近交系豫医无毛小鼠微卫星DNA多态性分析

目的:研究微卫星DNA多态性在豫医无毛小鼠等近交系小鼠遗传监测中的应用.方法:选取小鼠不同染色体上的18个微卫星位点(D3Mit17、D3Mit18、D3Mit15、D3Mit21、D3Mit22、D6Mit192、D6Mit81、D6Mit36、D6Mit149、D16Mit4、D7Nds1、D2Nds3、D3Mit16、D3Mit85、D3Mit41、D4Mit2、D5Mit66、D7Mit164),应用PCR技术对7个近交系小鼠(豫医无毛小鼠、BALB/C、C57、CBA、DBA/2、C3H/HeJ、FVB/NJ)进行了微卫星多态性分析.结果:18个微卫星DNA具有稳定扩增效果.不同品系个体之间11个位点(D3Mit17、D3Mit18、D3Mit15、D3Mit21、D3Mit22、D6Mit192、D6Mit81、D6Mit36、D6Mit149、D16Mit4、D7Nds1)具有多态性,其中5个位点(D6Mit36、 D6Mit81、 D16Mit4、D6Mit149、D7Nds1)具有显著多态性;同一品系不同个体之间表现为单态性.结论:所检测的小鼠符合近交要求,运用筛选出的11个位点(D3Mit17、D3Mit18、D3Mit15、D3Mit21、D3Mit22、D6Mit192、D6Mit81、D6Mit36、D6Mit149、D16Mit4、D7Nds1)进行微卫星多态性分析,能够快速、经济地对近交系小鼠进行品系鉴别和遗传背景监测.同时也反映了近交系豫医无毛小鼠与其他品系小鼠之间亲缘关系的远近.     

不同月龄近交系五指山小型猪免疫器官的组织形态学

目的对不同月龄近交系五指山小型猪免疫器官组织特点进行观察,为其用于建立人类免疫相关疾病模型提供基础形态学资料。方法2、4和12月龄小型猪免疫器官被分别固定,常规石蜡切片、HE染色,光镜观察。结果4月龄前,胸腺内胸腺细胞和胸腺小体的数量均随年龄的增长逐渐增多;12月龄时,胸腺细胞数量有所减少,排列比较疏松,胸腺小体的数量和体积基本没有变化;2月龄时胸腺小体周围可见许多大小不同的空泡状细胞和细胞碎片。4月龄前,脾白髓动脉周围组织淋巴鞘和脾小结在也随年龄增长而逐渐增多增大,但12月龄时有所减少并维持在一定水平,其变化与大鼠和鸡的基本一致。2月龄淋巴结皮质靠内,髓质靠外,4月龄两者分界不明显,12月龄淋巴小结较大,淋巴细胞排列疏松,髓质内淋巴细胞较少,毛细血管增多。结论从整体结构上观察,近交系五指山小型猪免疫器官的组织学结构与人和其它哺乳动物之间没有明显的差异。     

雷公藤甲素对变应性接触性皮炎小鼠淋巴细胞凋亡机制研究

目的:探讨雷公藤甲素在变应性接触性皮炎(ACD)小鼠淋巴细胞凋亡中的作用机制。方法:以二硝基氯苯制作ACD小鼠模型,体外培养淋巴细胞,分别以0.1、1.0、10μmol/L(低、中、高浓度组)雷公藤甲素作用后,采用流式细胞仪检测细胞Fas表达,Caspase-8浓度,RT-PCR方法检测Bax mRNA表达。结果:不同3个甲素浓度组体外培养的ACD小鼠淋巴细胞Fas表达均高于对照组,且随浓度增加Fas表达水平逐渐升高。高浓度组及中浓度组雷公藤甲素对体外培养ACD淋巴细胞Caspase-8表达均高于对照组及低浓度组。雷公藤甲素组ACD小鼠体外培养的淋巴细胞Bax表达显著高于对照组,药物各浓度组间差异缺乏规律性。结论:雷公藤甲素可以通过提高Fas表达、升高胞浆内蛋白水解酶的活化Caspase-8水平的浓度、诱导Bax mRNA基因的表达,诱导细胞的凋亡。     

建立近交系大鼠肝移植急性排斥模型的体会

目的:探讨近交系大鼠原位肝移植模型的建立并判断排斥反应发生的强度.方法:采用Kamada二袖套法,利用封闭群大鼠SD和Wistar进行建模技能训练,在此基础上建立近交系大鼠DA→LEW肝移植模型,根据临床表现和Banff标准判断排斥反应发生的强度.结果:共施行DA→LEW大鼠肝移植模型15例,手术成功率86.7%,死亡原因为肝上下腔静脉漏血、肝下下腔静脉血栓、胆道梗阻.术后第3天开始出现Ⅰ级排斥反应,7 d以后逐渐达到高峰,除术后并发症致死外,剩余均在12 d内死于Ⅲ级排斥反应.结论:DA→LEW为稳定、强烈的大鼠肝移植急排模型,是研究肝移植排斥及免疫耐受的理想动物模型.但近交系大鼠在组织结构上有其自身特点,给建模带来一定难度.     

微卫星DNA多态性在近交系长爪沙鼠遗传检测中的应用

目的监测近交系长爪沙鼠的遗传质量状况，验证微卫星标记技术在近交系长爪沙鼠遗传检测中应用的可靠性。方法选取长爪沙鼠17个微卫星位点，应用PCR技术对日本国家实验动物中心（NIBIO）培育而成的3个近交系长爪沙鼠品系：MGB（白毛品系）、MGW（黑毛品系）、MGR（毛色为棕色），进行遗传质量分析。结果在所选的17个微卫星位点中，共有8个位点获得稳定的扩增结果，其中AF200941、AF200945、AF200946、D11Mit128和SCN五个位点在群体内表现为单态纯合，片段大小在140～215bp之间；AF200942、AF200946和AF200947三个位点在群体内表现为单态杂合，片段大小在203～241bp之间，所有位点在群体内和群体间均呈单态性。结论这3个长爪沙鼠品系基本符合近交系的要求，微卫星标记技术适用于近交系长爪沙鼠的遗传检测。     

膳食诱导肥胖抵抗大鼠下丘脑NPY mRNA及蛋白的表达

目的研究膳食诱导肥胖(DIO)及肥胖抵抗(DIO-R)大鼠下丘脑弓状核神经肽Y mRNA及蛋白表达情况,探讨神经肽Y与肥胖抵抗的关系。方法高脂饮食建立DIO与DIO-R大鼠模型,分别于2周、12周末处死,采用原位杂交和免疫组化方法检测下丘脑弓状核神经肽Y的mRNA和蛋白表达情况。结果实验2周末,DIO大鼠神经肽Y mRNA和蛋白阳性面积分别为(0.563 8±0.100 5),(0.610 9±0.143 4)mm2,高于DIO-R(0.411 5±0.085 1),(0.523 1±0.096 3)mm2和对照组大鼠(0.400 4±0.062 2),(0.445 3±0.157 8)mm2;神经肽Y mRNA和蛋白积分光密度分别为9 025.48±2 192.32,7 786.39±1 423.02,高于DIO-R(7 651.79±2 279.21,5 447.16±3 207.09)和对照组大鼠(6 499.24±2 342.94,5 530.83±841.13)。结论神经肽Y mRNA和蛋白表达降低且保持敏感性可能与肥胖抵抗有关。     

近交系TA_2小鼠的恶性淋巴瘤(L-TA_2)模型的建立和某些生物学特性的观察

本文报告一株新的近交系AT_2小鼠自发性恶性淋巴瘤(B-淋巴细胞型)模型建立的经过及其一些生物学特性。历时4年多已传44代,肿瘤生长特性稳定,移植率为100％。未见自发消退,宿主平均存活时间为31.2±5.5天,中数存活时间31.3天。经多种途径(如不同部位皮下,肌肉内)及不同细胞浓度(如1×10~2、1×10~4等)移植均可成活,并有广泛淋巴结转移。组织学观察证明为典型的淋巴瘤,已传代的肿瘤组织学结构和电镜观察与原发瘤基本相同。染色体检查为鼠类肿瘤染色体,众数以三倍体和四倍体、超四倍体为主。经抗癌药物敏惑实验,表明对CTX、5FU药物最敏感。本模型可为研究人类恶性淋巴瘤提供有用的实验工具。     

肠康复治疗用于小肠移植的免疫安全性研究

目的 :观察肠康复治疗对大鼠小肠移植急性排斥反应的影响 ,评价其应用的安全性。方法 :48只异基因异位小肠移植受体大鼠 (SD→Wistar)根据肠康复治疗及环孢素A应用与否随机分为 4组 ,观察至术后 14天各时相点移植小肠病理改变、固有层淋巴细胞IL 2受体表达、血浆IL 2水平以及受体大鼠脾淋巴细胞转化试验和IL 2分泌能力。结果 :肠康复治疗能够增强小肠移植受体大鼠的细胞免疫功能 ,加重急性排斥反应。应用环孢素A(10mg·kg-1·d-1)能阻断这种免疫增强作用 ,在这种情况下 ,肠康复治疗不能诱发或加重急性排斥反应。结论 :肠康复治疗能够加重小肠移植的排斥反应 ,但在应用环孢素A的情况下 ,免疫增强作用受抑制 ,不会诱发或加重急性排斥反应。     

丁苯酞对氯化锂-匹鲁卡品诱发的癫痫大鼠海马神经元损伤的作用

目的〓〖HTK〗探讨丁苯酞对颞叶癫痫大鼠海马神经元的保护作用。 〖HTW〗方法〓〖HTK〗随机将30只雄性成年Wistar大鼠分为丁苯酞组、癫痫组和空白对照组。丁苯酞组和癫痫组先分别给予丁苯酞80mg/kg、等量生理盐水腹腔注射，再分别给予氯化锂、匹鲁卡品建立癫痫模型，在癫痫发作终止后3、24h时将动物处死，分别取出海马在光镜和电镜下观察，并检测超氧化物歧化酶活力及丙二醛含量。 〖HTW〗结果〓〖HTK〗丁苯酞组能明显延长癫痫发作的潜伏期，增加超氧化物歧化酶的活力（P＜0.01，P＜0.05），降低丙二醛的含量（P＜0.05，P＜0.01），细胞结构基本正常，但核仁有边聚、间隙肿胀，部分线粒体膜有断裂和嵴缺失现象。癫痫组细胞肿胀、破裂，神经元数目明显减少, 胞质中线粒体变形、肿胀, 线粒体嵴缺失。 〖HTW〗结论〓〖HTK〗丁苯酞能减轻颞叶癫痫对海马神经元造成的损伤，其作用机制可能与丁苯酞对神经元线粒体的保护有关。     

大蒜素对糖尿病高半胱氨酸血症大鼠脑干听觉诱发电位的影响

目的〓〖HTK〗观察大蒜素对糖尿病高半胱氨酸(Hcy)血症大鼠脑干听觉诱发电位的影响。〖HTW〗方法〓〖HTK〗从60只Wistar大鼠中随机抽取10只作为正常对照组，余下50只腹腔注射链脲佐菌素（STZ）造成糖尿病模型，取其中40只随机分为空白对照组、模型对照组、叶酸-VitB6组、大蒜素治疗组，每组10只。模型对照组、叶酸-VitB6组、大蒜素治疗组均给予高蛋氨酸饲料，制备糖尿病高Hcy血症模型；大蒜素治疗组每日给大蒜素8mg/kg腹腔注射；叶酸-VitB6组给予叶酸、维生素B6、维生素B12灌胃；喂养6周检测脑干听觉诱发电位(BAEP)后处死动物，采静脉血测血糖、Hcy水平。〖HTW〗结果〓〖HTK〗大蒜素治疗组的血糖、Hcy水平低于模型对照组（P均<0.01），且Hcy水平与正常对照组比较差异无统计学意义（P>0.05）；大蒜素治疗组大鼠的BAEP各波峰潜伏期（PL）与正常对照组接近，且Ⅰ～Ⅲ波峰间潜伏期(IPL)和Ⅰ～Ⅴ IPL较空白对照组、模型对照组明显缩短差异具有统计学意义（P均<0.05）。〖HTW〗结论〓〖HTK〗大蒜素能有效治疗糖尿病高Hcy血症，改善糖尿病脑神经损害。