鼠NF～IL～6反义真核表达载体的构建和鉴定

目的构建包含鼠细胞转录因子白介素6(NF～IL6)反义基因的部分功能区的重组反义真核表达载体pcDNA3.0/NF～IL6,为进一步研究鼠巨噬细胞中NF～IL6的功能奠定基础。方法 Trizol试剂法提取体外分离培养的鼠巨噬细胞总RNA,经逆转录聚合酶链式反应(RT～PCR)扩增NF～IL6基因目的片段,PCR产物及真核表达载体pcD-NA3.0分别双酶切并进行连接,转化入大肠杆菌Ecoli Dh5α扩增后获得重组载体。结果 RT～PCR获得预期大小的特异性NF～IL6 DNA片段,经PCR、双酶切及测序分析证实已将鼠NF～IL6 cDNA片段正确的反向插入真核表达载体中。结论成功获得反义pcDNA3.0/NF～IL6重组质粒。     

“蛋白质的结构与功能”教学难点分析与对策

本文通过生化教学论坛,收集学生关于"蛋白质的结构与功能"这一章的学习问题和难点,并对其进行分析,提出了应对措施。展示了网络教学论坛在教学辅助方面的优势,对提高教学质量和促进教学改进有积极意义。     

中文生物医学期刊目次数据库检索技巧

中文生物医学期刊目次数据库检索技巧广东省医学情报研究所（５１００８０）郑小莉中文生物医学期刊目次数据库（ＣＭＣＣ）是中国生物学文献光盘数据库配套的现刊目次数据库，是当前国内医药卫生中文文献计算机检索的主要文献源之一·，由解放军军事医学科学院研建，年文...     

急性淋巴细胞白血病白细胞磷酸化蛋白质分析方法的建立及初步分析

目的:在建立白细胞磷酸化蛋白质分离分析方法的基础上对急性淋巴细胞白血病白细胞细胞外信号调节激酶相关磷酸化蛋白质进行初步分析。方法:选择2005-01/2006-03于泸州医学院附属医院血液内科初诊住院的白血病患者10例,20～40岁,均经MICM分类法确诊为急性淋巴细胞性白血病,无合并严重感染,心、肺、肾、肝等重要脏器疾患。健康自愿者为泸州医学院学生10名,23～32岁。分离健康自愿者与急性淋巴细胞性白血病患者新鲜外周血白细胞,并均随机分为刺激组、抑制剂组、对照组。刺激组加入表皮生长因子(40μg/L);抑制剂组加入细胞外信号调节激酶特异性抑止剂UO126(10μg/L)和表皮生长因子(40μg/L);对照组加入等量的培养基,用Bradford法测定细胞蛋白质含量,BDTM Phophoprotein EnrichmentKit分离富集白细胞磷酸化蛋白质,SDS-PAGE分离磷酸化蛋白质,银染法染色,采用ScionImage软件分析电泳结果。结果:10例急性淋巴细胞白血病患者及10名正常健康志愿者均进入结果分析。①电泳图谱显示每条泳道中蛋白质条带清晰,其相对分子量主要介于26000～36000Da以及47000～65000Da之间。A、D蛋白质谱带在健康自愿者中的表达较急性淋巴细胞性白血病患者增强;B蛋白质谱带在急性淋巴细胞性白血病患者中表达较健康自愿者增强;D、E蛋白质谱带分别在健康自愿者、急性淋巴细胞性白血病患者刺激组的表达明显较抑制剂组增强。②在使用表皮生长因子刺激后,E蛋白质谱带的灰度值降低,其磷酸化水平明显增高;UO126抑制后,其磷酸化水平降低。结论:采用本实验建立的亲和层析富集磷酸化蛋白质、SDS-PAGE分离、专业软件分析等方法对急性淋巴细胞白血病白细胞细胞外信号调节激酶相关磷酸化蛋白质进行动态的分析,其方法较简便、结果可信,可为细胞信息传递磷酸化蛋白质组的研究奠定了基础。     

健康教育对肺癌患者化疗间歇期的影响

目的了解健康教育对肺癌患者化疗间歇期的影响.方法将60名肺癌患者随机分为实验组和对照组,并用自设的问卷调查.结果健康教育前2组患者在知识及行为上无明显差异,健康教育后2组患者除锻炼方式及时间无明显差异外,其余各项均有显著差异. 结论健康教育不仅能帮助肺癌患者在化疗间歇期间进行自我保护,增进应对疾病的有效行为,同时为下一次化疗奠定良好的基础.提高肺癌患者的生存质量.     

ASC在ONO-AE-248诱发的中性粒细胞非凋亡性程序化死亡中的作用

目的：探讨接受ONO-AE-248刺激后重要的差异表达蛋白——凋亡相关斑点样蛋白（Apoptosis-associated speck-like protein containing CARD，ASC）的表达及意义。方法：Fieoll法新鲜分离健康志愿者外周静脉血中性粒细胞（Polymorpho-nuclear neutrophils,PMN），与ONO-AE-248共同培养，2小时提取总RNA，并行反转录-PCR检测ASCmRNA的表达；12小时提取总蛋白，双向电泳分离后，采用PDQest2-DE软件分析找出差异表达的蛋白质斑点，并用基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱（MALDI-TOFMS）进行鉴定。结果：ONO-AE-248刺激2小时中性粒细胞ASC mRNA的表达明显下调（P〈0．01）；12小时通过双向电泳和蛋白质质谱分析发现ASC为重要的差异表达蛋白且ONO-AE-248刺激后的表达量明显低于自发性凋亡组。结论：ONO-AE-248引起的ASC表达的下调可能是中性粒细胞凋亡和ONO-AE-248诱导的中性粒细胞非凋亡性程序化细胞死亡的关键性差异点。ONO-AE-248显著下调ASC的表达，可能是ONO-AE-248诱使中性粒细胞发生非凋亡性程序化死亡的根本原因之一。     

ERK信号转导途径具有自适应控制作用

目的 分别以ECF和mClu为刺激物来分析和比较ERK和PKC信号转导途径的作用特点和机制。方法：把两个途径所涉及的每一步生物化学反应转化成化学动力学反应方程，确定每一反应方程所对应的动力学参数，输入计算机进行模拟数学计算。结果：模拟计算的Time—[ERKPP]t曲线和[Ca^2 ]t—[PLCβ］t曲线与实验结果相符；经过ERK途径产生的活化SHC和双磷酸化ERK随时间变化的浓度曲线呈蜂形，而经过冈PKC途径产生的活化PLCβ和活化PKC随时间变化的浓度曲线则呈典型的持续激活曲线。结论：ERK信号转导途径具有自适应控制作用，故该途径中的信号分子浓度可随时间的推移而逐渐降低。     

紫外分光光度法测定硫酸锌口服液中锌含量

紫外分光光度法测定硫酸锌口服液中锌含量李学平，郑小莉，戴金萍河北医学院药厂（０５００１７）关键词紫外分光光度法；显色剂；标准液；口服液；硫酸锌本文采用紫外分光光度法测定硫酸锌口服液（又名健灵液）锌含量，结果与河北省药品标准（１９９１年版）规定的络合滴...     

重组人 P53 腺病毒联合紫杉醇对宫颈癌HeLa细胞的抑制作用及其机制

目的： 探讨重组人 P53 腺病毒（recombinant human adenovirus-P53,rAd-P53）联合紫杉醇对宫颈癌HeLa细胞增殖、凋亡及血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）表达的影响。 方法： MTT法检测紫杉醇、rAd-P53单独或联合应用后HeLa细胞的增殖;DAPI染色法检测紫杉醇、rAd-P53单独或联合作用48 h后HeLa细胞的凋亡;Western blotting法检测紫杉醇、rAd-P53单独或联合作用后HeLa细胞VEGF的表达情况。 结果： 紫杉醇、rAd-P53单独或联合作用24~72 h均能抑制HeLa细胞的增殖,抑制作用具有时效和量效关系,且联合用药组对HeLa细胞的抑制率显著高于单用紫杉醇组及rAd-P53组（P<0.05）;联合作用时的相互作用系数（coefficient of drug interaction,CDI）均<1,说明两者具有协同作用;rAd-P53（5×107VP/ml）联合紫杉醇（3 μg/ml）作用48 h后,对HeLa细胞增殖的抑制率高于两药单用组\[（54.0±0.92）% vs （31.8±0.58）%、（27.2±0.55）%,P<0.05\]。联合用药组HeLa细胞的凋亡率也显著高于紫杉醇组、rAd-P53单用组\[（83±0.07）% vs（36±0.04）%、（62±0.05）%,P<0.05\]。联合用药组HeLa细胞中VEGF的表达显著低于两单独用药组,HeLa细胞中VEGF表达分别下降（81±0.08）%、（45±0.07）%和（60±0.06）%（P<0.05）。 结论： rAd-P53和紫杉醇联合用药抑制HeLa细胞的增殖、诱导细胞凋亡的效果优于单独用药,其机制可能与下调VEGF表达有关。     

一代二代联合测序快速鉴定肝豆状核变性及家系溯源研究

目的：探索二代测序筛选和一代测序验证的快速准确诊断罕见遗传病肝豆状核变性的检测方法和流程。方法：提取先证者DNA并构建高通量测序文库后通过二代测序鉴定其可能致病位点；再提取包括先证者在内的该家系13位成员DNA，设计引物并对目标片段PCR扩增后进行双相一代测序验证。结果：先证者的ATP7B基因外显子8中检测出1个杂合错义突变（rs121907990;chr13:51937570）；家系成员共查出3位携带同一杂合错义突变者，先证者ATP7B突变来源于母系。结论：本研究设计的联合二代测序检测与一代测序验证的肝豆状核变性基因突变位点的快速鉴定技术和流程图，可能为罕见遗传病基因突变致病位点提供可借鉴的检测模式，为早期高效精准确诊罕见遗传病提供帮助。