31例脊髓拴系综合征患者的远红外热像特征分析

目的分析脊髓拴系综合征患者的远红外热像特征。方法我院诊断出的脊髓拴系综合征患者31例,暴露检查部位,应用ATIR-M301B非制冷焦平面远红外热像仪,采取不同部位远红外热图,测量远红外热像图中同部位两侧的温度差,并进行统计学分析。结果脊髓拴系综合征患者检测部位的远红外热像显示,双下肢远红外热像图呈左右不对称分布,主要呈缺血性改变。肌肉萎缩的下肢呈低温改变,腰骶部脂肪沉积的呈低温改变;足部溃疡处呈高温改变;既往曾行手术的瘢痕处呈高温改变。红外热像检查结果与患者主诉和主要异常体征检查基本一致。结论远红外热像检查能较好的反映出脊髓拴系综合征患者身体相应部位的异常温度变化,为临床诊治该类疾病提供功能学影像依据,是对CT和MRI及超声等组织形态学影像技术的重要补充。     

长期体外培养条件下海藻酸钙-多聚赖氨酸-海藻酸钙微囊化牛肾上腺嗜铬细胞的变化

目的:了解在体外长期培养的条件下,海藻酸钙-多聚赖氨酸-海藻酸钙微囊化牛肾上腺嗜铬细胞的形态及其细胞活率的变化。方法:实验于2003-09/2004-05在解放军总医院老年医学研究所细胞生物学室完成。①材料:细胞为牛肾上腺嗜铬细胞;海藻酸钠和多聚赖氨酸由SIGMA公司提供;DMEM-H培养液由GIBCO公司提供;加强型小牛血清由HYCLONE公司提供。②方法:用海藻酸钙-多聚赖氨酸-海藻酸钙微胶囊包裹牛肾上腺嗜铬细胞,以含有体积分数为0.1的小牛血清的DMEM-H培养基培养于CO2孵箱中,定期换液。③观察指标:在光学显微镜下观察微囊及囊内细胞的形态;以锥虫蓝染色法计数囊内细胞的数量和存活率,观察时间为8个月以上。结果:①微囊包裹后1d时,光镜下见微囊呈圆形,囊膜完整,表面光滑;囊内为单个细胞,均匀散在分布。体外培养35d时,微囊仍呈圆形,囊膜完整,表面光滑;囊内细胞聚集成体积较小的团块。体外培养240d时,微囊形态无明显变化;囊内大部分细胞已聚集成多个体积较大的团块,少数微囊内的细胞聚集成一个大的细胞团。②随着培养时间的延长,囊内细胞数量逐渐减少,从最初的(54±10)个/囊减少到培养243d时的(35±7)个/囊,但差异无显著性意义(P>0.05);囊内细胞的活率无明显改变,开始为95%,到培养243d时仍有93%的细胞存活。结论:在体外培养条件下,海藻酸钙-多聚赖氨酸-海藻酸钙微囊化牛肾上腺嗜铬细胞可较长时间地保持良好状态。     

海藻酸钙微球与海藻酸钙-聚赖氨酸-海藻酸钙微囊包裹对不同种类细胞生长的影响

目的：观察海藻酸钙微球或海藻酸钙-聚赖氨酸-海藻酸钙微囊包裹对不同特性细胞生长的影响。方法：实验于2004-04／2005-04在解放军总医院老年医学研究所细胞生物学研究室完成。细胞：牛肾上腺嗜铬细胞、Swiss小鼠胚胎成纤维细胞株（3T3）、人早幼粒白血病细胞株。仪器和试剂：加拿大Sun氏静电微囊发生仪；体视显微镜；海藻酸钠，聚赖氨酸、氯化钙、柠檬酸钠。制备海藻酸钙微球和海藻酸钙-聚赖氨酸-海藻酸钙微囊，分别用其包裹3T3细胞、牛肾上腺嗜铬细胞及人早幼粒白血病细胞。按照细胞的不同及包裹材料的不同，分为裸细胞组、海藻酸钙微球组、海藻酸钙-聚赖氨酸-海藻酸钙微囊组。在光镜下观察体外培养的微球、微囊及细胞的形态、存活率、增殖率。细胞增殖率=培养后细胞数-培养前细胞数／培养前细胞数&;#215;100％。结果：光镜下见包裹后即刻海藻酸钙微球和海藻酸钙-聚赖氨酸-海藻酸钙微囊呈大小均一的半透明圆球，直径150-300μm，表面光滑。培养24h时，牛肾上腺嗜铬细胞、3T3或人早幼粒白血病细胞均呈单个细胞，均匀分散于微球或微囊内。培养120h时，牛肾上腺嗜铬细胞、3T3和人早幼粒白血病细胞在海藻酸钙-聚赖氨酸-海藻酸钙微囊内聚集成团块，而在海藻酸钙微球内仍呈单个细胞散在分布。①海藻酸钙微球或海藻酸钙～聚赖氨酸-海藻酸钙微囊内高增殖活性的3T3或人早幼粒白血病细胞的存活率显著高于牛肾上腺嗜铬细胞（74．38&;#177;7．72，89D8&;#177;3．05，87．48&;#177;3．43，92．40&;#177;7．56，72．67&;#177;2．08，89．33&;#177;5．13，P〈0．01）；海藻酸钙-聚赖氨酸-海藻酸钙微囊内细胞存活率均显著高于海藻酸钙微球内同一种细胞的存活率（87．88&;#177;38,89．08&;#177;3．05，89．63&;#177;5．55，85．33&;#177;4．86,92．40&;#177;7．56，95．08&;#177;3．81，83．67&;#177;5．51，89．33&;#177;5．13，85．33&;#177;2．08，P〈0．01）。②在不同状态下，培养72和120h时，人早幼粒白血病细胞或3T3细胞的增殖率存在差异，海藻酸钙微球或海藻酸钙-聚赖氨酸-海藻酸钙微囊内同种细胞的增殖率显著高于裸细胞组（2．54&;#177;0.55,5：20&;#177;2．38,2．30&;#177;0．70,2．26&;#177;0．83，3．89&;#177;1．89，13．37&;#177;16．14，P〈0．05）；而在不同状态下牛肾上腺嗜铬细胞的增殖率差异无显著性（P〉0．05）。③在相同状态下，培养72和120h时，人早幼粒白血病细胞增殖率明显高于3T3或牛肾上腺嗜铬细胞（18．66&;#177;7．76，39．11&;#177;16．06，P〈0.01）；而3T3与牛肾上腺嗜铬细胞的增殖率差异无显著性（P〉0．05）。④对同一种细胞，培养24，72和120h时，海藻酸钙微球与海藻酸钙-聚赖氨酸-海藻酸钙微囊相比，其细胞的增殖率差异均无显著性（P〉0．05）。结论：在培养条件下，海藻酸钙微球或海藻酸钙-聚赖氨酸-海藻酸钙微囊包裹似更利于该3种细胞的生长；海藻酸钙-聚赖氨酸-海藻酸钙微囊包裹较海藻酸钙微球包裹更利于同种细胞的生长。     

生物素标记IL－6基因探针检测MOFE大鼠外周血IL－6mRNA表达水平

将光敏生物素标记含目的基因的质粒ＤＮＡ，用ＤＮＡａｓｅ随机切成１００－５００ｂｐ大小标记探针与待测老龄大鼠多衰模型中外周血的单核淋巴细胞在适当条件下进行杂交，应用原位核酸分子杂交方法，鉴定分析老龄大鼠多器官衰竭中ＩＬ－６ｍＲＮＡ表达水平。实验结果显示：静脉注射油酸造成急性肺损伤后，再注射小剂量内毒素可造成老龄大鼠ＭＯＦＥ模型；ＩＬ－６基因探针对于外周血有敏感的杂交信号，随着损伤加强ＩＬ－６ｍＲＮＡ表达递增。结果表明ＩＬ－６基因探针可用于检测多器官衰竭的程度。     

生物素标记L—选择素cDNA探针检测小型猪白细胞L—选择素mRNA表达

光敏生物素标记含目的基因的质凿ＣＤＮＡ，用ＤＮＡａｓｅ随机切成１００ｂｐ大小标记探釜与小型猪心肌缺血模型中白细胞，在适当条件下进行杂交，测定白细胞Ｌ－选择素ＭＲＮＡ的表达水平，实验结果显示：Ｌ－选择素ＣＤＮＡ基因探针对于小型猪缺血细胞有敏感的杂交信号，术后３０分钟白细胞Ｌ－选择素ＭＲＮＡ由阴性转化为阳性，此后表达水平逐渐降低，实验结果为临床心肌缺血患者围手术期的内科保健提供理论参考。     

AR-GFP融合基因真核表达载体的构建及在HEK293细胞中的表达

目的：构建由绿色荧光蛋白（GFP）标记的人醛糖还原酶（AR）融合基因真核表达载体并在HEK293细胞中表达。 方法:应用DNA重组技术构建AR与GFP的融合基因（AR-GFP），将AR-GFP插入pcDNA3.1/myc-HisA真核表达载体中，通过磷酸钙共沉淀转染HEK293细胞，倒置荧光显微镜评价转染效率，Western blotting 技术检测AR基因在转染细胞中的整合及表达，分光光度法（UV法）测定AR表达活性，用公认的AR抑制剂（ARI）反证活性AR的存在。结果:荧光显微镜对转染细胞的观察及Western blotting 结果证实AR-GFP融合蛋白在HEK293细胞中表达，UV法测活、ARI抑制试验均未证实其生物学活性。 结论:转染的HEK293细胞可成功地表达AR-GFP融合蛋白，但不能成为ARI真核细胞筛选模型。     

一阶导数分光光度法测定灭滴灵栓的含量

 采用一阶导数分光光度法测定灭滴灵栓的含量，克服了非水溶媒滴定法国温热萃取溶剂的刺激性和腐蚀性，操作简便、快速，结果准确。平均回收率为101．1％±0．66％，RSD为0．65％（n＝6）。     

分泌人肿瘤坏死因子α的基因工程细胞系的建立

目的:建立稳定的基因工程细胞系.方法:将含有人肿瘤坏死因子α(hTNFα)全长cDNA插入表达载体pSNAV2.0,产生重组质粒pSNAV2.0-TNFα,利用阳离子脂质体介导将其转染到人HEK-293细胞中,G418筛选阳性克隆hTNF/293,采用Western blot检测转染细胞上清中hTNF蛋白的表达.结果:通过Sal I和EcoR I双酶切、PCR及测序鉴定证明:在质粒pSNAV2.0中插入片段正确.采用RT-PCR和Western blot法检测表明HEK-293细胞培养上清中有hTNFct蛋白表达,分子量为17KDa.结论:成功构建重组质粒pSNAV2.0-TNFα,真核表达载体构建正确,转染HEK-293细胞后可有效分泌hTNFα蛋白,并能分泌到细胞外.     

我国汉族妇女维生素D 受体基因多态性和骨质疏松关系的研究

旨在探讨维生素D受体 (VDR)基因多态性与骨质疏松的关系 ,采用聚合酶链反应限制性片段长度多态性技术对 162例健康汉族中老年妇女和 17例骨质疏松患者的VDR基因进行分型 ,并计算其基因频率分布。结果 :正常对照组VDR基因bb、Bb、BB基因型分别为 91.36%、8.64%、0 % ;骨质疏松组分别为 82 .35%、17.65%、0 % ,两组各型均无显著性差异。VDR基因多态性具有种族差异性 ,就目前调查例数而言 ,我国汉族人骨质疏松与BB基因型无明显相关性。