乙肝病毒HBx-d382与HBx-d431突变体特异性抗体检测方法的建立及临床应用

目的建立检测乙肝病毒X基因突变体HBx-d382和HBx-d431特异性抗体的方法,探讨其在诊断HBV相关性肝细胞癌中的应用价值。方法通过生物信息和多肽合成的方法,制备HBx-d382和HBx-d431特异性多肽抗原。采用间接ELISA法对正常人和慢性乙肝病毒感染者和肝细胞癌病人血清中抗HBx-d382和抗HBx-d431特异性抗体进行检测。结果肝细胞癌病人血清中抗HBx-d382和抗HBx-d431抗体的阳性率均高于正常人、慢性乙肝病毒感染者（P<0.05）,慢性乙肝病毒感染者抗HBx-d382和抗HBx-d431抗体的阳性率高于正常人（P<0.05）。慢性乙肝病毒感染者HBsAg(+)/HBeAb(+)/HBcAb(+)模式抗HBx-d382阳性率明显低于HBsAg(+)/HBeAg(+)/HBcAb(+)模式和HBsAg(+)/HBcAb(+)模式（P<0.05）,而抗HBx-d431和抗HBxP阳性率在这些血清学模式之间无显著性差异（P>0.05）。结论抗HBx-d382和抗HBx-d431是乙肝病毒感染的一种特异性抗体,可以用于HBV携带者及慢性乙肝病人的监测,对预测肝细胞癌的发生有一定的意义。     

液态芯片技术在β地中海贫血基因检测中的应用研究

目的探讨液态芯片技术在检测β地中海贫血基因突变常见类型的应用价值。方法采用液态芯片技术,使用Luminex100多功能悬浮点阵检测仪及Lumi2 nex Data Collector Version1.7数据收集软件检测并通过突变标本与正常标本的荧光强度比值（Mutan/Normal）分析100份正常人标本及68份PCR反向杂交技术确认的β地中海贫血基因突变标本。结果100份正常标本检测结果正常。68份β地贫基因突变检测结果为密码子CD41/42（TCTT）突变37例（54.41%）,IVS2-654（C→T）突变杂合12例（17.65%）,-28（A→G）突变10例（14.71%）,-17（A→T）突变5例（7.35%）,CD71/72（＋A）2例（2.94%）,-29（A→G）突变杂合1例（1.47%）。密码子71/72（＋A）复合IVS2-654（C→T）突变杂合1例,-28（A→G）复合密码子CD41/42-TCTT突变2例,单位点突变β地贫病人为95.59%（65/68）,多位点突变为4.41%（3/68）。7种突变杂合类型与常用方法PCR-RDB检测结果为100%符合率。结论液态芯片技术能准确区分β地贫基因突变杂合复合突变,可提供快速、敏感的临床β地贫基因突变检测技术平台。     

3种改良B族链球菌检测方法的检测效果比较

目的比较3种改良B族链球菌(GBS)检测方法的检测效果。方法纳入300例妊娠35～37周妇女,采集其阴道-直肠分泌物。分别用细菌培养法、免疫层析法、实时荧光定量PCR法直接检测样本GBS,并对样本进行增菌18～24 h、36～48 h后的浓缩菌液进行GBS检测。比较同一方法增菌前后的阳性检出率,以及增菌前和增菌18～24 h后3种方法的阳性检出率。结果增菌前、增菌18～24 h和36～48 h后,细菌培养法对GBS的阳性检出率分别为2.33%、9.33%、10.67%,免疫层析法的阳性检出率分别为5.33%、13.67%、14.67%,PCR法的阳性检出率分别为9.00%、12.67%、14.00%。各种方法增菌18～24 h、36～48 h后的阳性检出率均高于直接检测(均P<0.05),而增菌18～24 h、36～48 h后的阳性检出率差异无统计学意义(均P>0.05)。增菌前PCR法阳性检出率高于培养法(P<0.05),而增菌18～24 h后3种方法的阳性检出率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论检测前增菌18～24 h能提高细菌培养法、免疫层析法、P...     

深圳东部地区儿童呼吸道合胞病毒与肺炎支原体感染的相关性研究

目的分析深圳东部地区儿童呼吸道合胞病毒(RSV)与肺炎支原体(MP)感染的相关性。方法运用荧光定量聚合酶链反应技术检测2011-2015年儿童咽拭子中RSV与MP,并进行比较。结果2011-2015年RSV与MP总感染率为14.26%(639/4 482),其中RSV感染率为7.24%(312/4 311),MP感染率为7.30%(327/4 482)。2011-2015年RSV合并MP双重感染率为0.18%(7/3 956)。RSV上半年与下半年及逐年之间均存在明显差异。RSV与MP在5种常见呼吸道疾病中以支气管肺炎55.45%(173/312)与69.42%(227/327)感染率最高,其次是急性支气管炎31.73%(99/312)与20.80%(68/327)。结论 RSV与MP双重感染应引起临床高度重视;RSV流行与季节和气候环境相关,而且会出现连续性的高峰期;MP流行无明显季节性规律;RSV与MP在同一气候环境条件下高发流行呈相反趋势;RSV与MP主要引起儿童支气管肺炎,其次是急性支气管炎。     

深圳市乙肝疫苗免疫失败者S基因分析

目的了解乙肝疫苗免疫失败者的HBVS基因的变异情况。方法采用流行病学、ELISA与分子生物学方法,筛选乙肝疫苗免疫失败者。采用聚合酶链反应（PCR）、基因克隆和测序的方法,对乙肝疫苗免疫失败者的HBVS基因进行分析,并与HBV参考序列s基因进行比较,分析其变异情况。结果从2564份受检者中．筛选出2例（0．78％e）HBsAg（-）／HBeAg（＋）／HBcAb（＋）乙肝疫苗免疫失败者（HBsl、HBs2）,经HBVDNA荧光定量PCR检测和HBVS基因PCR扩增,结果均为阳性,为B基因型。其S基因序列与参考序列（JX429908．1）相比,同源性为98．57％,且乙肝疫苗免疫失败者s基因在第363位和第467位分别由野生型的C变为A、G变为A,HBsAg121位和156位氨基酸C和w缺失。结论乙肝疫苗免疫失败者HBVS基因上第363位和第467位碱基存在错义突变（C→A和G→A）,改变了HBsAg的结构和抗原性。     

急性脑出血患者血清甲状腺激素水平的变化及其临床意义

目的探讨急性脑出血患者血清甲状腺激素水平及其临床意义。方法根据脑出血量多少、神经功能缺损程度及治疗2周后的疗效,将98例急性脑出血患者分为：脑出血量≤30ml为A组、〉30ml为B组;神经功能缺损程度轻型的为C组、中型的为D组、重型的为E组;疗效为显效的为F组、有效的为G组、无效的为H组。选择40例健康者作对照。采用电化学发光法检测急性脑出血患者和健康对照者血清中T3、T4、FT3、FT4、TSH水平。结果急性脑出血患者A、B、C、D、E、G和H组与健康对照组,B组与A组,D、E组与C组,G、H组与F组之间,甲状腺激素水平差异均有统计学意义（P〈0.05）,T4、FT4、TSH水平升高,而T3、FT3水平下降。而疗效为显效的F组与健康对照组比较,甲状腺激素水平差异无统计学意义（P〉0.05）。结论急性脑出血患者T4、FT4、TSH水平升高和T3、FT3水平下降与病情的严重程度及预后密切相关。     

SIEA-Gp101分子抗原的分离纯化及其单特异性抗血清的制备

应用SDS PAGE、电渗、透析等方法 ,分离纯化SIEA Gp10 1分子抗原。采用多途径免疫法制备单特异性抗血清 ,琼脂扩散试验和ELISA测定抗体的效价 ,SDS PAGE和ELIB检测抗体的特异性。结果表明纯化的SIEA Gp10 1为单一抗原分子 ,对SIEA Gp10 1的抗血清进行ELIB分析 ,证明其仅识别SIEA Gp10 1抗原 ,说明SIEA Gp10 1分子具有抗原性。     

乙型肝炎免疫球蛋白聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒抑制HBsAg、HBV DNA分泌的体外实验

Objective To investigate the inhibitive activities of hepatitis B immunoglobulin(HBIG)poly(butylcynaoacrylate)nanoparticles(HBIG-PBCA-NP)to hepatitis B surface antigen(HBsAg)and hepatitis B virus(HBV)DNA secretions using HBV infected cell model in vitro.Methods HepG 2.2.15 cells were cultured with media containing HBIG-PBCA-NP or HBIG for several days,or cultured with HBIG-PBC-NP and HBIG for 2 days and without HBIG-PBCA-NP and HBIG from day 3.The supernatants at different time points were collected for quantitative detection of HBsAg and HBV DNA.The comparisons between groups were done by variance analysis.Resalts Secretions of HBsAg and HBV DNA in supernatants of HepG2.2.15 cultured with 0.1-10.0 IU/mL of HBIG-PBCA-NP and HBIG were inhibited significantly compared with control group.HBsAg titers and HBV DNA levels in supernatants of HBIG-PBCA-NP group and HBIG group cultured with media without HBIG-PBCA-NP and HBIG kept decreasing at day 5 and 7,then rebounded at day 9 and 11.HBsAg titera in supernatants of 0.1,1.0,5.0 IU/mL HBIG-PBCA-NP group were all significantly different from those in HBIG group at day 9[(31.31±1.98)μg/L vs(40.62±2.99)μg/L,(23.79±1.31)μg/L vs(36.51±2.12)μg/L,(19.91±1.74)μg/L vs(33.03±1.65)μg/L;F=412.24,P＜0.01].Couclusion HBIG-PBCA-NP can inhibit secretions of HgsAg and HBV DNA in vitro,which is more effective than HBIG.     

乙肝病毒携带者铁代谢与血清铁调素相关性研究

目的：研究乙型肝炎病毒携带者血清铁调素与机体铁代谢的关系。方法：选取465例乙型肝炎病毒携带者为研究对象（重度肝炎组76例,中度肝炎组136例,轻度肝炎组253例）,169例正常健康人员为对照组,比较各组血清铁调素、铁蛋白（SF）、血清铁（SI）、C反应蛋白（CRP）的检测情况。结果：SI：重度肝炎组出现升高,与其他3组比较均有统计学差异（P〈0.05）,对照组、轻度肝炎组及中度肝炎组3组比较无统计学差异（P〉0.05）。SF：任意两组比较均有统计学差异（P〈0.05）,随肝炎病情加重依次升高。铁调素：对照组、轻度肝炎组比较无统计学差异（P〉0.05）,重度肝炎组、中度肝炎组依次降低,与其他各组比较有统计学差异（P〈0.05）。CRP：4组均存在统计学差异（P〈0.05）,随肝炎病情加重依次升高。相关性分析：铁调素与铁蛋白、CRP均呈负相关（P〈0.05）,相关系数以CRP较高,铁调素与血清铁无相关性（P〉0.05）。结论：铁调素与慢性乙型肝炎的铁过载关系密切,铁调素降低的程度可反映疾病的严重性,重型乙型肝炎中普遍存在铁调素过低及铁过载现象,消除铁过载对延缓肝硬化进程有重要的临床意义。     

深圳地区慢性HBV感染者血清中HBx基因多态性分析

目的:研究HBV感染者血清学模式与HBx基因多态性的关系。方法:采用聚合酶链反应、单链构象多态性和异源双链分析的方法对HBV感染者血清中HBx基因进行多态性分析。结果:在HBsAg(+)/HBeAg(+)/HBcAb(+)、HBsAg(+)/HBeAb(+)/HBcAb(+)和HBsAg(+)/HBcAb(+)血清学模式中,HBx基因双链区(nt1595-1881)多态性不明显(P(0.05),带形基本一致;HBx基因单链区(nt1365-1625)多态性明显,HBsAg(+)/HBeAg(+)/HBcAb(+)模式PCR扩增产物条带数与HBsAg(+)/HBcAb(+)模式相比,差异显著(P(0.05)。结论:慢性HBV感染者不同血清学模式HBx基因存在多态性,其多态性主要表现在HBx基因单链区。