丙型肝炎病毒聚合酶链反应直接序列分析方法的建立及应用(英文)

目的探讨快速完成丙型肝炎病毒ｃＤＮＡ（ＨＣＶｃＤＮＡ）序列分析的方法．方法将聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增与核酸序列分析技术相结合，以ＰＣＲ产物为测序模板，以ｒ３２ＰＡＴＰ标记ＰＣＲ扩增引物为测序引物，用ｔａｑＤＮＡ聚合酶直接测序．结果以琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶电泳回收ＰＣＲ产物制备测序模板可获得最佳测序效果．在需要测定大量标本时，为进一步简化操作步骤，可降低套式ＰＣＲ中第一次扩增反应的ｄＮＴＰ与引物浓度，以第一次ＰＣＲ扩增产物为模板，也可得到较好的测序结果。ＰＥＧ沉淀回收法不能去除非特异性ＰＣＲ产物，对ＰＣＲ直接测序有一定影响．采用此方法首次在一株ＨＣＶＮＳ５ｂ区发现一个新的缺失突变．结论ＰＣＲ直接序列分析是一种简便，快速，经济有效的核酸序列分析方法，适用于丙型肝炎病毒基因组的分析研究．     

大鼠部分肝移植后自体骨髓干细胞动员的研究

目的 探讨大鼠部分肝移植后骨髓干细胞动员的情况。方法 建立大鼠性别交叉部分肝移植模型，分为部分肝移植组、全肝移植组和假手术组，分别与术后1、3、5、7d取标本。用流式细胞法检测骨髓中干细胞标记的细胞群体的数量变化，荧光原位杂交检测移植肝脏内Y染色体特异的Sry基因的表达，免疫组织化学法检测移植肝脏内干细胞标志CD34，c—kit和Thy-1．1的表达。结果 与全肝移植组相比，部分肝移植组术后第1天，骨髓细胞中，β2微球蛋白（β2m）／Thy-1．1^＋，CD45^＋／CD34^＋有不同程度的升高，然后呈递减趋势。免疫组织化学检测汇管区和炎性灶周围可见CD34、c—kit和Thy-1．1单个核细胞表达，并于第5至7天后减少。同时免疫组织化学双染可检出CD34^＋／CD45^＋细胞。全肝移植组汇管区CD34、c—kit和Thy-1．1表达较少，假手术组CD34、c-kit和Thy-1．1偶见表达。在部分肝移植物可检出Sry^＋细胞，但Srg^＋／CD34^＋，Sry^＋／Thy-1．1^＋细胞较少。全肝移植组Sry^＋偶见。结论 部分肝移植中，骨髓源性的干细胞发生动员；同时肝内有干细胞被激活，其中外源性干细胞较少。     

树突状细胞的非特异性免疫功能降低对HBV、HCV清除及细胞毒性T淋巴细胞应答无影响

目的 观察HBV、HCV感染者树突状细胞(DC)的非病毒特异性免疫功能状态与细胞毒性T淋巴细胞(CTL)免疫应答以及病毒清除的关系。方法 对25例成人慢性HBV和HCV合并感染者进行了间隔8年的两次调查、依据临床转归分为HBV和HCV均清除组(A组)14例、单独HCV清除者(B组)6例，单独HBV消除者(C组)3例，HBV和HCV均未清除者(D组)2例，对照组(N组)为同一地区健康献血员11例。体外分离培养DC，检测其表型及抗原摄取功能、刺激异体淋巴细咆增殖能力和4组感染者的CTL免疫应答情况。结果 B、C、D组与A组、N组比较，DC的非病毒特异性免疫功能降低，表现为CD86表达的降低、刺激异体淋巴细胞增殖的能力下降以及抗原摄取能力降低。A组对HBV和HCV的4条抗原表位多肽均有较高的CTL应签率(11／12)；B组对HCV的两条抗原表位多肽均有应答(5／5)，但无对HBV两条表位多肽均应签者、仅有1例对P2有反应；C组对HBV的抗原表位多肽均有应答，但无对两条HCV表位多肽均应答者；D组及N组对HBV或HCV所有实验多肽均无应答。结论 HBV和HCV的清除与病毒特异性的CTL应答相关。HBV和(或)HCV持续存在可能是导致DC功能异常的原因。     

慢性丙型肝炎病毒感染的治疗:热点、难点和希望

2011年3月欧洲肝病年会发布新版《欧洲临床实践指南:丙型肝炎病毒感染的处理》的时候,聚乙二醇干扰素α(PEG-IFNα)联合利巴韦林(RBV)仍然是慢性丙型肝炎的标准治疗方案.但紧随其后,2011年5月两种直接抗HCV药物(direct acting antivirals,DAAs)在美国和欧洲陆续批准上市,即telaprevir和boceprevir两个蛋白酶抑制剂.2011年8月8日,JHepatol在线发表了法国Beaujon医院Asselah[1]撰写的述评,提出DAAs的迅速发展使在PEG-IFNα联合RBV的基础上加用DAAs(三联治疗)成为新的标准治疗方案.这一最新的进展显示了目前慢性HCV感染治疗的热点和随之带来的难点和希望.     

肝肾联合移植的单中心经验总结

目的 分析单中心肝肾联合移植(SLKT)的治疗效果.方法 1999-2010年间共实施SLKT 21例,患者的原发疾病分别为多囊病11例,病毒性肝炎后肝硬化合并肝肾综合征5例,慢性肾炎肾功能衰竭合并肝硬化2例,肾移植术后移植肾功能丧失合并肝硬化2例,肝炎后肝硬化合并糖尿病肾病1例.统计患者的资料,与同期同中心"中国肝移植注册网站"收录的肝炎后肝硬化行肝移植的133例(LT组)和"中国肾移植科学登记系统"收录的尸体肾移植609例(KT组)进行对比,分析各组受者术前状态和预后的差异.结果 SLKT组术前终末期肝病模型(MELD)评分为21.3±5.5,血肌酐为(516.0±329.9)mmol/L;LT组术前MELD评分为20.6±9.9,血肌酐为(111.4±138.1)mmol/L,与SLKT组相比较,血肌酐的差异有统计学意义(P＜0.01).SLKT组中,3例分别于术后2周、半年和5年因感染而死亡,1例因多器官功能衰竭而死亡,1例于术后5年自行停药,因排斥反应而死亡.SLKT组术后1年内移植肾急性排斥反应的发生率为零,KT组为6 %(P＞0.05).术后SLKT组移植肾功能延迟恢复的发生率为9.5 %,KT组为17.3 %(P＞0.05).SLKT组术后1、3和5年的受者存活率分别为87.7 %、67.8 %和67.8 %,LT组分别为84.2 %、73.5 %和69.4 %(P＞0.05).结论 SLKT是终末期肝、肾疾病的有效、安全的治疗方法.

Abstract：

Objective To analyze the curative effect of simultaneous liver and kidney transplantation (SLKT) for patients with end-stage liver and kidney diseases and liver cirrhosis patients with hepatorenal syndrome.Methods All SLKTs (n=21) performed at our center from January 1999 to December 2010 were reviewed and SLKT outcomes were compared with those of kidney transplantation (KT) (n=609) and liver transplantation (LT) (n=133) performed during the same period.Results There were 3 deaths due to infection 2 weeks, 6 months and 5 years respectively after operation. One patient died due to multiple organ dysfunction syndrome 2 weeks after operation. One patient was dead 5 years after operation because of rejection. MELD level between SLKT and LT had no significant difference, but serum creatinine in SLKT group was significantly higher than in LT group (516.0±329.9 vs 111.4±138.1 mmol/L, P<0.01). The 1-year acute kidney rejection rate and rate of delayed graft function (DGF) of the kidney had no significant difference between SLKT group (0 vs 9.5 %) and KT group (6 % vs 17.3 %). There was no significant difference in one-, 3- and 5-year patient survival rate between SLKT group (87.7 %, 67.8 % and 67.8 %) and LT group (84.2 %, 73.5 % and 69.4 %).Conclusion SLKT is a safe and effective treatment for end-stage liver and kidney diseases.     

羊膜移植与自体角膜缘干细胞移植治疗复发性翼状胬肉的临床分析

目的：比较翼状胬肉切除＋羊膜移植术和翼状胬肉切除＋自体角膜缘干细胞移植术治疗复发性翼状胬肉的临床疗效。方法：将95例102眼复发性翼状胬肉随机分为A、B两组,A组49眼行翼状胬肉切除＋羊膜移植术,B组53眼行翼状胬肉切除＋自体角膜缘干细胞移植术,术后随访8~24个月,观察两组疗效并进行回顾性分析。结果：A组复发11眼,复发率23.91%;B组复发3眼,复发率5.88%,两组比较差异具有统计学意义（χ2=4.99,P〈0.05）。结论：翼状胬肉切除＋自体角膜缘干细胞移植术治疗复发性翼状胬肉的疗效好于翼状胬肉切除＋羊膜移植术。     

Simultaneous liver-kidney transplantation:Single-center study

<正>Objective To analyze the curative effect of simultaneous liver and kidney transplantation ( SLKT) for patients with end - stage liver and kidney diseases and liver cirrhosis patients with hepatorenal syndrome. Methods All SLKTs ( n = 21) performed at our center from January 1999 to December 2010 were reviewed and SLKT     

某草甘膦生产建设项目职业病危害控制效果评价

目的对某草甘膦生产建设项目进行职业病危害控制效果评价,为卫生行政部门对项目职业病防护设施竣工验收提供科学依据。方法依据《建设项目职业病危害评价规范》主要采用职业卫生现场调查和检测,结合检查表、职业健康检查结果进行评价。结果该项目主要的危害因素为:黄磷、氯气、甲醛、甲醇。检测结果甲醛浓度为2.10~3.29 mg/m3,超过国家允许接触限值;噪声检测:真空站为88.7 dB(A)、循环水岗位为89 dB(A),均超过国家允许接触限值,其他检测指标符合卫生标准。结论该项目采取的各项职业病防护措施基本可行,但需加强对化学有害因素及噪声的职业病危害控制措施。     

我国医保制度整合的相关问题探讨

针对我国目前医疗保险制度存在碎片化状况,提出了医保制度整合中需要重点关注的几个问题：整合应以总体规划分步实施、立法保障稳步推进、公平优先兼顾效率为原则,分三个步骤进行;在筹资方面,应逐步实现强制参保,以家庭为参保单位,并以法律形式明确各级政府的筹资责任,设置分档次的居民筹资方式及合理的补偿机制;在管理上,应妥善整合经办管理机构,并通过立法明确基金监管和服务质量保障机制,确保监管有效、得力。     

细胞毒性T淋巴细胞对慢性乙型肝炎干扰素α抗病毒疗效的预测

目的 研究细胞毒性T淋巴细胞(CTL)是否可以作为慢性乙型肝炎干扰素抗病毒疗效的预测因素.方法 以穿孔素阳性淋巴细胞标记细胞毒性T细胞;分析125例注射干扰素治疗患者持续应答组及无应答组干扰素治疗前血清转氨酶、肝组织炎症分级、HBVDNA载量、肝组织纤维化程度分级,肝组织穿孔素阳性淋巴细胞数与干扰素疗效的相关性.结果 仅血清HBVDNA＜ 106拷贝/ml时,持续应答组及无应答组肝组织穿孔素阳性淋巴细胞数差异有统计学意义(P＜0.05).结论 血清HBVDNA＜ 106拷贝/ml时,肝组织穿孔素阳性淋巴细胞数可以作为慢性乙型肝炎干扰素抗病毒疗效预测因素.