HBx基因缺失型突变体对肝细胞QSG7701细胞增殖和凋亡的影响

目的研究HBx-d382和HBx-d431缺失型突变体对永生化QSG7701肝细胞生物学行为的影响。方法采用HE染色法,观察转染细胞形态学变化,通过MTT、软琼脂克隆形成实验、流式细胞仪及裸鼠成瘤实验研究稳定转染细胞的生物学特性。结果与转染空质粒pcDNA3相比,转染肝癌组织中HBx-d382和HBx-d431突变体及HepG2.2.15细胞株中HBx-2215基因的QSG7701细胞大小形态不一致、体积增大、核浆比例增大,生长速度更快,克隆形成率高(P<0.05)。与转染空质粒pcDNA3S期百分比(29.4%)和凋亡率(13.1%)比较,pcDNA3/HBx-d382和pcDNA3/HBx-2215组细胞S期百分比比例增高,分别为32.8%和35.0%,pcDNA3/HBx-d431组凋亡率下降(4.5%)。结论 HBx-d382和HBx-d431缺失型突变体能促进QSG7701细胞增殖和恶性转化。     

HBx基因缺失型突变体对肝细胞QSG7701细胞增殖和凋亡的影响

目的研究HBx-d382和HBx-d431缺失型突变体对永生化QSG7701肝细胞生物学行为的影响。方法采用HE染色法,观察转染细胞形态学变化,通过MTT、软琼脂克隆形成实验、流式细胞仪及裸鼠成瘤实验研究稳定转染细胞的生物学特性。结果与转染空质粒pcDNA3相比,转染肝癌组织中HBx-d382和HBx-d431突变体及HepG2.2.15细胞株中HBx-2215基因的QSG7701细胞大小形态不一致、体积增大、核浆比例增大,生长速度更快,克隆形成率高（P〈0.05）。与转染空质粒pcDNA3S期百分比（29.4%）和凋亡率（13.1%）比较,pcDNA3/HBx-d382和pcDNA3/HBx-2215组细胞S期百分比比例增高,分别为32.8%和35.0%,pcDNA3/HBx-d431组凋亡率下降（4.5%）。结论 HBx-d382和HBx-d431缺失型突变体能促进QSG7701细胞增殖和恶性转化。     

HBx基因缺失型突变体HBx—d382与HBx—d431原核表达载体的构建和鉴定

目的为探讨HBx基因缺失型突变体HBx—d382和HBx—d431在临床上应用的价值,构建HBx基因缺失型突变体HBx-d382和HBx-d431原核表达载体。方法以pGM—T／HBx—d382和pGM—T／HBx-d431质粒为模板．PCR扩增含EcoRⅠ和XhoⅠ酶切位点的HBx基因片段。HBx基因PCR扩增产物与载体pET-28a（＋）经双酶切、连接,形成重组DNA后转化到大肠杆菌BL21（DE3）中,经卡那霉素筛选、酶切鉴定和DNA序列测定,筛选出重组HBx基因缺失型突变体原核表达载体。结果成功构建了重组pET-28a（＋）／HBx-d382和pET-28a（＋）HBx-d431原核表达载体,重组前后HBx基因片段序列一致。结论pET-28a（＋）／HBx-d382和pET-28a（＋）／HBx-d431原核表达载体构建成功,为HBx基因缺失型突变体HBx—d382和HBx—d431蛋白的免疫原性和临床应用的研究奠定了基础。     

乙肝病毒突变体HBx-d382 PCR检测方法的建立及临床应用

目的建立检测乙肝病毒突变体HBx-d382的PCR方法,探讨HBx-d382突变体在诊断HBV相关肝细胞癌中的应用价值。方法运用生物信息学和核苷酸合成的方法,设计和合成检测乙肝病毒突变体HBx-d382的特异性引物。采用PCR方法对82份HBV相关肝细胞癌病人血清、96份慢性HBV感染者血清和20份正常对照者血清中HBx基因进行检测。采用基因测序法对HBx基因进行分析,并与PCR结果进行比较。结果在慢性HBV感染者和肝细胞癌病人血清中,HBx-d382的检出率分别为2.1%与17.1%。与慢性HBV感染者相比,肝细胞癌病人血清中HBx-d382检出率较高(χ2=4.21,P0.05),且PCR检测结果与基因测序结果相符。结论肝细胞癌病人血清中存在乙肝病毒突变体HBx-d382,采用PCR方法检测HBx-d382突变体对早期诊断HBV相关肝细胞癌有一定的价值。     

HBx基因缺失型突变体HBx-d382与HBx-d431原核表达载体的构建和鉴定

目的为探讨HBx基因缺失型突变体HBx-d382和HBx-d431在临床上应用的价值,构建HBx基因缺失型突变体HBx-d382和HBx-d431原核表达载体。方法以pGM-T/HBx-d382和pGM-T/HBx-d431质粒为模板,PCR扩增含EcoRⅠ和XhoⅠ酶切位点的HBx基因片段。HBx基因PCR扩增产物与载体pET-28a(+)经双酶切、连接,形成重组DNA后转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,经卡那霉素筛选、酶切鉴定和DNA序列测定,筛选出重组HBx基因缺失型突变体原核表达载体。结果成功构建了重组pET-28a(+)/HBx-d382和pET-28a(+)HBx-d431原核表达载体,重组前后HBx基因片段序列一致。结论pET-28a(+)/HBx-d382和pET-28a(+)/HBx-d431原核表达载体构建成功,为HBx基因缺失型突变体HBx-d382和HBx-d431蛋白的免疫原性和临床应用的研究奠定了基础。     

血吸虫糖蛋白研究进展

有关血吸虫疫苗的研究迄今已有70余年的历史.90 年代中期WHO/TDR 选定了6 种曼氏血吸虫候选疫苗分子,它们是28kDaGST、97kDa 副肌球蛋白、62kDaIrv-5、28kDa磷酸丙糖异构酶(TPI)、23kDa表膜抗原和14kDa脂肪酸结合蛋白.但这些候选疫苗分子单独免疫尚不足诱导40%以上的免疫保护力.因而,对血吸虫疫苗保护性抗原及其效应机制的研究还需要进行大量的基础性工作.糖蛋白是血吸虫主要抗原物质,大量存在于童虫和虫卵阶段,在血吸虫免疫应答及免疫调节方面起着十分重要的作用.现已证明,血吸虫糖蛋白不仅可以诱导保护性抗体,亦可诱导封闭性抗体的产生[1].因此,研究血吸虫糖蛋白的结构、功能及免疫机制,可为血吸虫疫苗的发展提供新的策略.本文就血吸虫糖蛋白及其在疫苗研究中的进展概述如下.     

慢性乙肝血清免疫学检测阴性的原因分析

目的通过对慢性乙肝患者进行血清免疫学检测、基因检测与肝组织免疫组化检测,探讨临床上慢性乙肝血清免疫学检测阴性产生的原因,从而有利于临床医生对慢性乙肝的诊断及治疗。方法采用美国雅培Elisa试剂盒检测患者血清HBsAg、HBsAb、HBeAg三项,通过PCR方法定量检测血清HBV-DNA,采用menghini法穿刺取肝组织,用免疫组化法检测HBV抗原表达。同时采用组织学活动指数（HAI）评估肝细胞损伤程度;按慢性肝炎病理诊断标准进行分级（G）和分期（S）。结果24例血清HBVM阴性者（即HbsAg、HBeAg均阴性）被临床疑为慢性乙肝携带者10例,其中7例有10^4-10^5 copies／ml病毒负荷,3例有10^4copies／ml病毒负荷。剩余14例中,6例被临床原疑为慢性肝炎,有3例为10^5-10^6copies／ml、3例〉10^6copies／ml;剩下的8例临床疑为病毒负荷量低于10^4copies／ml的肝硬化者,均有HbsAg、HbcAg单独或同时在细胞质或细胞膜上表达,其中4例分级、分期为G2、S1,4例分级、分期为G3、S2。结论对可疑病例必须联合血清HBV-DNA检测和肝组织免疫组化检测才能明确诊断,弥补血清学检测的不足,从而使临床医生作出准确的诊断及预后判断。     

应用液态基因芯片技术对132例β-地中海贫血基因检测分析

目的用液态基因芯片技术检测深圳东部地区人群中β-地中海贫血分析常见类型。方法采用液态基因芯片技术，使用Luminex100多功能悬浮点阵检测仪及Lumi2 nex Data Collectorvisionl．7数据收集软件检测并通过突变标本与正常标本的莹光强度比值（Mutan／Normal）分析深圳东部地区人群5637例标本。结果发现132例携带β-地中海贫血突变基因，携带率为2．34%。其中常见点突变模式中CD41／42（TCTT）突变61例（占46．2％），IVS2—654（C→T）29例（21．9％），-25（A→G）突变14例（10．6％），-13（A→T）突变11例（8．3％），CD71／72（＋A）5例（3．8％），-29（A→G）突变杂合3例（2．27％），28（A→G）复合CD41／42-TCTT突变7例，其他少见杂合点突变2例，常见单点突变β-地中海贫血患者共123例为93．18％，少见模式和多点杂合突变共9例，为6．82％。     

彭祖文化是武夷山养生文化的集中体现

在武夷山,彭祖是一个家喻户晓、耳熟能详的神话人物,有关彭祖的文化遗迹更是随处可见。从某种意义上说,彭祖文化乃是武夷山神仙文化的代表和养生文化的集中体现。     

乙型肝炎免疫球蛋白聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒抑制HBsAg、HBV DNA分泌的体外实验

Objective To investigate the inhibitive activities of hepatitis B immunoglobulin(HBIG)poly(butylcynaoacrylate)nanoparticles(HBIG-PBCA-NP)to hepatitis B surface antigen(HBsAg)and hepatitis B virus(HBV)DNA secretions using HBV infected cell model in vitro.Methods HepG 2.2.15 cells were cultured with media containing HBIG-PBCA-NP or HBIG for several days,or cultured with HBIG-PBC-NP and HBIG for 2 days and without HBIG-PBCA-NP and HBIG from day 3.The supernatants at different time points were collected for quantitative detection of HBsAg and HBV DNA.The comparisons between groups were done by variance analysis.Resalts Secretions of HBsAg and HBV DNA in supernatants of HepG2.2.15 cultured with 0.1-10.0 IU/mL of HBIG-PBCA-NP and HBIG were inhibited significantly compared with control group.HBsAg titers and HBV DNA levels in supernatants of HBIG-PBCA-NP group and HBIG group cultured with media without HBIG-PBCA-NP and HBIG kept decreasing at day 5 and 7,then rebounded at day 9 and 11.HBsAg titera in supernatants of 0.1,1.0,5.0 IU/mL HBIG-PBCA-NP group were all significantly different from those in HBIG group at day 9[(31.31±1.98)μg/L vs(40.62±2.99)μg/L,(23.79±1.31)μg/L vs(36.51±2.12)μg/L,(19.91±1.74)μg/L vs(33.03±1.65)μg/L;F=412.24,P＜0.01].Couclusion HBIG-PBCA-NP can inhibit secretions of HgsAg and HBV DNA in vitro,which is more effective than HBIG.