TGF-β1诱导胃癌细胞上皮间质转化及其上调CD44表达的实验研究

目的 观察TGF-β1诱导胃癌SGC7901细胞发生上皮间质转化及其对胃癌细胞生物学特性与肿瘤起始细胞特性的影响.方法 TGF-β1处理胃癌SGC7901细胞后,观察其形态学变化;CCK-8法检测细胞增生能力;划痕实验及transwell实验检测细胞迁移与侵袭能力;免疫荧光法检测上皮钙黏素及间质钙黏素表达的变化;逆转录PCR法与免疫蛋白印迹法检测上皮间质转化相关因子及CD44的表达.结果 TGF-β1处理SGC7901细胞后,细胞形态由上皮细胞形态向间质细胞样形态转变;TGF-β1处理后,处理组划痕愈合程度明显高于对照组(P＜0.05),处理组穿膜细胞数目(107.67±5.48)显著高于对照组(53.33±8.47,P＜0.05),TGF-β1处理组SGC7901细胞上皮钙黏素表达显著降低(P＜0.05),间质钙黏素(P＜0.05)与Snail(P＜0.05)表达显著增加,肿瘤起始细胞相关标志物CD44表达显著增加(P＜0.05).结论 TGF-β1可诱导胃癌SGC7901细胞发生上皮间质转化,增加CD44表达,抑制胃癌细胞增生,促进其侵袭和迁移.     

生物反馈联合舒肛汤中药坐浴治疗功能性肛门直肠痛的效果

目的 研究生物反馈联合舒肛汤中药坐浴治疗功能性肛门直肠痛的效果,旨在探讨临床治疗该病的有效疗法。 方法 根据现状调查自2018年9月—2019年8月收集金华市中心医院门诊功能性肛门直肠痛的患者100例,采用随机数字表法分为观察组与对照组,各50例,对照组采用单纯的生物反馈疗法,观察组在生物反馈疗法基础上联合舒肛汤中药温水坐浴治疗,对比2组患者的治疗效果,包括疼痛视觉模拟评分(VAS)、肛门直肠压力、盆底功能、症状积分以及临床疗效。 结果 观察组治疗后的VAS评分为(1.6±1.0)分,低于对照组的(2.5±1.3)分(t=3.880,P<0.001);观察组治疗后的直肠静息压、肛管静息压、最大缩榨压均小于对照组(均P<0.05);观察组治疗后的放松状态AVG、快速收缩AVG Peak、间断收缩AVG、肌电变异性CV均优于对照组(均P<0.05);观察组治疗后的症状积分为(14.6±7.0)分,低于对照组的(18.2±7.6)分(t=2.464,P=0.016);观察组的总有效率(92.0%)高于对照组(74.0%),χ2=5.741,P=0.017。 结论 生物反馈联合舒肛汤中药坐浴治疗功能性肛门直肠痛的效果显著,可明显减轻患者疼痛,降低肛门直肠压力,提高盆底功能,减少症状积分,值得临床推行。      

肺表面活性物质治疗早产儿呼吸窘迫综合征的转归调查

目的调查肺表面活性物质(PS)治疗早产儿呼吸窘迫综合征(NRDS)的转归情况。方法收集43例NRDS患儿的临床资料,根据是否使用PS分为PS使用组和PS未用组,对两组患儿的一般临床情况、呼吸支持情况、症状变化及转归结果进行回顾性分析。结果 NRDS患儿胎龄和出生体质量均较低,分别为(31.0±1.5)周和(1.734±0.170)kg;PS使用组症状消失、呼吸机辅助通气时间、住院天数及病死率均少于PS未使用组(均<0.05),PS使用组脑室内出血(IVH)、早产儿视网膜病(ROP)的发生率均显著低于PS未使用组(均<0.05),两组支气管肺发育不良(BPD)的发生率差异无统计学意义(>0.05)。结论 NRDS使用PS后能有效地改善患儿肺顺应性及氧合功能,缩短机械通气及氧疗时间,提高患儿成活率,缩短住院时间,但不能完全改变转归和预后。     

Sky椎体成形器的初步临床应用体会

近年来,经皮穿刺椎体成形术在国内较广泛开展,诸多骨质疏松性椎体压缩骨折、椎体肿瘤的患者从中受益.但该手术存在固有不足,如骨水泥渗漏率高、椎体高度无法恢复等.而椎体后凸成形术一定程度上克服了上述缺点,临床报道球囊成形术取得了较好的疗效,但球囊操作可控性差、价格贵等不足.最近,以色列DISC-O-TECH公司推出的Sky椎体成形器已应用于临床.我们从2004年11月～2005年2月应用该系统共完成5例7个压缩椎体的后凸成形术,疗效满意.报告如下.     

经口致敏食物过敏大鼠模型的建立

目的探讨经口致敏食物过敏大鼠模型的建立方法,以及适宜的评价指标。方法以卵清蛋白(OVA)作为致敏原,将16只3周龄Brown-Norway(BN)大鼠随机分为3组:阴性对照组(生理盐水灌胃)、阳性对照组(OVA腹腔注射组)和实验组(OVA灌胃组),共灌胃9周。在第4、5、6、7、8、9周分别采用双抗体夹心ELISA法及皮肤过敏实验法(PCA)测定实验动物血清OVA特异性IgE(OVA-IgE)抗体滴度,以判断动物是否致敏成功,在第13周各组动物给予100mg/mlOVA1ml灌胃激发后测血清OVA-IgE滴度。结果ELISA结果显示在灌胃第6周时实验组动物OVA-IgE滴度水平达到最高,且显著高于阴性对照组(P<0.05),致敏率为60%(3/5);第7、第8周时OVA-IgE滴度水平略有下降,但是仍然显著高于阴性对照组(P<0.05),致敏率达到80%(4/5),OVA-IgE水平和致敏率与阳性对照组之间差异无显著性;实验组PCA结果在第6、7、8周均显示为阴性,而阳性对照组PCA显示为阳性。结论经口致敏可作为一种可行的建立食物过敏动物模型的方法,符合食物过敏发生的自然生理过程,建议适宜致敏时间为6周;采用ELISA法检测血清OVA-IgE抗体水平较PCA法能更加灵敏地反映经口致敏模型是否成功。     

高氧暴露对早产鼠肺组织HO-1和GCLC表达的影响

目的探讨高浓度氧暴露对新生早产大鼠肺组织中血红素加氧酶-1（HO-1）和谷氨酰-L-半胱氨酸连接酶催化亚单位（GCLC）动态表达的影响。方法受孕21 d大鼠行剖宫产取出早产鼠80只，喂养1 d后随机分为空气组和高氧组。空气组早产鼠放置在室内常压空气中饲养，高氧组早产鼠放置在同一室内常压氧箱中（氧浓度85%~95%）饲养，分别于第1、4、7、10、14天，每组取8只大鼠，采集两组早产鼠肺组织标本。采用苏木精-伊红染色法检测两组早产鼠不同时间点肺组织结构的病理变化；采用Western blot技术和RT-qPCR检测两组早产鼠不同时间点肺组织HO-1和GCLC蛋白及mRNA的表达变化。结果与空气组相比，高氧组早产鼠体重下降显著（P < 0.05）。与空气组相比，高氧组早产鼠肺组织病理切片显示肺组织结构紊乱、肺泡间隔增宽、肺泡数目减少和肺泡简单化。高氧组早产鼠肺组织中HO-1 mRNA相对表达量在第7天时低于空气组，在第10、14天时高于空气组（P < 0.05）。高氧组早产鼠肺组织中GCLC mRNA表达量在第1、4、7天时低于空气组，在第10天时高于空气组（P < 0.05）。与空气组比较，高氧组早产鼠肺组织中HO-1蛋白表达水平在各时间点均升高；除第1天外，GCLC蛋白表达水平在其他各时间点均升高（P < 0.05）。结论高氧暴露导致早产鼠生长发育迟缓、肺发育阻滞。早产鼠肺组织HO-1和GCLC蛋白及mRNA的表达变化可能与高氧暴露导致早产鼠肺损伤发病过程相关。     

肺透明膜病早产儿尸检肺组织肺表面活性蛋白-C及Ki67的表达

Objective To determine the expression of surfactant protein-c (SP-C) and Ki67 in autopsy lung tissues of premature infants died of hyaline membrane disease (HMD) who were exposed to mechanical ventilation and high oxygen concentrations/pulmonary surfactant (PS). The possible influence of surfactant on the expression of SP-C and Ki67 was also investigated. Methods Thirty preterm infants diagnosed as HMD by clinical data and pathology were selected. Mechanical ventilation and supplemental oxygen (FiO2 0.6-1.0) were given to these infants within 6 hours after birth. According to the duration of ventilation at high oxygen concentrations, all subjects were diveded into four groups: ventilation for 1-3 days, 4-8 days, 9-16 days and >16 days. Five premature infants died within 1 day after delivery for none pulmonary reasons served as controls. The expression of SP-C and Ki67 in lungs were detected by immunobistochemistry. Results The pulmonary pathology in these HMD infants at different phases was consisitent with the main features of different stages during the progress from HMD towards bronchopulmonary dysplasia. The positive staining of SP-C was restricted to type Ⅱ alveolar epithelial cells, and Ki67 positive were preferentially localized in nuclei of alveolar and bronchiolar epithelial cells and fihroblasts. Compared with the control group, the expression of SP-C and Ki67 in HMD infants decreased significantly after 1-3 days of ventialation, but increased after 4 days and reached the peak value after 9-16 days. The expression of SP-C and Ki67 in control group, 1-3 days and 9-16 days of ventialation were 0. 1891±0. 0253, 0. 1576±0. 0327 and 0. 2271±0. 0238 for SP-C and 0. 2297±0. 0380, 0.1929±0. 0403 and 0. 2849±0. 0368 for Ki67, respectively. No significant difference in the expression of SP-C and Ki67 was found between infants treated with PS and those without (P>0.05). Conclusions SP-C and Ki67 may have participated in the pulmonary pathological process in ventilated/oxygen treated preterm infants with HMD, and exogenous surfactant had no effect on the expression of SP-C and Ki67.     

硫氧还蛋白-2和细胞色素C在高氧暴露下A549细胞中的表达和意义

目的观察高体积分数氧（高氧）暴露后人肺泡Ⅱ型上皮细胞来源的肺腺癌A549细胞中硫氧还蛋白-2（Trx-2）和细胞色素C（Cytc）的动态表达，探讨Trx-2和Cytc表达变化在高氧肺损伤中的作用。方法复苏液氮罐中冻存的人肺腺癌A549细胞系后，加入100g／L胎牛血清的MEM培养基，置于37℃50mL／L二氧化碳（CO2）饱和湿度培养箱中培养。然后体外传代培养A549细胞，待其生长至接近融合状态时，随机分为高氧组和空气组，每组18瓶A549细胞（50mL培养瓶）。高氧组持续暴露于常压高氧中，氧体积分数为900mL／L，CO2体积分数为50mL／L；空气组仍置于50mL／L CO2培养箱中。二组分别于高氧或空气暴露12、24、48h后提取A549细胞总RNA，半定量反转录聚合酶链反应检测Trx-2和Cytc mRNA水平；蛋白印迹法检测A549细胞Trx-2蛋白的表达变化。结果1.与空气组比较，高氧组24h Trx-2 mRNA的表达显著增强（P〈0．05）；48h Trx-2 mRNA的表达减弱，二组比较无显著性差异（P〉0．05）。2．与空气组比较，高氧组12h Cytc mRNA的表达显著增强（P〈0．05）；24h Cytc mRNA的表达减弱，二组比较无显著性差异（P〉0．05）；48h显著减弱（P〈0．05）。3．与空气组比较，高氧组12h Trx-2蛋白的表达显著增强（P〈0．05）；24h仍增强，二组比较无显著差异（P〉0．05）；48h显著减弱（P〈0．05）。结论高氧暴露可诱导A549细胞中Trx-2和Cytc异常表达，提示Trx-2对高氧肺损伤线粒体可能起重要的保护作用，Cytc在高氧肺损伤细胞凋亡发生发展中起重要作用。     

线粒体呼吸链与新生儿高氧肺损伤

高氧肺损伤是新生儿尤其早产儿常见的并发症之一.迄今新生儿高氧肺损伤的详细发病机制尚未完全阐明.最近的研究表明,线粒体呼吸链与新生儿高氧性肺损伤也有密不可分的关系.该文综述高浓度氧暴露对肺组织线粒体呼吸链酶复合体组成成分表达的影响;线粒体呼吸链在高氧肺损伤中可能发挥的作用以及与此相关的治疗与展望.     

新生早产大鼠高氧暴露肺组织细胞色素C变化及其与肺细胞凋亡的关系

目的研究新生早产大鼠吸入高浓度氧(以下简称高氧)后肺组织细胞内细胞色素C(cytochrome C,Cytc)表达及分布的变化及其与肺细胞凋亡的关系,探讨Cytc变化在高氧肺损伤中的作用。方法将新生早产SD大鼠随机分为高氧组和空气组,高氧组暴露于浓度为85%左右的氧气中建立高氧肺损伤模型。在生后1、4、7、10、14d各组取材,分别用RT-PCR技术检测肺组织Cytc和caspase-9 mRNA表达,用免疫组化法检测Cytc蛋白分布,脱氧核糖核酸转移酶介导的X-dUTP缺口末端标记(terminal deoxynucleotid transferase-mediated X-dUTP nick end labeling,TUNEL)法检测肺细胞凋亡情况。结果生后第4天高氧组肺组织CytcmRNA水平为0.5739±0.0228,第7天为1.1000±0.1050,均高于空气组(分别为0.4001±0.0383和0.6330±0.0740)(P均<0.05);高氧组肺组织caspase-9 mRNA第4天为1.2975±0.0729,第7天为1.2012±0.0615,也分别高于空气组(分别为0.8428±0.0272和0.8086±0.0167)(P<0.05)。生后各时间点肺组织Cytc免疫组化平均灰度值和肺组织细胞凋亡阳性率均高于空气组(P均<0.01)。结论高氧暴露可致新生早产大鼠肺组织Cytc mRNA表达增加和Cytc分布变化,可能通过激活caspase-9进而导致肺细胞凋亡,从而导致高氧肺损伤。