甲胎蛋白DNA疫苗的构建及诱导小鼠抗肿瘤免疫的实验研究

目的克隆小鼠甲胎蛋白(murineα-fetoprote in,mAFP)基因,构建mAFP DNA疫苗并检测其诱导mAFP特异性CTL反应及抗肿瘤免疫的能力。方法利用RT-PCR从Hepa 1-6细胞总RNA中克隆出mAFP基因,亚克隆于pcD-NA3.1中构建DNA疫苗pmAFP,酶切、测序和表达鉴定;pmAFP稳定转染EL-4细胞建立EL-4(mAFP)细胞系;pmAFP免疫小鼠,接种EL-4(mAFP)细胞,观察肿瘤生长情况;E lispot法检测免疫后小鼠脾脏细胞中产生IFN-γ的细胞频数;另外,对免疫的小鼠采血进行肝、肾功能检测。结果RT-PCR成功克隆出小鼠AFP基因;酶切、测序和表达鉴定证实DNA疫苗pmAFP构建成功;RT-PCR证实EL-4(mAFP)细胞中有mAFP mRNA的表达;pmAFP免疫组小鼠的肿瘤体积(1 042.42±123.71)mm3明显小于pcDNA3.1组(P<0.01)和PBS组(P<0.01);pmAFP免疫小鼠的脾脏细胞产生IFN-γ的细胞频数显著高于pcDNA3.1组(P<0.01)和PBS组(P<0.01)。各组肝、肾功能无显著差异。结论mAFP DNA疫苗构建成功,此疫苗能诱导AFP特异性的CTL增殖并诱导小鼠产生明显的抗肿瘤免疫力,对小鼠肝、肾功能不产生影响。     

DNA甲基化与高同型半胱氨酸血症

DNA甲基化是一种调控基因表达的表观遗传机制,由Hcy代谢相关底物S-腺苷同型半胱氨酸（S-adenosyl-L-homocysteine,SAH）依赖性的DNA甲基转移酶（DNA methyltransferases,DNMTs）催化,对维持细胞稳态至关重要。多项研究表明,高同型半胱氨酸血症（hyperhomocysteinemia,HHcy）可能通过调节甲硫氨酸-同型半胱氨酸循环（methionine-homocysteine cycle,M-H cycle）调控DNA甲基化状态,参与动脉粥样硬化形成过程中的血管内皮细胞功能障碍、损伤后平滑肌细胞（smooth muscle cells,SMCs）的增殖和转移、脂质代谢等病理过程,从而影响心血管疾病的发生和预后。     

血清HBV DNA及HBV前基因组RNA(pgRNA)在慢性乙肝患者抗病毒不同阶段的变化分析

目的 分析慢性乙肝患者抗病毒治疗的不同阶段血清乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸（HBV DNA）及HBV前基因组RNA(HBV pgRNA)的变化。方法 选取2018年2月—2021年2月就诊的60例慢性乙肝患者,对其进行抗病毒治疗,根据不同的治疗方法分为恩替卡韦治疗组（n=30）和阿德福韦酯治疗组（n=30）,并根据治疗不同阶段分为0周、12周、24周、36周、48周,对不同病况接受抗病毒治疗的慢性乙型肝炎患者进行HBV DNA、HBV pgRNA检测,比较抗病毒不同阶段HBV DNA、HBV pgRNA浓度的变化。结果 两组患者在0周、12周、24周、36周、48周血清HBV DNA、HBV pgRNA均呈下降趋势（P<0.05）,且恩替卡韦治疗组下降幅度大于阿德福韦酯治疗组（P<0.05）;治疗0周、48周时,恩替卡韦治疗组、阿德福韦酯治疗组的HBV DNA、HBV pgRNA比较无统计学意义（P>0.05）,而治疗12周、24周、36周时,恩替卡韦治疗组HBV DNA、HBV pgRNA低于阿德福韦酯治疗组（P<0.05）。结论 HBV DNA、 HBV pgR...     

血清γ-干扰素、白细胞介素-33与慢性乙型肝炎患者HBV-DNA载量的相关性

目的 观察慢性乙型肝炎患者血清γ-干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-33(IL-33)、乙肝病毒脱氧核糖核酸(HBV-DNA)载量情况,并分析血清IFN-γ、IL-33与HBV-DNA载量的关系。方法 选取2018年6月—2021年6月杭州临安区第一人民医院感染科收治的108例慢性乙型肝炎患者,检测患者HBV-DNA载量并依据检测结果分为低、中、高HBV-DNA载量组,设计基线资料调查表,统计3组患者的基线资料并比较,分析血清IFN-γ、IL-33与慢性乙型肝炎患者HBV-DNA载量的关系。结果 108例慢性乙型肝炎患者中,低HBV-DNA载量37例,中HBV-DNA载量49例,高HBV-DNA载量22例;高HBV-DNA载组ALT、AST、IFN-γ、IL-33水平高于中HBV-DNA载量组、低HBV-DNA载量组(P<0.05);不同HBV-DNA载量慢性乙型肝炎患者其他资料比较,差异无统计学意义(P>0.05);慢性乙型肝炎患者HBV-DNA载量与血清IFN-γ成负相关(r=-0.401,P<0.05)、与血清IL-33成正相关(r=0.408,P<0.0...     

荧光分光光度法检测系统性红斑狼疮患者血清DNaseI酶意义探讨

目的:探讨血清DNaseI异常对SLE发生发展的影响。方法:荧光分光光度法检测68例SLE患者。结果:SLE患者血清DNaseI水平低于正常,活动期患者低于缓解期患者,伴肾损害患者低于非肾损害患者。血清DNase I水平与血沉、ANA呈负相关,与补体C_3、C_4呈正相关,与病情活动积分及DNA含量呈负相关。结论:荧光分光光度法可简便、灵敏地检测DNaseI水平,SLE患者血清DNaseI水平下降,DNA含量升高,提示DNaseI水平下降是导致SLE患者体内DNA升高的重要原因,并在SLE的发生发展中起者重要作用。     

无机金属配合物与DNA的相互作用问题

综述了金属配合物与DNA相互作用的方式和机理,总结其相互作用的一般规律,对探索配合物在抗肿瘤药物、分子生物学、生物工程技术及其它领域的应用具有重要的意义。     

心力衰竭患者心肌线粒体脱氧核糖核酸损伤与衰竭心肌线粒体酶活性的关系

目的 :为探讨心肌线粒体脱氧核糖核酸 (mt DNA)获得性损伤对衰竭心肌线粒体酶活性改变的影响 ,确立 mt DNA损伤在衰竭心肌发病中的作用。　　方法 :对 2 8例慢性心力衰竭患者活检心肌 ,用定量聚合酶链式反应 (PCR)及生化方法 ,观察衰竭心肌中常发缺失型突变 mt DNA4977和 mt DNA7436 缺失率与线粒体呼吸酶活性和心脏功能受损之间的关系。　　结果 :慢性心力衰竭患者活检心肌中的 mt DNA存在不同程度的缺失突变损伤 ,两种缺失类型合计的缺失率在0 .10 2 %～ 1.745 %之间 ;mt DNA缺失率与心肌生化水平上的线粒体呼吸酶活性改变相关性良好 ;同时与整体水平上的心脏泵功能受损呈一致性关系。　　结论 :心肌 mt DNA损伤与心肌线粒体呼吸功能下降和心脏功能受损程度密切相关 ,提示 mt DNA损伤可能参与了心力衰竭的形成与发展。     

乙型肝炎相关性肝癌患者围手术期HBV DNA的变化及其影响因素

目的探讨乙型肝炎相关性肝癌患者围手术期HBV DNA水平变化的影响因素,比较抗病毒治疗与未抗病毒治疗对患者术后肝功能恢复的影响。方法选择65例未达到抗病毒治疗标准的乙型肝炎相关性肝癌患者,定量检测其术前和术后第3天的HBV DNA载量及白细胞介素(IL)-6、IL-10、IL-27的水平。根据术后HBV DNA载量,将患者分成HBV DNA升高(激活)组和不变组。升高组给予抗病毒治疗。记录所有患者术前、术后肝功能指标。用SPSS 17.0进行统计学分析。结果入组患者HBV激活率为37%(24/65),术前HBV DNA1×104 IU/ml的患者,术后HBV激活率为75%(18/24)。Logistic回归分析显示肿瘤直径(P=0.006)及肝切缘无水酒精注射(P=0.004)是引起HBV再激活的独立危险因素。ELISA结果示术后IL-10升高与HBV再激活有关(P=0.001),IL-6升高及IL-27降低与HBV不变有关(P=0.000)。术后HBV DNA升高且行抗病毒治疗的患者,术后肝功能恢复情况与其他患者比较差异无统计学意义(P0.05)。结论肝癌切除术可能引起患者HBV再激活,围手术期内应监测HBV DNA载量的变化。肿瘤直径、术中行肝切缘无水酒精注射术是HBV再激活的独立危险因素。患者术后IL-10、IL-6水平的变化可能与HBV DNA的变化有关。术后HBV再激活近期不会加重肝功能损伤,术后抗病毒治疗对患者近期肝功能的恢复无明显促进作用。     

实时荧光定量PCR与PCR-ELISA在乙型肝炎病毒DNA定量检测中的应用比较

目的 评价应用国产试剂的实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)在检测乙型肝炎病毒(HBV)DNA中的临床应用。方法 基于TaqMan探针技术的实时荧光定量PCR应用Roche公司Light Cycler仪器和国产达安试剂,PCR-酶联免疫吸附试验(ELISA)应用Roche公司COBAS Amplicor全自动内标法系统,用2种方法检测乙型肝炎患者血清中的HBV DNA,评价其灵敏度、精密度及相关性。结果 实时荧光定量PCR方法的灵敏度略低于PCR-ELISA全自动内标法,两者变异系数(CV)均较低,用2种方法检测临床标本,相关系数为0．890。结论 应用国产试剂配合Light Cycler仪器的实时荧光定量PCR具有较高的灵敏度和较好的重复性,并与PCR-ELISA全自动内标法有良好的相关性。