BLZ945通过诱导巨噬细胞极化抑制恶性胶质瘤生长*

目的：探讨巨噬细胞集落刺激因子1 受体（CSF-1R）抑制剂BLZ945 对恶性胶质瘤生长的作用及其相关机 制。方法：30 只雄性5 ～ 6 周龄Wistar 大鼠随机分为恶性胶质瘤动物模型组（ 模型组）、BLZ945 低剂量治疗组（ 低 剂量组）和BLZ945 高剂量治疗组（ 高剂量组）,使用C6 胶质瘤细胞构建恶性胶质瘤动物模型。观察并记录动物 的生存率;治疗结束后处死大鼠,开颅取全脑,称取脑组织重量,测量并计算肿瘤体积;流式细胞术检测巨噬细 胞免疫表型;逆转录- 聚合酶链反应（RT-PCR）检测γ 干扰素（IFN-γ）和细胞因子信号转导抑制因子3（SOCS3） mRNA 的转录水平;酶联免疫吸附测定（ELISA）检测IFN-γ 和SOCS3蛋白表达水平。结果：BLZ945 可明显抑 制恶性胶质瘤的生长,并显著提高荷瘤鼠的生存率,诱导肿瘤微环境中的巨噬细胞向M1 型极化,上调肿瘤组织 IFN-γ 的表达,并下调SOCS3的表达。结论：BLZ945 通过调节IFN-γ 和SOCS3的表达,诱导巨噬细胞由M2 型 向M1 型极化,激活抗肿瘤免疫,进而抑制恶性胶质瘤的生长。     

抗Siglec-9抗体Fab段对LPS诱导的小鼠巨噬细胞炎症反应的作用研究

目的 初步探讨抗Siglec-9抗体Fab段在小鼠巨噬细胞上对LPS诱导的炎症反应的作用及其机制。方法 将小鼠巨噬细胞分为对照组、LPS组、LPS+Ab组、Ab组,采用实时荧光定量PCR技术检测TNF-α、IFN-β、IL-1、IL-6等炎性细胞因子的mRNA水平;采用ELISA检测炎性细胞因子的蛋白水平;通过Western blot初步探讨抗Siglec-9抗体Fab段影响炎性细胞因子表达量的作用机制。结果 与LPS组相比,抗Siglec-9抗体Fab段抑制炎性细胞因子的mRNA和蛋白水平,降低TLR4信号通路磷酸化水平。结论 抗Siglec-9抗体Fab段通过阻断TLR4信号传导通路抑制炎性细胞因子的m RNA和蛋白水平,在感染性疾病中具有潜在的应用价值。     

巨噬细胞中钙调蛋白2的缺失可缓解小鼠炎症性关节炎

目的研究探讨抑制巨噬细胞中钙调蛋白2的表达治疗炎症性关节炎的作用和相关机制。方法取野生型小鼠(wild type,WT)和钙调蛋白2敲除(knock out, KO)小鼠构建胶原诱导炎症性关节炎模型(collagen induced arthritis,CIA),检测炎症相关因子TNF-α、IL-1β、IL-6和TGF-β的mRNA及蛋白表达变化、小鼠足趾肿胀容积变化以及炎症组织细胞大小和增殖变化。进一步在293T细胞中检测钙调蛋白2和CCL3(macrophage inflammatory protein 1-α, MIP-1α)的结合情况。在骨髓单核巨噬细胞(bone marrow macrophages,BMMs)细胞中转染钙调蛋白2过表达和抑制慢病毒,检测钙调蛋白2潜在下游CCL3的表达。最后,使用抑制钙调蛋白2的慢病毒进行炎症性关节炎小鼠的治疗作用探索,进行上述病理性检测。结果荧光定量PCR和免疫印迹实验显示,钙调蛋白2 KO小鼠关节炎组织炎症因子分泌明显降低;足趾肿胀容积明显减小;炎症组织细胞明显变大,细胞增殖明显增多。荧光素酶实验和染色质免疫共沉淀实验结果显示,钙调蛋白2...     

内皮高表达脂多糖相关因子1抑制巨噬细胞炎症反应

目的 本实验旨在观察内皮高表达脂多糖相关因子1(endothelial overexpressed lipopolysaccharide-associated factor1,EOLA1)对巨噬细胞炎症反应的影响及可能机制。方法 培养小鼠巨噬细胞,脂多糖（lipopolysaccharide, LPS）刺激激活炎症信号通路,检测肿瘤坏死因子（TNF-α）、白介素6(IL-6)和EOLA1转录水平变化,采用化学阻断剂在不同位点阻断炎症反应信号通路,再检测TNF-α、IL-6和EOLA1转录变化。巨噬细胞过表达mEOLA1,RT-qPCR检测细胞M1、M2极化类型标志基因mRNA水平,以流式细胞术检测巨噬细胞表型改变,Western blot检测M1型巨噬细胞标记物iNOS表达。结果 LPS刺激后巨噬细胞释放炎症因子TNF-α、IL-6增加,而EOLA1表达下调;不同位点阻断炎症反应信号通路后炎症介质的表达明显受抑制,而EOLA1的表达上升;在巨噬细胞中高表达EOLA1,再行LPS刺激,检测到TNF-α、IL-6增加并不明显,流式细胞检测显示高表达EOLA1的巨噬细胞在LPS刺激后仍保持非...     

重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子乳酸链球菌表达载体的构建

目的:构建重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子乳酸链球菌表达载体,为进一步研究人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子在乳链菌的表达及其治疗价值奠定基础。方法:实验于2005-04/2006-03在南方医科大学南方医院消化病研究所完成。①载体pNCSF的构建:将质粒集落刺激因子及含有P59启动子、USP45蛋白信号肽的pNBC1000质粒分别加入BamH Ⅰ和Pst Ⅰ进行双酶切,并用Apa Ⅰ、Sac Ⅰ进行双酶切鉴定,重组质粒命名为pNCSF。②SDGFP的TA克隆及载体pNCSFGFP的构建:将经过优化适合在乳链菌表达的人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子基因克隆于含有P59启动子、USP45蛋白信号肽的pNBC1000载体,得到重组质粒pNCSF;同时设计上下游引物经PCR扩增增强荧光表达蛋白(EGFP),TA克隆后经测序验证,再连接于pNCSF获得重组质粒pNCSFGFP。③载体pTRCSF、pTRCSFGFP的建立:将获得的pNCSF和pNCSFGFP进一步克隆于穿梭载体pTR1001c,以获得人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子乳链菌表达载体pTRCSF及pTRCSFGFP。结果:①载体pNCSF构建结果:酶切鉴定产物经1.0%的琼脂糖凝胶电泳后,发现有(含启动子P59、信号肽USP45、人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子)720bp的目的片段。②SDGFP的TA克隆及载体pNCSFEGFP的构建结果:SDGFP阳性克隆产物经EcoRⅠ酶切鉴定得到775bp目的片段。pNCSFEGFP酶切鉴定产物经1.0%的琼脂糖凝胶电泳后,发现有(含启动子P59、信号肽USP45、人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子、SDGFP)1495bp的目的片段。③穿梭质粒pTRCSF、pTRCSFGFP酶切鉴定结果:经Xba Ⅰ、Sac Ⅰ进行双酶切鉴定,分别得到约717bp、1492bp大小目的片段。结论:获得了人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子乳链菌表达载体pTRCSF及pTRCSFGFP,并经酶切鉴定和测序证实。     

溶血磷脂与肾病相关研究进展

具有生物活性的溶血磷脂(lysophospholipids,LPLs)由活化的血小板,单核/巨噬细胞和许多其他类型的哺乳动物细胞产生,并在多个器官细胞的生长和功能上显示出不同的功能[1～3]。LPLs来源于细胞膜上的来自甘油或鞘氨醇的磷脂。溶血磷脂酸     

铁叶绿酸钠对正常小鼠祖细胞集落和实验性贫血的影响

目的：探讨铁叶绿酸钠（ＳＩＣ）对骨髓造血细胞的作用和对鼠实验性贫血的疗效。方法：用体外小鼠骨髓细胞培养技术及失血性贫血大鼠与溶血性贫血小鼠模型，观察ＳＩＣ对骨髓造血祖细胞增殖及实验性贫血的影响。结果和结论：①ＳＩＣ能明显促进正常小鼠骨髓红系祖细胞（ＣＦＵ－Ｅ）和粒－单核细胞系祖细胞（ＣＦＵ－ＧＭ）的增殖反应；②ＳＩＣ能提高正常小鼠外周血网织红细胞的百分比；③对乙酰苯肼所致小鼠溶血性贫血，ＳＩＣ可减轻外周血红细胞和血红蛋白的降低程度；④ＳＩＣ可促进失血性贫血大鼠红细胞、血红蛋白和网织红细胞恢复正常，并提高血清铁水平和转铁蛋白饱和度。上述结果为ＳＩＣ用于治疗贫血提供了药理学基础。     

湿热证大鼠模型TLR4mRNA、NF-κBp65表达的对比研究

目的:通过多因素复合造模方法,观察模型大鼠内毒素特异性受体TLR4mRNA及NF-κBp65表达变化,探讨湿热致病机制。方法:将大鼠分为正常组、湿热模型组(高脂 高温高湿 大肠杆菌)、模型对照组(高脂 高温高湿)3组,每组8只;采用逆转录-聚合酶链反应技术(RT-PCR)检测肝巨噬细胞TLR4mRNA,免疫组化技术检测肝巨噬细胞NF-κBp65活化。结果:在感染6h、12h、24h等不同时相点,湿热模型组TLR4mRNA、NF-κBp65表达与模型对照组、正常组比较均有非常显著增强(P<0.01);湿热模型组在6h、12h、24h等不同时相点,TLR4mRNA、NF-κBp65表达逐渐增强,且不同时相点之间比较均有显著性差异(P<0.05)。结论:靶细胞TLR4mRNA适量表达及NF-kB激活既是湿热病证的主要致病机理,又是湿热病证的相关性指标。     

PU.1与造血系统发育和造血系统疾病的关系

Ets家族的转录因子在造血细胞的生存、生长和分化方面起着重要的作用.而PU.1是Ets家族中最重要的转录因子.PU.1蛋白的C末端结合区域与Ets-1极其相似.与其他Ets家族转录因子一样,GGAA是PU.1的结合点.在体外,GAGGAA是PU.1的理想结合点.PU.1主要表达于造血细胞,包括CD34＋细胞、巨噬细胞、B淋巴细胞、中性粒细胞、肥大细胞和原始红细胞等.最近的研究表明,PU.1与中性粒细胞、巨噬细胞、巨核细胞、红细胞、成骨细胞、嗜酸细胞、树突细胞和肥大细胞等的发育、分化有着密切的关系,也与白血病、淋巴瘤的发生有关.对PU.1的研究是近年来的一个研究热点.     

抗登革病毒的天然免疫应答

登革热/登革出血热(DF/DHF)是热带地区最重要的蚊传播病毒性疾病,造成了非常严重的世界公共卫生问题.理解机体天然免疫应答对登革病毒感染的影响有重要意义.病毒入侵宿主细胞是感染过程的第一阶段,也是关键性的阶段,其过程所涉及的细胞蛋白鉴定与机制大部分仍然未知.间质性树突细胞(DCs)是登革病毒感染的靶细胞,也是机体天然免疫防御抗登革病毒入侵的第一道防线.在病毒感染早期.NK细胞分泌的Ⅰ型干扰素(IFN)非常重要.机体内有两个应答登革病毒感染的天然免疫通道,其中一个信号通道利用Toll样受体(TLR)家族成员,探测经细胞内吞作用进入的内涵体病毒,通过信号蛋白诱导IFN产生,并最终活化NF-κB,IRF7、IRF5等转录因子,另一个抗病毒通道则以维甲酸诱导基因Ⅰ(RIG-Ⅰ)作为细胞内识别病毒dsRNA的受体.但RNAi天然免疫通道在人类是否存在还有待进一步研究.