靶向融合防龋DNA疫苗研究(Ⅱ)-编码人Ig基因的质粒pJIg的构建

目的:构建编码人免疫球蛋白Igγ1铰链区和恒定区基因的质粒pJIg,为进一步研制靶向融合防龋DNA疫苗做准备.方法:从人外周淋巴细胞中获得细胞总RNA并合成cDNA第一链,利用半巢式PCR扩增Igγ1恒定区序列,进行T-A克隆,构建pJIg质粒,酶切电泳,并测序鉴定.结果:RT-PCR获得了目的基因,质粒pJIg携带有Igγ1目的片段基因.结论:成功构建编码人免疫球蛋白Igγ1恒定区基因的质粒pJIg.     

米诺环素对人牙周韧带细胞矿化能力的影响

目的探讨米诺环素对人牙周韧带细胞(periodontal ligament cells，PDLCs)碱性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)活性及矿化结节形成能力的影响。方法将不同浓度的米诺环素(0，1，5，20，100，200mg／L)加入体外培养的第4代HPDLCs中，孵育4天后，检测其对细胞ALP活性的影响；将第4代的PDLCs在体外进行长期培养，实验组加入矿化液和米诺环素(20mg／L或100mg／L)，对照组只加矿化液。28天后用茜素红与VonKossa染色检测矿化结节的形成。结果20mg／L和100mg／L的米诺环素能显提高PDLCs的ALP活性．其中20mg／L具有最大的促进效应，对体外矿化结节的形成，亦有一定程度的促进作用。结论米诺环素有促进牙周韧带细胞向成骨细胞方向转化的趋势，从而有助于牙周新附着的形成。     

兔牙本质磷酸蛋白稳定性分析

目的：探讨兔牙本质磷酸蛋白（Dentin phosphoproteins,DPP）的稳定性机制。方法：通过钙离子沉淀法从兔切牙牙本质非胶原蛋白（Dentin non-collagenous proteins,NCP）中提取DPP，并应用凝胶过滤及离子交换层析技术纯化磷酸蛋白，同时观察多种蛋白酶抑制剂对DPP降解的抑制作用。结果：钙离子能够启动DPP的降解系统，而该作用可被巯基蛋白酶抑制剂N－顺丁烯二酰亚胺（NEM）抑制，从而阻止DPP分解。结论：提示NCPs中可能存在钙离子依赖性蛋白水解酶体系。     

维甲酸对小鼠牙胚冠部形态发生的影响

目的探讨维甲酸对早期牙胚形态发生的影响。方法利用体外鼠磨牙牙胚器官培养模型，观察不同剂量维甲酸对１４天胎龄的小鼠下颌第一磨牙牙胚形态发育的影响。结果培养６天后，在不含维甲酸的培养基中牙胚形成明显的牙乳头尖；当培养基中维甲酸的浓度为１×１０－７ｍｏｌ／Ｌ时，牙胚冠部仍形成明显的牙乳头尖；当培养基中维甲酸的浓度为１×１０－６ｍｏｌ／Ｌ时，牙胚冠部无牙乳头尖形成。结论牙胚冠部形态发生与维甲酸剂量有密切关系，过量的维甲酸可抑制牙胚冠部牙乳头尖的形成。     

五倍子对致龋菌抑制作用的实验研究

目的：观察五倍子对致龋菌抑制作用并测定最小抑菌浓度、最小杀菌浓度。方法：对五倍子分别采用水、乙醇两种方法提取有效成分，通过纸片扩散法研究对致龋菌的抑制作用，用液体稀释方法检测最小抑菌浓度、最小杀菌浓度。结果：五倍子水提取物对变形链球菌Ingbritt株、茸毛链球菌6715株、粘性放线菌ATCC 19246株的抑菌圈分别为20．41mm、10．46mm、6．74mm；对变形链球菌Ingbritt株最小抑菌浓度为15．6g／L；最小杀菌浓度为15．6g／L；五倍子醇提取物对变形链球菌Ingbritt株、茸毛链球菌6715株、粘性放线菌ATCC 1 9246株的抑菌圈分别为20．71mm、14．87mm、6．57mm；对变形链球菌Ingbritt株、茸毛链球菌6715株最小抑菌浓度为1．95g／L、3．9s／L；最小杀菌浓度为3．9g／L、3．9g／L。结论：五倍子水、醇提取物对变形链球菌Ingbritt株、茸毛链球菌6715株有较强的抑菌或杀菌作用．对粘性放线菌ATCC 19246株没有抑菌作用     

体外人牙髓细胞的矿化特性

为探讨体外人牙髓细胞的生物学特性，采用体外细胞连续培养、钙质染色、Ｘ射线能谱分析与透射电镜观察等方法，对体外人恒牙牙髓细胞的矿化特性进行了研究并与人牙龈成纤维细胞（ｈｕｍａｎｇｉｎｇｉｖａｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ，ＨＧＦｓ）进行了比较。结果表明，人牙髓细胞在体外可以复层生长并形成细胞结节，ＨＧＦｓ则无此能力，牙髓细胞的碱性磷酸酶活性亦较ＨＧＦｓ者高；细胞结节钙质染色呈阳性，结节内钙磷含量明显增高；人牙髓细胞有许多与成牙本质细胞相似的超微结构特征，胞间基质中可见致密晶状小体。结果提示，体外连续培养的人牙髓细胞有向成牙本质细胞分化的可能，这可为研究人牙髓细胞的分化和矿化提供有价值的思路。     

特异性鸡蛋黄抗体（IgY）对变形链球菌生长粘附的影响

目的：研究特异性鸡蛋黄黄抗体IgY在体外对变形链球菌生长及蔗糖依赖性粘附的影响。方法：在培养变形链球菌的培养基中加入不同浓度的IgY，厌氧培养18h后，涂片，显微镜下观察细菌生长形态，用分光光度计测定细菌生长状况。含蔗糖培养基中加入不同浓度的IgY，厌氧培养变形链球菌，观察变链菌对试管壁的粘附作用，定量计算细菌粘附比例。结果：加入IgY抗体后，变形链球菌的繁殖数量并不发生改变，但在生长过程中出现凝集现象，且随着IgY浓度的增加凝集程度增加，菌链增长，对试管壁的粘附性下降。结论：IgY不影响细菌的繁殖分裂，但可使细菌发生凝集，蔗糖依赖性粘附力下降。     

高效液相色谱──电化学检测法测定大鼠牙髓中5─羟色胺

用高效液相色谱（ＨＰＬＣ）—电化学检测法对大鼠牙髓中的５—羟色胺（５—ＨＴ）进行了测定。实验采用简单的预处理方法，平均回收率达９８％以上，精密度较高，５—ＨＴ在０．１２５～２ｎｇ范围内与峰高呈线性关系，相关系数为０．９９８７。正常大鼠牙髓，炎症３ｈ及炎症２４ｈ牙髓中的５—ＨＴ含量分别为４１．８８ｐｇ／ｍｇ、９３．６４ｐｇ／ｍｇ和３２．７５ｐｇ／ｍｇ左右，提示５—ＨＴ在大鼠牙髓炎早期有一定作用。     

可吸收性甲硝哒唑药膜的研究

利用可溶性羟丙基甲基纤维素(HPMC)研制出一种可吸收性甲硝哒唑(MTZ)药膜,观察其抑菌作用及临床疗效。结果表明:离体条件下24小时内HPMC缓慢溶解,MTZ几乎完全释放,活体牙周龈沟液中24小时后MTZ的量仍维持40μg/ml的水平(远高于牙周病相关菌的最低抑菌浓度),HPMC逐渐溶解消失。     

根管充填质量对根管治疗术远期疗效的影响

目的：从X线影像角度分析根管充填质量对根管治疗远期疗效的影响。方法：选择已行根管治疗2a或2a以上的牙，运用平行投照法对根管治疗牙进行摄片；询问、查阅病史，了解患者年龄、性别、牙病病因及治疗时间；检查目前该牙根尖周状况；用SPSS13．0软件进行χ^2检验。结果：共调查病例215例，根管治疗牙376颗．成功率为54．79％。若以根管计算，共有513个根管，成功率为61．4％。根管充填质量（根充位置和密合度）对根管治疗疗效有显著的影响（P〈0．01），根充距离X线片根尖0．5．2mm时最理想；根充密合者成功率高，尤其是根尖部。性别、年龄和根管充填时间对根管治疗疗效无影响。结论：根管充填质量对根管治疗远期疗效有显著影响。