异黏蛋白及波形蛋白在食管鳞状细胞癌组织中的表达及其预后的关系

目的分析食管鳞状细胞癌(ESCC)患者异黏蛋白(MTDH)的表达水平,分析与上皮-间质转化(EMT)有关联的指标波形蛋白(Vimentin)的表达水平与ESCC预后的关系。方法采用组织芯片进行免疫组织化学染色,芯片中包含75对食管鳞癌癌组织标本,另含有与食管癌组织相对应的配对癌旁正常食管组织,以距离病灶3 cm为标准,另有30例食管癌组织为不成对的食管癌组织,所有食管癌组织和正常食管组织均来源于组织芯片。采用免疫组织化学SP法分别检测MTDH、Vimentin的表达情况,并且分析MTDH、Vimentin的表达与ESCC临床病理的关系,采用Kaplan-Meier法对MTDH与Vimentin不同表达水平的患者术后生存率的差异进行比较。用Spearman相关性分析MTDH与Vimentin表达水平之间的关系。结果在食管癌细胞中,MTDH的表达明显增多,正常食管上皮细胞中也有少量表达。阳性细胞大部分在胞质表达,在细胞核也有少量的表达,MTDH的阳性表达主要呈浅黄、棕黄色或褐色颗粒。经统计学分析后,MTDH在食管癌组织中的阳性表达率要明显高于配对癌旁正常食管上皮组织中的阳性表达率,差异有统计学意义(P<0.05)。MTDH的表达与临床病理参数关系显示,MTDH在食管癌中的表达与N分期(P=0.016)有关,具体体现在N 1~N 3分期MTDH阳性表达率明显高于N 0分期的患者。Vimentin在食管癌细胞中的表达较多,同时也可表达于少量正常食管上皮细胞,阳性细胞主要为胞质表达,呈褐色、棕黄色或浅黄颗粒。Vimentin在食管癌组织中的表达要明显高于配对癌旁正常食管组织,差异有统计学意义(P<0.05)。另外通过统计Vimentin与食管癌病理特征的关系显示,Vimentin在食管癌组织中的表达与T分期(P=0.019)及肿瘤的体积(P=0.040)有关。Kaplan-Meier法分析显示,MTDH高表达的患者生存时间越短,差异有统计学意义(P<0.05),而高表达Vimentin患者和低表达Vimentin患者二者生存率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。Spearman相关性分析结果显示,MTDH与Vimentin在ESCC组织中表达水平呈正相关(r=0.218,P=0.019)。结论MTDH和Vimentin的表达增加可能与食管癌的发生、发展及肿瘤细胞浸润转移密切相关。MTDH对食管癌术后患者判断预后,可能有一定的作用。     

基于Wnt/β-catenin信号通路探讨复方土贝母对裸鼠乳腺癌移植瘤的影响

[目的]研究复方土贝母对裸鼠乳腺癌移植瘤生长以及对Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的影响。[方法]40只4～5周龄雌性BALB/C裸鼠皮下接种1×10~7/mL MCF-7细胞悬液0.2mL/只,造模后随机分为荷瘤对照组、复方土贝母低、中、高剂量组。复方土贝母各剂量组分别以0.5、1.0、2.0g·m L~(-1)的复方土贝母连续灌胃30d,对照组予0.9%氯化钠溶液灌胃,灌胃容积均为0.6mL/20g。所有小鼠第30天处死,测量各组移植瘤体积,并计算抑瘤率。实时荧光定量PCR检测β-连环蛋白(β-catenin)、E-钙粘蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)mRNA表达水平,Western blot和免疫组化检测β-catenin、E-cadherin、Vimentin蛋白表达水平。[结果]复方土贝母低、中、高剂量组抑瘤率分别为10.56%、37.06%、33.17%,中、高剂量组移植瘤体积小于荷瘤对照组,差异有统计学意义(P0.05),复方土贝母各剂量组的β-catenin、Vimentin m RNA表达低于荷瘤对照组,E-cadherin mRNA表达高于荷瘤对照组,差异有统计学意义(P0.05)。中、高剂量组β-catenin、Vimentin蛋白表达低于荷瘤对照组,E-cadherin蛋白表达高于荷瘤对照组,差异有统计学意义(P0.05)。[结论]复方土贝母能抑制乳腺癌移植瘤的生长,可能与抑制肿瘤中β-catenin、Vimentin的表达,上调E-cadherin表达有关。     

八株小鼠胸腺基质细胞系的建立及鉴定

应用改良的长期培养法,建成8株小鼠胸腺基质细胞(MTSC)系,其中7株为胸腺上皮样细胞(MTEC)系(表达角蛋白桥粒及张力丝),1株为胸腺树突状细胞(MTDC)系(不表达角蛋白、桥粒及张力丝,但表达波形蛋白及S-100蛋白)。各株细胞生长稳定、倍增时间界于17.1～34.8小时之间。按特异MCAb鉴定,多数MTEC系来源于胸腺髓质及皮-髓质的上皮细胞。按染色体数目定,其中2株近似正常上皮细胞,其余6株均为转化细胞,但电镜下无可见病毒颗粒。     

卵圆细胞对肝损伤的修复作用及机制探讨

目的研究卵圆细胞在肝损伤中的修复作用,并对其可能的作用机制进行初步探讨。方法清洁级SD大鼠50只随机分为正常对照组(20只)和模型组(30只),两组均于实验第5周取肝组织进行常规病理、透射电镜,免疫组化检测波形蛋白(vimentin)和增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达,半定量RT-PCR方法检测Notch1、RBP-Jκ、HES1mRNA表达。结果正常对照组大鼠肝组织学形态正常,偶见vimentin和PCNA阳性细胞,Notch1、RBP-Jκ、HES1mRNA低表达;模型组主要于汇管区发现大量卵圆细胞,电镜下可见卵圆细胞的特征性表现张力微丝和桥粒连接,免疫组化示vimentin和PCNA阳性细胞明显增加(P<0.01),Notch1、RBP-Jκ、HES1 mRNA表达显著上调(P<0.01)。结论卵圆细胞在肝损伤修复中可能发挥重要作用,其作用机制与Notch家族有关。     

局部高温对青春期前大鼠睾丸支持细胞波形蛋白的影响及其与生精细胞凋亡的关系

目的:探讨局部高温对青春期前大鼠睾丸支持细胞波形蛋白表达和分布的影响及其与生精细胞凋亡的关系。方法:选取青春期前SD大鼠40只,随机分为对照组8只和实验组32只,实验组按热处理后2、4、12、24h均分成4个亚组;通过对睾丸局部高温(43℃水浴15min)处理,对照组以22℃水浴15min处理,采用组织化学和免疫组化方法,分析高温对青春期前大鼠生精小管细胞形态结构、支持细胞波形蛋白表达与分布的影响,采用TUNEL法检测各组生精细胞凋亡情况。结果:与对照组比较,高温处理后2h及4h即可见生精细胞与支持细胞发生分离,且自基膜脱落至管腔,数目逐渐增多;免疫组化发现,对照组波形蛋白沿基膜形成环样并随支持细胞胞质向管腔伸展分布,2h组波形蛋白围绕支持细胞核周分布,伸至管腔的蛋白表达减少或消失,其表达量与对照组比较无差别,12h及24h组与对照组比较差异有显著性(P<0.01);凋亡检测表明,12h及24h组生精细胞凋亡明显增加,而2h及4h组生精细胞凋亡与对照组比较反而减少。结论:高温可导致支持细胞波形蛋白的表达增多及分布变化,其改变与生精细胞凋亡有密切关系,高温可能通过直接作用于支持细胞而破坏生精过程。     

上皮-间质转化相关标志物对鼻咽癌远期疗效预测的意义

目的探讨上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关标志物神经钙粘连素(N-Cadherin)、上皮钙粘连素(E-Cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和Twist在鼻咽癌肿瘤组织中的表达,及其对鼻咽癌复发、转移和预后的意义。方法采用免疫组织化学方法检测77例鼻咽癌组织标本中的E-Cadherin、N-Cadherin、Vimentin和Twist蛋白表达。通过计算机辅助图像分析系统定量分析各EMT相关标志物的表达情况。采用单因素和多因素分析方法评估上述标志物对鼻咽癌复发、转移的预测价值。结果单因素分析显示,E-Cadherin、N-Cadherin、Vimentin和Twist蛋白表达与鼻咽癌复发、转移相关(P<0.05)。多因素分析显示,E-Cadherin和Vimentin是影响鼻咽癌复发、转移的独立风险因素。采用Kaplan-Meier法进行生存分析并作生存曲线。Log-rank检验显示,肿瘤组织内E-Cadherin、N-Cadherin、Twist低表达与高表达患者间生存率均有显著差异(P<0.05),而Vimentin高表达与低表达患者间生存率差异不显著(P=0.055)。结论 E-Cadherin、N-Cadherin、Vimentin和Twist蛋白与鼻咽癌转移、复发密切相关。EMT相关标志物对鼻咽癌侵袭、转移和预后有一定的预测价值。     

波形蛋白与层粘连蛋白在人胚早期神经管中的表达

目的观察层粘连蛋白（LN）和波形蛋白（Vim）在人胚早期神经管发育中的表达变化,探讨人胚神经管发育早期细胞微环境的特点。方法收集早期人胚23天和45天标本8例,分别用LN和Vim抗体对人胚标本的组织切片行免疫组织化学ABC法染色。图像分析不同观测指标阳性细胞的积分光密度值,结果用t检验进行统计分析。结果人胚发育早期,LN和Vim在神经管的神经上皮层、中间层和边缘层的神经细胞胞中表达。在神经管发育到23天时,LN的积分光密度值（1258．17±635）比Vim的积分光密度值（2611．34±502）低（P〈0．05）。结论在人胚早期,神经管的细胞基质成分以Vim为主,LN为辅,可能对神经干细胞的发育有重要作用。     

抗突变型瓜氨酸波形蛋白抗体对类风湿关节炎诊断的研究进展

类风湿关节炎（RA）是一种慢性、进行性自身免疫性疾病,RA患者血清中可检测到多种自身抗体,包括类风湿因子（RF）、抗环瓜氨酸肽（CCP）抗体和抗突变型瓜氨酸波形蛋白（MCV）抗体等.     

高糖诱导肾小管上皮细胞转化的作用

目的观察高糖诱导肾小管上皮的转化,以及转化生长因子13,（TGF-β1）和信号转导蛋白（Smad）受体激活锚定蛋白（SARA）的变化。方法建立高糖诱导肾小管上皮细胞（HKC）转化模型,高糖处理HKC0、12、24、48h后提取总蛋白,Westernblot法检测波形蛋白、钙黏附蛋白、TGF—β1、SARA和Smad2蛋白的表达。结果Westernblot法检测高糖处理HKC0、12、24、48h后,钙黏附蛋白的相对表达量分别为1．13±0．31、0．74±0．1g、0．63±0．18、0．32±0．12,各组之间两两比较差异均有统计学意义（P均〈0．05）;波形蛋白相对表达量分别为0．23±0．09、0．34±0．04、0．83±0．15、1．02±0．22,各组之间两两比较差异均有统计学意义（P均〈0．05）;TGF—B1蛋白的相对表达量分别为0．25±O．08、0．44±O．12、0．72±0．21、0．92±0．28,各组之间两两比较差异均有统计学意义（P均〈0．05）;SARA蛋白的相对表达量分别为0．83±0．21、0．54±0．13、0．42±0．09、0．35±0．12,各组之间两两比较差异均有统计学意义（P均〈0．05）;Smad2蛋白的相对表达量分别为1．14±0．22、0．82±0．15、0.61±0．17、0．30±0．13,各组之间两两比较差异均有统计学意义（P均〈0．05）。结论高糖可诱导HKC转化,TGF—β1通路的激活可能是其主要的作用机制,SARA蛋白的下调和继发的Smad2蛋白降解协同了TGF—β1通路的致纤维化作用。     

IgA肾病系膜细胞肌成纤维细胞表型转化与病理分级、肾功能相关性分析

目的:检测IgA肾病肾小球内α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及波形蛋白等细胞骨架蛋白表达,探讨IgA肾病系膜细胞肌成纤维细胞表型转化与病理分级、肾功能关系.方法:对63例肾穿刺病理诊断为IgA肾病患者,回顾其临床资料及病理改变,通过免疫组织化学显色检测α-SMA及波形蛋白在肾小球的表达.参考Cockcroft-Gault公式计算肾小球滤过率(GFR).结果:α-SMA、波形蛋白在IgA肾病标本中均100％阳性表达,α-SMA及波形蛋白在肾小球内的表达呈正相关关系.α-SMA、波形蛋白表达与WHO分级、Katafuchi氏肾病积分及GFR均呈正相关关系.在与GFR相关性方面,α-SMA高于波形蛋白.结论:α-SMA可作为评估IgA肾病患者肾病变严重程度的分子生物学指标.