/CaCO_3及ICA-SLN后ICA在大鼠体内不同时间点的血药浓度,采用DAS 2.1药动学软件对数据进行统计学处理。结果:通过LC-MS/MS测定血药浓度,DAS 2.1药动学软件计算统计后得到ICA组的半衰期与最大吸收浓度分别为(1.51±0.42)h、(82.9±12.37)ng/m L,ICA/CaCO_3组的半衰期与最大吸收浓度分别为(4.12±1.01)h、(51.1±31.35)ng/m L,ICA-SLN组的半衰期与最大吸收浓度分别为(2.15±0.39)h、(165±25.16)ng/m L。结论:ICA通过纳米碳酸钙及脂质体包附后与ICA原料药相比,ICA原料药在体内的生物利用度得到了进一步的提高。ICA/CaCO_3与ICA原料药相比,其体内的释放时间得到了一定的延迟。从促进口服药物体内吸收率方面,ICA-SLN较ICA原料药有了一定提高,同时也优于ICA/CaCO_3。实验表明ICA/CaCO_3可在一定程度上延缓ICA在大鼠体内的释放,ICA-SLN可在一定程度上提高ICA在大鼠体内的吸收率。     

HnRNP A2/B1与P53在肺癌患者痰中的表达

目的探讨HnRNP A2/B1和P53在肺癌患者痰中的表达。方法收集肺癌患者及正常对照者痰标本共38例(肺癌患者28例,良性对照10例),用Saccomanno法处理痰标本,免疫组化方法检测痰中HnRNP A2/B1蛋白及P53蛋白。结果痰标本中HnRNPA2/B1的总体阳性率为57%;HnRNP A2/B1的过表达与患者吸烟、性别、年龄、病理分型和疾病分期均无相关性。痰标本中P53的总体阳性率为53.5%,p53的突变与患者的吸烟、性别、年龄、病理分型和疾病分期均无相关性。结论两种方法阳性率差异无统计学意义,两者的吻合度有统计学意义。     

糖肾平对糖尿病肾病KKAy小鼠肾脏保护作用及对RhoA/ROCK信号通路影响的研究

目的：探讨糖肾平对糖尿病肾病（DiabeticKidneyDisease,DKD）KKAy小鼠肾保护作用及其对RhoA/ROCK信号通路的影响。方法：雌性10周龄SPF级KKAy小鼠60只,KK鼠料诱导10周建立DKD模型,随机分为模型组、厄贝沙坦组、糖肾平低（0.525g?kg-1）、中（1.05g?kg-1）、高（2.1g?kg-1）剂量组,10只雌性C57BL/6J小鼠为正常组。各治疗组灌胃给药,正常组、模型组灌胃等体积去离子水,每4周称体质量并测24h尿蛋白定量。第26周小鼠麻醉后摘眼球取血,称肾质量、测空腹血糖（FastingBloodGlucose,FBG）、血尿素氮（BloodUreaNitrogen,BUN）、血肌酐（Serumcreatinine,Scr）和甘油三酯（Triglyceride,TG）含量;HE、Mallory和PAS染色观察肾组织病理;免疫组化、原位杂交测肾组织转化生长因子-β1（Transforminggrowthfactor-β1,TGF-β1)、Ras同源基因家族成员A（RashomologgenefamilymemberA,RhoA）、Rho相关卷曲蛋白激酶（Rho-associatedcoiledcoil-containingproteinkinase1,ROCK1）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SmoothMuscleActin,α-SMA）、E-钙黏素（ECadherin,E-Cad）mRNA及蛋白表达。结果：与模型组相比,各治疗组体质量、肾质量/体质量、尿蛋白降低,糖肾平中、高剂量组有显著性差异（P＜0.01）;肾病理损害明显减轻,FBG、BUN、Scr、TG含量降低（P＜0.01）,ECadherinmRNA及蛋白表达增加,TGF-β1、RhoA、ROCK1和α-SMAmRNA和蛋白表达减少,糖肾平中、高剂量组差异显著（P＜0.01）。结论：糖肾平对DKDKKAy小鼠肾的保护作用及抑制肾小管上皮细胞转分化的作用,可能与调节RhoA/ROCK信号通路有关。     

筋骨草总环烯醚萜对乳腺癌干细胞特性的干预作用及其机制分析

目的:研究筋骨草总环烯醚萜(iridoids in Ajuga decumbens,ADI)对乳腺癌干细胞特性的干预作用及分子机制。方法:采用无血清悬浮微球体形成实验,transwell迁移和侵袭实验检测乳腺癌干细胞自我更新能力、运动和侵袭能力。流式细胞法分析CD44+CD24-/low细胞亚群比例。蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肿瘤干细胞干性相关蛋白,细胞外信号调节激酶(ERK)和磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(PKB或Akt)信号通路相关蛋白的表达。结果:5~80 mg·L-1ADI能浓度依赖性降低乳腺癌MCF-7细胞微球体形成的数量和体积,减少CD44+CD24-/low细胞亚群比例(P0.05,P0.01)。10~40 mg·L-1ADI对乳腺癌MCF-7干细胞的迁移和侵袭能力有明显抑制作用(P0.05,P0.01)。进一步研究发现,ADI能明显降低p-ERK,p-Akt,干性标志物八聚体结合转录因子-3/4(Oct-3/4),SRY相关的HMG盒转录因子-2(Sox-2)和胚胎干细胞转录因子(Ecat4或Nanog)蛋白表达(P0.05,P0.01)。结论:筋骨草总环烯醚萜能有效地抑制乳腺癌干细胞的自我更新和转移潜能等"干性"特性,作用机制可能与其调控ERK1/2丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)和PI3K/Akt信号通路,下调相关干性标志物表达有关。