波动性高糖对内皮细胞自噬基因表达的影响

【目的】探讨波动性高糖对内皮细胞自噬的影响及其可能的机制。【方法】体外培养人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)用于实验。实验分正常对照组(5.5 mmol/L葡萄糖)和葡萄糖交替处理组(5.5/28 mmol/L葡萄糖)。其中葡萄糖交替处理模拟人血糖波动状态,方案是前12 h内每隔4 h交替培养,后12 h内葡萄糖维持5.5 mmol/L水平,按此循环,共培养48 h。用CCK-8检测细胞活性,酶标仪检测氧化应激相关指标,实时荧光定量PCR检测自噬相关基因的表达情况。【结果】与正常对照组相比,葡萄糖交替处理组降低HUVEC细胞活性(P<0.01);降低细胞内抗氧化酶活性,增加丙二醛和8-羟基脱氧鸟苷的含量(P<0.01);增加自噬相关基因Atg4和Atg5的表达(P<0.001)。【结论】波动性高糖可能是先通过诱导HUVEC产生氧化应激,进而使HUVEC产生自噬,最终降低细胞活性。     

慢性肾衰患者褪黑素水平、氧化应激、炎症水平与骨密度相关性研究

目的研究慢性肾功能衰竭维持性血液透析(MHD)中褪黑素(MT)水平、氧化应激和炎症状态与骨密度(BMD)的关系。方法选择我院收治的94例慢性肾功能衰竭患者,于2016年5月至2019年2月接受MHD治疗3个月以上;按照BMD分为骨质疏松组(观察组,n=49)和非骨质疏松组(对照组,n=45)。通过酶联免疫吸附试验检测患者血清高级氧化蛋白产物(AOPP),MT水平和炎症因子[肿瘤坏死因子-α(TNF-α),白细胞介素-6(IL-6)和IL-1](ELISA)。此外,通过硫代巴比妥酸(TBA)测定法检测血清中的丙二醛(MDA)水平,并检测腰椎BMD,然后进行相关性分析。结果观察组MT水平显着低于对照组,但AOPP和MDA水平显着高于对照组(P<0.05)。观察组炎症因子(TNF-α,IL-6和IL-1)水平明显高于对照组(P<0.05)。此外,观察组腰椎BMD和T值明显低于对照组(P<0.05)。Pearson相关分析显示AOPP、MDA、TNF-α、IL-6和IL-1水平与BMD呈负相关,但MT与BMD呈正相关(P<0.05)。结论MHD患者容易发生骨质疏松症;氧化应激和炎症程度与BMD呈负相关,但MT与BMD呈正相关。     

人参皂苷Rg1通过抗氧化应激保护冈田酸诱导的PC12细胞损伤

目的体外细胞水平研究人参皂苷Rg1在冈田酸(Okadaic Acid,OKA)诱导的阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)样神经毒性模型中的保护作用,并初步探索其作用机制。方法选用PC12细胞模拟神经元,采用OKA造模的同时给予Rg1(1、5、10μmol·L~(-1)-),选用褪黑素(Melatonin,Melat)10μmol·L~(-1)-作为阳性对照。分别采用MTT、LDH法检测细胞存活率及死亡率,采用流式细胞术检测细胞凋亡情况,用DCFH-DA荧光探针法检测胞内ROS的堆积,并用试剂盒检测细胞内一系列抗氧化酶活性的变化。结果与对照组相比,OKA组细胞存活率明显降低、死亡率明显增加,细胞早期凋亡数量明显增多(P<0.01);氧化应激相关指标检测发现,OKA组胞内ROS堆积明显增多(P<0.01),总抗氧化能力(ABTS)明显降低(P<0.01),过氧化物酶(Catalase,CAT)(P<0.01),超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-Px)活性都明显降低(P<0.05),GSSG/GSH比率明显升高(P<0.01)。与模型组相比,Rg1不同剂量组均能显著提高OKA模型中PC12细胞的存活率,降低细胞死亡率,并抑制胞内ROS水平、提高抗氧化酶活力增强抗氧化能力。结论人参皂苷Rg1在OKA诱导的AD样病理模型中可以通过抗氧化应激作用发挥抗细胞死亡、保护神经细胞的作用。     

白藜芦醇对高脂膳食小鼠能量代谢及氧化还原状态影响

目的探讨不同剂量白藜芦醇(RSV)对高脂膳食小鼠能量代谢和组织氧化还原状态的影响。方法 6w龄C57BL/6雄性小鼠40只,随机均分为:正常日粮(ND)、高脂日粮(HF)、高脂日粮+0.04%白藜芦醇(HFL)和高脂日粮+0.08%白藜芦醇(HFH)4组。第8和17w测定各组能量代谢速率,17w末处死小鼠,测体脂率、肝脏氧化还原状态指标及FoxO3a、catalase和MnSOD基因表达。结果第8w,HF组小鼠氧气消耗量低于ND组,17w时达到显著性差异(P0.05)。与ND组相比,HF组小鼠肝脏MDA显著增高,CAT、SOD和GSH/GSSG显著降低(P0.05);与HF组相比,低剂量RSV(0.04%)能够显著提高高脂饲喂小鼠的CAT和SOD水平,降低MDA水平(P0.05);而高剂量RSV(0.08%)无改善作用。此外,高脂膳食可以显著降低FoxO3a及其下游catalase和MnSOD基因表达,而低剂量RSV可以显著上调相关基因表达(P0.05),高剂量RSV的影响效果不显著。相关性分析表明FoxO3a与CAT和SOD呈显著正相关,与MDA呈显著负相关。结论 RSV可能通过FoxO3a基因通路改善高脂膳食诱导的氧化应激,高低不同剂量RSV对该基因表达的影响不同。     

不同分期慢性肾脏疾病患者炎性因子、血脂等指标比较

目的比较不同分期慢性肾脏疾病(CKD)患者炎性因子、血脂等指标。方法选取2014年9月至2015年10月四川大学华西医院肾内科收治的不同分期CKD患者各50例,作为CKD 1~2期组,CKD 3~4期组,CKD 5期组;另外选择同期在本院进行健康体检的20例健康体检者作为健康对照组。检测各组研究对象炎性因子、血脂等指标水平。结果 CKD 1~2期、CKD 3~4期、CKD 5期组白蛋白[(40.1±3.1)、(35.2±2.5)、(28.5±2.4)g/L比(44.8±3.1)g/L]、血红蛋白水平[(130±15)、(102±12)、(80±11)g/L比(142±16)g/L]显著低于健康对照组,CKD 3~4期、CKD 5期组白蛋白、血红蛋白水平显著低于CKD 1~2期组,CKD 5期组显著低于CKD 3~4期组,差异均有统计学意义(P<0.05);CKD 5期组前白蛋白显著低于健康对照组(246±14)mg/L比(283±23)mg/L,差异有统计学意义(P<0.05)。CKD 1~2期、CKD 3~4期、CKD 5期组血尿酸[(353±32)、(434±41)、(512±53)μmol/L比(257±23)μmol/L]、C反应蛋白[(3.9±0.4)、(4.8±0.5)、(5.5±0.6)mg/L比(3.1±0.3)mg/L]、血糖[(9.5±0.9)、(9.5±0.9)、(8.5±0.9)mmol/L比(4.4±0.4)mmol/L]水平显著高于健康对照组,总胆红素[(8.4±0.8)、(6.3±0.5)、(5.1±0.5)比(11.3±1.1)μmol/L]显著低于健康对照组,CKD 3~4期、CKD 5期组血尿酸、C反应蛋白水平显著高于CKD 1~2期组,总胆红素显著低于CKD 1~2期组,CKD 5期组血尿酸、C反应蛋白水平显著高于CKD 3~4期组,总胆红素显著低于CKD 3~4期组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论随着CKD患者肾功能减退,患者的血脂、炎性因子等水平升高。     

NOXs在肝纤维化中的作用机制研究

还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase,NOXs)在肝纤维化中,有助于活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)的产生,进而介导内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)的发生及IRE1α-XBP1(inositol-requiring enzyme 1 alpha,IRE1α;X-box binding protein 1,XBP1)信号通路的激活。ROS是指分子氧(O_2)单电子还原后生成的化学性质更为活跃的一类氧代谢产物及其衍生物,包括超氧阴离子(O_2~-)、羟自由基(·OH)、过氧化氢(H_2O_2)以及次氯酸根离子(OCl~-)等。它们可以与生物体内大量分子,包括无机分子、蛋白、脂质、碳水化合物和核酸广泛互作,介导氧化还原修饰,引起脂质过氧化,进而引起肝细胞损伤。另可作为第二信使影响包括肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSC)在内的各种细胞的信号转导,导致HSC的异常活化和增殖,分泌大量胞外基质(extracellular matrix,ECM),进而促使肝细胞凋亡并诱发肝纤维化。该文将对近年来NOXs在肝纤维化中的作用机制研究作一综述,旨在为抗肝纤维化的研究提供新的视角和治疗靶标。     

口服硝酸盐对大鼠背部随意皮瓣的保护作用及机制探讨

目的 探讨口服硝酸盐对大鼠背部随意皮瓣的影响,以硝酸盐-亚硝酸盐-NO通路为切入点,探讨其可能的机制。方法 将24只雄性Wistar大鼠随机分为硝酸盐组、氯化钠组和对照组,每组8只。采用改良大鼠背部随意皮瓣制作方法造模。硝酸盐干预组在术前7 d及术后每天口服0.5 mmol/L硝酸钠,氯化钠组每天口服等量氯化钠,对照组每天口服蒸馏水。术后第7天,检测各组皮瓣的存活情况,大鼠血清中硝酸盐、亚硝酸盐、肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor alpha,TNF-a）和白介素6（interleukin-6,IL-6）水平,以及皮瓣组织中超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）和丙二醛（malondialdehyde,MDA）水平。采用SPSS 20.0软件包对数据进行t检验。结果 硝酸盐组皮瓣的存活面积显著高于对照组（P<0.05）。H-E染色显示,硝酸盐明显减轻了皮瓣的组织学损伤。硝酸钠显著增加了血清中硝酸盐和亚硝酸盐水平（P<0.05）,并显著下调血清中TNF-a和IL-6水平（P<0.05）。此外,硝酸盐组皮瓣组织内MDA表达显著减少（P<0.05）,SOD表达显著增加（P<0.05）。结论 口服硝酸盐可通过调控皮瓣的氧化应激和炎症反应保护皮瓣。     

寡聚原花色素通过激活Nrf2拮抗慢性阻塞性肺疾病大鼠的氧化应激

【目的】观察寡聚原花色素（OPC）对慢性阻塞性肺疾病（COPD）模型大鼠氧化应激的调节作用。【方法】将30只Wistar大鼠随机分为5组，即正常组，模型组，OPC低、高剂量组，地塞米松（DXM）组，每组6只。除正常组，其他组别大鼠采用注入脂多糖（LPS）联合暴露于香烟烟雾法建立COPD模型。成功造模后，OPC低、高剂量组与DXM组分别给予对应药物灌胃治疗，正常组和模型组给予相同体积的生理盐水灌胃。给药结束后，测量大鼠的肺功能，检测肺组织匀浆液中脂质过氧化物标记物丙二醛（MDA）和谷胱甘肽（GSH）水平，观察肺组织病理变化并测定平均线性截距（MLI）、平均肺泡数（MAN），采用免疫组织化学法检测肺组织8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）表达水平，蛋白免疫印迹（WesternBlot）法检测肺组织醌氧化还原酶（NQO1）、血红素氧合酶1（HO1）和核因子E2相关因子2（Nrf2）的表达水平。【结果】与正常组比较，模型组大鼠肺功能指标第0.3秒用力呼气容积/用力肺活量（FEV0.3/FVC）、最大呼气中段流量（MMF）、呼气峰值流量（PEF）速率和动态肺顺应性（Cydn）降低，肺组织出现明显病理损害，MLI增加，MAN降低，肺组织8-OHdG平均光密度升高，肺组织匀浆MDA水平明显升高、GSH水平明显降低，肺组织Nrf2、HO1和NQO1的表达水平显著降低（P<0.05或P<0.01）；与模型组比较，OPC高剂量组可明显改善上述指标（P<0.05或P<0.01或P<0.001）。【结论】OPC治疗COPD可能通过激活Nrf2缓解氧化应激反应，从而减轻COPD大鼠的肺气肿症状。     

甘松乙酸乙酯提取物对高原缺氧诱导脑组织损伤的保护作用

目的明确甘松乙酸乙酯提取物(EFNC)对高原缺氧诱导脑组织损伤的保护作用。方法建立低压低氧诱导小鼠脑组织损伤模型,经EFNC预处理后,利用相关试剂盒检测脑组织中氧化应激和能量代谢相关指标,利用Western blot技术检测脑组织相关蛋白的表达。结果给予EFNC预处理后,能够减少低压低氧小鼠脑组织中H_2O_2和MDA含量,增加GSH和ATP的水平,提高SOD、CAT、GSH-Px和ATP酶的活力以及Nrf2和HO-1的表达。结论 EFNC对高原缺氧诱导脑组织损伤具有保护作用,其作用机制可能与激活Nrf2-HO-1信号通路,提高抗氧化能力以及改善能量代谢障碍有关。     

基于氧化应激探究PCI损伤及中医药防治进展

我国心血管疾病的患病率及死亡率仍处于上升阶段,经皮冠状动脉介入治疗(PCI)是目前减少冠心病患者冠状动脉狭窄及闭塞和改善临床症状的最有效策略。临床上,存在很大一部分患者在大血管再通后,仍存在心痛症状。在PCI围术期常伴随着氧化应激、炎症、钙超载、内皮功能损害、血栓阻塞等不良事件,氧化应激在这个过程中扮演着重要角色。在PCI的再灌注时期,活性氧(ROS)的爆发可引发线粒体能量传递链异常和细胞离子稳态失衡,造成血管内皮细胞损伤,血管通透性增高,白蛋白漏出,白细胞和血小板黏附,血管狭窄。传统中医将PCI术后再狭窄纳入"胸痹"等范畴,气血的运行与五脏的功能密切相关,当气血运行不畅,心脏的生血、行血的功能受阻,造成气虚血瘀,从而造成机体虚损。目前,普罗布考和替格瑞洛等临床一线用药,具有一定的局限性,且忽略了"本虚邪实"的机体现状,无法协调机体气血阴阳五脏之间的关系。本研究从氧化应激在PCI损伤的现代医学分子研究出发,结合中医认识,总结中医药防治的研究进展,旨在为冠状动脉介入损伤的治疗提供候选药物及为相关实验研究提供参考。