慢性乙型肝炎患者外周血CD8~+T淋巴细胞亚群T淋巴细胞受体β链互补决定区3谱型研究

目的 研究慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血CD8+T淋巴细胞亚群T淋巴细胞受体(TCR)β链Ⅴ区(BV)中互补决定区3(CDR3)谱型特点.方法 采集8例CHB患者(ALT>2倍正常值上限)的抗凝血,分离外周血单个核细胞,磁珠分选CD8~+T淋巴细胞亚群,提取RNA并应用逆转录-聚合酶链反应扩增TCR BV中CDR3基因的24个家族,采用免疫指纹技术进行TCRBV各家族基因扫描和谱型分析.不同细胞亚群间数据比较采用配对t检验.结果 8例患者外周血淋巴细胞TCR BV家族CDR3谱型发生明显偏移,表现为单克隆性,寡克隆性及偏峰性克隆增生.8例患者CD8~+T淋巴细胞亚群发生TCR BV CDR3谱型偏移家族总个数高于去除CD8~+T淋巴细胞群的外周血单个核细胞[(10.6±4.7)个比(4.1±3.1)个,t=6.619,P<0.01)];比较单、寡克隆增生2种形式偏移的家族,CD8+T淋巴细胞亚群也高于代表CD4+T淋巴细胞的去除CD8~+T淋巴细胞群的外周血单个核细胞[(8.8±4.5)个比(3.9±2.8)个,t=5.706,P<0.01].对其中3例患者磁珠分选前后TCR BV谱型的比较发现,分选后CD8+T淋巴细胞亚群发生TCR BV谱型偏移家族数均高于分选前.结论 通过淋巴细胞亚群分选方式分析TCR BV家族CDR3谱型变化可以减少不同淋巴细胞亚群之间的峰型重叠干扰;应用这一方法分析外周血CD8~+T淋巴细胞亚群克隆增生程度有助于了解CHB患者炎症的发生机制.     

丙型肝炎患者HCV—1bISDR序列对干扰素疗效的影响

目的探讨HCV．1b非结构蛋白NS5A干扰素敏感决定区（ISDR）对干扰素治疗丙型肝炎疗效的影响。方法收集18例慢性丙型肝炎患者治疗前后血清,用RT-nested PCR、SSCP法直接测序得出HCV—1b ISDR序列并进行分析。结果18例患者1b ISDR序列为野生型9例,中间型6例,突变型3例。仅2例突变型用IFN治疗发生完全反应（P〈0．05）。而IFN治疗前HCV-RNA水平及γ-GT／ALT值与IFN疗效无关（P〉0．05）。结论HCV-1b ISDR序列可作为预测IFN疗效的指标。     

慢性乙型肝炎患者外周血及肝组织中T淋巴细胞受体β链互补决定区3谱系分析

目的 分析慢性乙型肝炎(CHB)患者外周血及肝组织T淋巴细胞受体(TCR)β链各家族互补决定区3(CDR3)谱系的变化,了解CHB患者T淋巴细胞克隆增生的情况.方法 采用荧光定量PCR(FQ-PCR)溶解曲线法分析4例健康对照者及11例CHB患者外周血单个核细胞(PBMC)及肝组织T淋巴细胞受体β链可变区(TRBV)基因各家族CDR3谱系漂移情况,比较11例CHB患者TCR β链可变区各家族外周血及肝组织CDR3谱系漂移异常率.率的比较采用卡方检验.结果 11例CHB患者PBMC及肝组织TRBV各家族CDR3溶解曲线谱型图出现数量不等、形态不一的单峰、寡峰、偏峰及极低水平或缺失等现象,肝组织TRBV家族CDR3的谱系漂移异常率明显高于外周血的异常率(x2=23.246,P＜0.01),在同一患者的外周血及肝组织中发现部分相同的TRBV亚家族表达,TRBV13.1、BV17和BV22同时被多例CHB患者的外周血及肝组织限制性取用.结论 CHB患者PBMC及肝组织中的T淋巴细胞均存在不同程度的克隆增生,部分TRBV亚家族被多例CHB患者外周血及肝组织同时限制性取用.     

“荧光定量PCR溶解曲线法”监测人TCRβ链CDR3谱系漂移技术的建立

目的 建立"荧光定量PCR溶解曲线分析技术"监测人外周血T细胞TCR β链CDR3谱系漂移(单/寡/多克隆增生).方法 提取4例正常人、9例大肠癌患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell-PBMC)中的总RNA,逆转录成cDNA,以26个人TRBV基因家族设计上游引物,共同的TRBC基因设计下游引物,荧光定量PCR(FQ-PCR)扩增26个TRBV基因各家族CDR3谱系,溶解曲线法分析各家族CDR3谱系的单/寡/多克隆增生.结果 正常人外周血T细胞TCR β链26个家族CDR3表达频率不一致,各家族PCR产物的"溶解曲线谱型图"(melting curve spectratyping)呈现溶点不同的CDR3多态性,为多克隆增生的高斯分布;9例大肠癌患者的外周血TCR β链CDR3谱系的26个家族CDR3表达频率不一致,有的患者部分家族呈缺失状态,患者各家族PCR产物的"溶解曲线谱型图"上,多数家族为多克隆增生的高斯分布,但每个患者均出现数量不等的单克隆和寡克隆增生家族.结论 "荧光定量PCR溶解曲线分析TCR CDR3谱系漂移技术",方法稳定简便,能较好的监测正常人和临床样本外周血T细胞TCR β链CDR3谱系漂移(单/寡/多克隆增生).     

6σ标准在临床生化质量管理中的应用

目的应用6σ标准分析临床生化检验质控数据,评价常规检验项目的方法性能,改进检验质量。方法收集2012年度临床生化检验项目室内质量控制及室间质量评价数据;按照美国临床实验室改进修正法案中允许总误差（TEa）标准,采用公式σ=（TEa-Bias）/CV%,计算各检验项目的总分析性能σ值,联合方法性能决定图,评价分析性能,设计最佳室内质量控制方案,提出并实施改进措施。结果全部22个常规生化检测项目平均西格玛值2.83,其中12个质量水平大于3σ,其余10个项目均小于3σ,存在较严重的质量缺陷,采取质量改进措施后σ值明显提高。结论 6σ质量标准的应用,有助于了解和提高临床生化检验质量水平,是一项有效的实验室质量管理工具。     

执行力决定医院沉浮

同一家管理顾问公司为两家医院做营销策划,却出现了大为不同结果：一家医院因此而患者盈门,另一家医院却依旧在老路上徘徊。     

环丙沙星敏感性降低甲型副伤寒沙门菌喹诺酮耐药决定区基因突变分布特征

目的比较研究环丙沙星敏感性降低甲型副伤寒沙门菌的喹诺酮耐药决定区（QRDR）的基因突变分布特征。方法对临床分离甲型副伤寒沙门菌QRDR基因进行扩增和测序分析,比较环丙沙星敏感性降低菌株与环丙沙星敏感菌株QRDR基因突变点差异。结果环丙沙星敏感性降低甲型副伤寒沙门菌QRDR基因存在较明显的突变特征,其中gyrA的Ser83及parC的Thr57位点突变占主导（分别占78.3%和91.3%）,Ser83位点突变率与敏感株相比存在明显差异。结论喹诺酮耐药决定区的基因突变可能是导致甲型副伤寒沙门菌对环丙沙星敏感性降低的原因之一。     

巢蛋白及性别决定基因高迁移率组蛋白在SAMP8小鼠穹窿下器的表达及其意义

目的 观察巢蛋白（Nestin）与性别决定基因高迁移率组蛋白(SOX2)在快速老化小鼠SAMP8穹隆下器（SFO）中的表达。 方法 成年8月龄SAMP8小鼠设为实验组,采用免疫组织化学和免疫组织化学荧光染色的方法观察Nestin及SOX2在穹隆下器中的表达,同时设正常老化小鼠SAMR1对照。结果 Nestin免疫组织化学染色发现,对照组免疫阳性细胞呈突起分布,放射丝状表达;实验组免疫阳性细胞染色深,丝状结构粗大,在血管周围密集分布,阳性细胞百分比（49.17±7.60）%较对照组阳性细胞百分比（16.33±4.41）%明显增多,差异有统计学意义（P＜0.01）。SOX2免疫组织化学染色,对照组免疫阳性细胞散在分布,染色深浅不一;实验组大部分阳性细胞染色较深,在血管周围密集分布;阳性表达细胞百分比（62.17±20.27）%较对照组阳性表达细胞百分比（36.00±16.20）%明显增多,差异有统计学意义（P＜0.05）。荧光双标染色,对照组SOX2散在分布,其间可见Nestin阳性表达,室管膜下区可见少量SOX2/Nestin双表达细胞。实验组阳性表达强烈,SOX2/Nestin双表达细胞增多。结论 Nestin及SOX2在快速老化小鼠SAMP8穹隆下器的表达明显增强,表明阿尔茨海默病（AD）在一定时期可能引起穹隆下器神经干细胞/祖细胞的增殖或分化增强,进而可能影响穹隆下器的神经生发功能。     

Numb蛋白与宫颈病变类型及高危型HPV负荷量的关系

目的探讨细胞命运决定子（Numb）蛋白表达与宫颈病变类型、高危型人乳头状瘤病毒（hr-HPV）负荷量的关系。方法选择宫颈病变患者的宫颈病变组织石蜡切片63例份,其中慢性宫颈炎13例份、CINⅠ～Ⅱ13例份、CINⅢ16例份、宫颈癌23例份,采用HC-2法检测宫颈病变组织中hr-HPV负荷量,采用免疫组化染色法检测各病变宫颈组织中Numb蛋白的表达情况。按照hr-HPV负荷量为〈2.00、2.00～3.00、〉3.00 lg RLU/CO水平将全部宫颈病变组织分为三个水平,分析hr-HPV负荷量为〈2.00、2.00～3.00、〉3.00 lg RLU/CO的宫颈病变组织中Numb蛋白的表达情况,分析Numb蛋白表达与hr-HPV负荷量的相关性。结果慢性宫颈炎、CINⅠ～Ⅱ、CINⅢ及宫颈鳞癌组织中Numb蛋白的阳性率分别为7.69%（1/13）、9.09%（1/11）、51.25%（5/16）及47.83%（11/23）,慢性宫颈炎、CINⅠ～Ⅱ组织中Numb蛋白的阳性率低于CINⅢ及宫颈鳞癌组织（P〈0.05）。hr-HPV负荷量为〈2.00、2.00～3.00、〉3.00 lg RLU/CO的宫颈病变组织中Numb蛋白阳性率分别为19%（4/22）、44%（6/25）、50%（8/16）,宫颈病变组织中Numb蛋白表达与hr-HPV病毒负荷量呈正相关（r=0.345,P〈0.05）。结论随着宫颈病变程度的加重,Numb蛋白表达逐渐增加。宫颈病变组织中的hr-HPV感染负荷量与Numb蛋白表达呈正相关关系。     

葡萄膜炎患者外周血TCR Vα谱系多态性分析

目的 探讨葡萄膜炎患者外周血T细胞受体α链可变区互补决定区3 (TCR Vα CDR3)谱系特点及多态性.方法 采用RT-PCR扩增葡萄膜炎患者外周血单个核细胞(PBMC)中TCR Vα 34个亚家族,经免疫扫描谱型技术分析34个亚家族谱型.结果 5例正常健康人PBMC TCR Vα CDR3谱型多数呈高斯分布,4例葡萄膜炎患者外周血T细胞均出现多个TCR Vα亚家族谱型的异常改变,异常峰型包括单峰、寡峰/寡峰趋势,偏峰和不规则异常蜂型.34个TCR Vα亚家族中,不同亚家族异常峰型出现的频率不同,非正态异常峰型出现频率较高的亚家族有Vα13和Vα17(均为3/4),而Vα1.1、Vα10、Vα20、Vα28和Vα28亚家族均未出现异常峰型.TCR Vα7在HLA-B27阴性的患者(U2)中出现异常峰型,在HLA-B27阳性的3个患者(U1、U3、U4)中并未出现这个亚家族的异常;TCR Vα13则相反,即在HLA-B27阳性的3个患者中均出现异常峰型,而在HLA-B27阴性的患者中正常.结论 葡萄膜炎患者PBMC TCR Vα CDR3谱系具有显著多态性特点,单/寡克隆增生的T细胞有可能是葡萄膜炎发病中的自身反应性T细胞.