B淋巴细胞刺激因子及其受体与多发性骨髓瘤关联性的临床实验诊断研究

目的:探讨B细胞激活因子(BLyS) 及其受体在多发性骨髓瘤(MM)发病中的作用机制.方法:用酶联免疫吸附测定法(ELISA)和实时荧光定量聚合酶链反应 (RFQ-PCR),对19例MM患者和30名健康人血清BLyS含量、外周血单个核细胞(PBMCs) 中BLyS及其受体mRNA 含量进行检测;并比较MM患者血清BLyS含量与外周血BLyS及其受体基因表达水平和免疫球蛋白(IgG、IgA、IgM)浓度、乳酸脱氢酶(LDH)、轻链(kap、lam)的相关性.结果:MM患者血清 BLyS含量[(7.95±4.93) g/L 明显高于健康对照组[(2.70±1.09) g/L,P<0.01 ,并与LDH浓度呈正相关性(r=0.734,P<0.001);97.4% (18/19),84.2% (16/19)的MM患者PBMCs中BLyS、BCMA mRNA表达水平较正常人明显增高,并且也与LDH的含量呈正相关;而47.32% (9/19)患者TACI mRNA表达水平降低.结论:MM患者的血清BLyS蛋白浓度和PBMCs中BLyS及其受体基因表达水平有异常改变,说明BLyS及其受体可能参与MM的发病;BLyS及其受体表达水平也许可作为预后的一个指标.     

流式细胞仪检测大鼠外周血T细胞亚群(微量全血法)

本实验利用MRC W/OX系列单克隆抗体和流式细胞仪(Epics C型)首次建立了微量全血检测大鼠外周血T细胞亚群的方法,并报告了正常成鼠外周血T细胞亚群分布(n=60):OX-19+细胞占65.45±5.98％(SD),W3/25~+细胞占47.17±6.45％,OX-8~+细胞占24.26±6.18％。W3/25~+亚群和OX-8~+亚群比值为2.12±0.11(SEM)。部分标本流式细胞仪分析结果和荧光显微镜的结果无明显差异(P>0.05)。在抗体染色条件方面,发现当温育温度过高(30℃)时,染色阳性细胞率有明显下降(P<0.001)。实验证实,用微量全血染色不仅简便、可靠、重复性好,且用血量少。同时避免了常规Ficoll分离法时种种弊病。因此用本法可动态观察大鼠外周血T细胞亚群的变化,为进一步研究在药理、病理和免疫学实验中的细胞免疫功能变化提供了方便。     

血清和胸水IL－2检测在肺部疾病中的意义

血清和胸水ＩＬ－２检测在肺部疾病中的意义张玲珍，李莉，王华梁，孔宪涛（第二军医大学附属长征医院实验科上海２００００３）体液中ＩＬ－２含量的变化可以反映机体某一组织的免疫活性状态，特别是Ｔ细胞的功能。为了探讨疾病状况下体液中ＩＬ－２含量的变化，我们用放...     

非特异性高γ球蛋白血症与尿中轻链关系的探讨

<正> 高γ球蛋白血症在实验室颇为常见,醋纤膜电泳常表现为γ部分有弥漫性增多,扫描可见其基底宽而不匀,临床上常示意有明显的免疫球蛋白异常。如在系统性红斑狼疮患者中大多有显著的高γ球蛋白血症,大部分属于IgG类的免疫球蛋白。而在肝硬化患     

IL-6、IL-1及TNF对人类骨髓瘤细胞系KM_2、KM_3增殖的影响

细胞因子的异常表达对骨髓瘤细胞的恶性增殖起重要作用。本文研究了IL-6、IL-1及TNF 对人骨髓瘤细胞系增殖的影响。KM_2、KM,均能分泌IL-6,以维持自身的增殖。培养体系中加入抗IL-6抗体可抑制瘤细胞的增殖,这种抑制作用可通过加入重组IL-6而逆转.在培养体系中加入重组IL-6和TNF 均可促进KM_2、KM_3的增殖,而IL-1无此作用。培养体系中加入TNF 培养后,上清中IL-6活性增高。我们的结果提示,人骨髓瘤细胞系KM_2、KM_3存在IL-6自分泌增殖机制,而TNF 可加强这种自分泌作用。     

肿瘤免疫治疗的新型效应细胞—肿瘤浸润的淋巴细胞

剪切后酶消化与机械分离结合是TIL 分离较成熟的方法。TIL 中以T 细胞为主。CD_8~+与CD_4~+细胞比例与肿瘤生物学行为、病期等有关。原位TIL 呈现普遍的免疫抑制状态,这种抑制的解除和免疫活性的产生有赖于PHA,IL-2等的体外刺激。与细胞毒活性有关的细胞成分为CD_(25)~+,Leu19~+亚群。介导实验动物肿瘤消退作用较PBL 来源的LAK 细胞强50～100倍,临床应用有反应者在60%以上。TIL 是肿瘤免疫治疗倍受重视的新型效应细胞。     

IL-2重组逆转录病毒载体的构建及介导的肝癌特异性基因治疗研究

将小鼠白细胞介素２（ｍＩＬ－２）ｃＤＮＡ全序列克隆到逆转录病毒载体ｐＭＮＳＭ的ＰＬ位点，使其转录受ＳＶ４０早期启动子驱动，构建ｐＭＮＳＭ－ＳＶ４０－ｍＩＬ－２。用小鼠白蛋白增强子／启动子（Ａｌｂｅ／ｐ）置换ｐＭＮＳＭ－ＳＶ４０－ｍＩＬ－２中ＳＶ４０启动子，构建ｐＭＮＳＭ－Ａｌｂｅ／ｐ－ｍＩＬ－２。经酶切鉴定符合要求。将重组体用磷酸钙共沉淀法导人逆转录病毒包装细胞ｐＡ３１７中，用所得的重组病毒在８μｇ／ｍｌＰｏｌｙｂｒｅｎｅ存在条件下体外感染小鼠肝癌细胞（ＭＭ４５Ｔ．Ｌｉ、ＢＮＬＩＭＥ）、黑色素瘤…     

重组人TGF-β1对TGF-β1基因启动活性的影响

目的：探讨TGF-β1对人TGF-β1基因自身启动子活性的影响。方法：以人全血基因组DNA为模板，PER扩增获得TGF-β1基因转录起始位点上游5′端-1328～ 812bp和 227～ 812bp的片段，以此作为启动子与含氯霉素乙酰基转移酶(CAT)报告基因而不含启动子的pCAT-enhancer质粒构建成重组质粒，并将其转染至大鼠星状细胞株nFSC中，细胞在DMEM培养基中进行培养，用不同浓度的TGF-β1进行干涉，测定并比较细胞的CAT表达水平。结果：不同浓度的TGF-β1对大鼠的肝脏星状细胞的增殖具有抑制作用，而且这种抑制作用在实验用的浓度范围内具有剂量依赖关系；浓度为2．5ng/ml TGF-β1可以使转染phTGF0．585、phTGF1．120、phTGF1．423、phTGF1．680、phTGF2．140质粒的大鼠肝星状细胞的CAT活性分别增加2～5倍。结论：TGF-β1在大鼠nFSC细胞中对TGF-β1启动子活性具有自身促进作用，为进一步研究TGF-β1的调节机制提供了依据。     

人胰弹力蛋白酶Ⅱ的分离纯化和抗血清制备

<正> 弹力蛋白酶(elastsae)产生于胰腺腺泡,在外分泌胰液中以酶原的形式存在,并可被胰蛋白酶所激活。现知该酶在急性胰腺炎病理过程中,对血管壁破坏、弹力组织崩解及组织间隙出血等血管损害起关键作用。利用放射免疫分析法测定血清弹力蛋白酶不仅对急性胰腺炎的诊断有重要意义,还将