大肠埃希菌耐药基因及可移动遗传元件与噬菌体原遗传标记研究

目的调查大肠埃希菌临床分离株的耐药性及遗传学特征。方法收集2009年1-12月患者尿液标本中分离的大肠埃希菌20株,采用聚合酶链反应(PCR)及序列分析的方法分析23种β-内酰胺酶基因、14种氨基糖苷类修饰酶基因、6种16SrRNA甲基化酶基因、8种可移动遗传元件遗传标记、9种噬菌体原遗传标记以及与细菌细胞分裂相关的2种基因(dicB、kilR),与细菌致病性相关的2种基因(hofQ、ompT)。结果 20株大肠埃希菌共检出3种β-内酰胺酶基因、6种氨基糖苷类修饰酶基因、1种16SrRNA甲基化酶基因,7种可移动遗传元件遗传标记、6种噬菌体原遗传标记、2种与细菌细胞分裂相关的基因、2种与细菌致病性相关的基因;20株大肠埃希菌全部基因检测结果的样本聚类分析示,1、4、9、10号株为一簇,其余为另一簇。结论对大肠埃希菌尿液分离株进行β-内酰胺酶基因、氨基糖苷类修饰酶基因、16SrRNA甲基化酶基因、可移动遗传元件遗传标记、噬菌体原遗传标记以及与细菌细胞分裂相关的基因,与细菌致病性相关的基因检测与分析,国内为首次,从样本聚类分析图可见,虽无克隆传播,但6、12号株与7、18号株有较近的亲缘关系,有医院感染的可能性。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药基因与毒力基因检测研究

目的调查耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)6种耐药基因与4种毒力基因的携带状况,分析其阳性率及阳性模式。方法收集2011年1-12月江苏省江阴市及浙江省宁波市2所三级医院住院患者临床标本中分离到的31株金黄色葡萄球菌,用聚合酶链反应(PCR)法分析6种耐药基因(mecA、aac(6′)/aph(2″)、aph(3′)-Ⅲ、ermA/B/C、tetM、qacA/B)与4种毒力基因(sasX、psm-mec、pvl、tst)。结果 31株金黄色葡萄球菌mecA、aac(6′)/aph(2″)、aph(3′)-Ⅲ、ermA/B/C、tetM、qacA/B、sasX、psm-mec、pvl、tst阳性率分别为100.0%、96.8%、77.4%、96.8%、90.3%、38.7%、74.2%、93.5%、96.8%、0,可分为7种阳性结果模式。结论对MRSA进行6种耐药基因及4种毒力基因检测研究尚为国内外首次;MRSA携带耐药基因和毒力基因,与人体感染性疾病的种类及与病程、转归有关,值得作多中心大规模调查。     

大肠埃希菌对β-内酰胺类药物耐药特征及分子流行病学研究

目的 调查大肠埃希菌尿液分离株中β-内酰胺酶基因、AmpC酶基因和膜孔蛋白ompC基因的存在和变异情况.方法 对宁波市第一医院2008年10月至2009年3月患者尿液样本中分离的大肠埃希菌(28株)采用PCR及序列分析的方法,分析15种β-内酰胺酶基因、6种AmpC酶基因和膜孔蛋白ompC基因.结果 28株大肠埃希菌仅...     

多重耐药大肠埃希菌接合性质粒与转座子遗传标记

目的调查多重耐药大肠埃希菌中接合性质粒与转座子的分布状况。方法从患者尿液标本中分离多重耐药大肠埃希菌60株,采用聚合酶链反应(PCR)法分析接合性质粒遗传标记traAt、rbC和转座子遗传标记ISEcp1I、S26t、np513。结果 5种基因在60株多重耐药大肠埃希菌中均有检出,traAt、rbCI、SEcp1I、S26t、np513阳性率分别为81.7%(49/60)、70.0%(42/60)、76.7%(46/60)、83.3%(50/60)、38.3%(23/60)。有58株菌至少检出1种基因,各菌株基因阳性数1~5种不等,共可分为17种阳性基因模式。其中,15株菌同时检出5种基因,22株菌同时检出4种基因,12株菌同时检出3种基因,5株菌同时检出2种基因,4株菌仅检出1种基因。结论本组大肠埃希菌中接合性质粒与转座子的阳性率高,多重耐药的表型可能与携带接合性质粒和转座子、插入序列导致耐药基因高表达相关。耐药基因水平转移是导致医院感染病原菌耐药性快速传播的常见机制。     

耐头孢哌酮钠/舒巴坦钠的鲍曼不动杆菌体外敏感性试验研究

鲍曼不动杆菌是院内感染的重要条件致病菌之一,如何治愈泛耐药鲍曼不动杆菌(青霉素类、头孢菌素类、碳青霉烯类、β内酰胺酶抑制剂复合物类、氟喹诺酮类和糖肽类全部耐药)是迄今为止全球范围内的一个难题[1-2].耐头孢哌酮钠/舒巴坦钠的鲍曼不动杆菌引起的感染以及医院内暴发流行在目前临床上尤为棘手.本研究筛选出耐头孢哌酮钠/舒巴坦钠的泛耐药鲍曼不动杆菌菌株100株,进行体外的抗菌药物敏感性试验.     

肺炎克雷伯菌老年患者分离株耐药性与膜孔蛋白基因分子进化分析

目的了解肺炎克雷伯菌(KPN)老年患者分离株抗菌药物耐药状况和膜孔蛋白基因分子进化状况。方法对38株分离自老年患者的KPN进行了20种抗菌药物敏感性检测和膜孔蛋白基因(ompK36)测序及分子进化分析。结果38株分离自老年患者的KPN对抗菌药物敏感性低,38株均检出ompK36基因,产物经测序比对,各株分别获得623~656 bp同源序列;敏感株(2号株)为650 bp,8、9、11、23号株获得656 bp,为CGGCGA小片段插入;其余各株分别小片段缺失。结论38株分离自老年患者的KPN连续分离株对20种抗菌药物敏感性低,KPN连续分离株膜孔蛋白ompK36基因具有较好的多态性。     

多药耐药大肠埃希菌尿液分离株插入序列遗传标记研究

目的 调查多药耐药大肠埃希菌尿液分离株中插入序列遗传标记的存在情况.方法 收集宁波市第一医院2008年10月-2009年3月住院患者尿液标本中分离的多药耐药大肠埃希菌共28株,采用聚合酶链反应(PCR)及序列分析的方法,分析3种插入序列遗传标记:ISEcpl、IS26、IS903.结果 28株大肠埃希菌中3种插入序列遗传标记均有检出:IS26 28株检出率为100.0％、ISEcp1 21株检出率为75.0％、IS903 7株检出率为25.0％.结论 多药耐药大肠埃希菌尿液分离株中插入序列有较高的携带率,插入序列介导各种耐药基因,使受体菌表现为多药耐药,在大肠埃希菌中检出插入序列IS903是国内首次报道.     

社区获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌儿童分离株功能基因分型

目的调查社区获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(CA-MRSA)分离株的毒力基因、耐药基因的分型情况。方法 20株CA-MRSA分离自2010年1-12月儿童专科医院门诊因皮肤软组织感染就诊者,为病灶部拭子样本,采用聚合酶链反应(PCR)的方法对菌株进行了6种真性毒力基因(sasX、pvl、psm-mec、tst、hla、hlg)、4种黏附毒力基因(fnbA、clfA、clfB、icaA)和8种耐药相关基因(mecA、aac(6′)/aph(2″)、aph(3′)-Ⅲ、ant(4′)、ermA/B/C、tetM、qacA/B、nes)检测,并进行毒力与耐药功能基因分型。结果 20株CA-MRSA对苯唑西林、头孢西丁、亚胺培南的耐药率均为100.0%;3种氨基糖苷类修饰酶基因合并检出18株,阳性率90.0%,20株CA-MRSA毒力与耐药功能基因分型可分13种类型,其中11和19号菌无毒力基因检出率为10.0%。结论对CA-MRSA进行毒力与耐药基因分型尝试国内鲜有报道,MRSA毒力基因的高检出率和菌株致病性高度相关,耐药基因的高检出率和菌株多药耐药表型一致,但未检出sasX与hlg。     

全基因测序法分析肺炎克雷伯菌JM45株对喹诺酮类药物耐药基因

目的分析泛耐药肺炎克雷伯菌JM45株携带的喹诺酮类药物耐药基因,研究其对喹诺酮类药物的耐药机制。方法采用Roche454高通量测序技术对肺炎克雷伯菌JM45株做全基因组测序(完成图),分析喹诺酮类耐药基因携带状况,再将gyrA与parC全长基因与其他6株肺炎克雷伯菌做分子进化分析。结果最终得到JM45株一条完整的基因组(染色体)序列及两条质粒序列;基因组(染色体)序列大小为5 273 812bp(GC含量65.8%),质粒1序列大小为317 156bp(GC含量53.0%),质粒2序列大小为12 209bp(GC含量55.3%);在基因组(染色体)序列中携带了gyrA基因(全基因组Feature ID:KPN_1614),parC基因(Feature ID:KPN_0743);与肺炎克雷伯菌喹诺酮类药物敏感株相比较,gyrA基因第83位密码子由TCC→ATC,翻译成氨基酸序列后丝氨酸(Ser)→异亮氨酸(Ile),parC基因第80位密码子由AGC→ATC,翻译成氨基酸序列后丝氨酸(Ser)→异亮氨酸(Ile)。结论肺炎克雷伯菌JM45株喹诺酮类药物耐药是gyrA基因和parC基因喹诺酮耐药决定区(QRDR)突变所致;gyrA与parC全长基因的分子进化分析提示JM45株与肺炎克雷伯菌HS11286关系最为接近(序列相同),与肺炎克雷伯菌342关系最远。