米诺环素对体外培养的人牙周韧带细胞生物活性的影响

目的 研究米诺环素对体外培养的人牙周韧带细胞(HPDLCs)增殖及生物合成的影响。方法 将不同浓度的米诺环素(1、5、20、100、500、2500 mg/L)加入体外培养的HPDLCs,共孵育2d后,在倒置显微镜下观察其对细胞形态的影响,并分别检测其对细胞的增殖活性、蛋白合成及DNA合成的影响。结果 在5-100mg/L的浓度范围内,米诺环素可显著促进HPDLCs的增殖及生物合成(P<0.01)。但高浓度(2500 mg/L)的米诺环素则严重抑制细胞的生物学活性。结论 一定浓度的米诺环素能提高HPDLCs的生物学活性,但过高浓度的米诺环素具有细胞毒性,不利于牙周组织的修复和再生。     

人牙龈和牙周韧带成纤维细胞体外矿化能力的比较研究

目的：研究人牙龈和牙周韧带成纤维细胞体外矿化能力的差异。方法：用组织块法培养同一患者的牙龈和牙周韧带成纤维细胞，取第4-8代细胞用矿化培养液长期培养，倒置显微镜下观察矿化情况，von Kos-sa染色显示钙盐沉积，生化法测定各组碱性磷酸酶活性，扫描电镜及X线能谱法分析矿化结节中钙磷比例。结果：倒置显微镜下观察牙周韧带成纤维细胞可呈复层生长，形成肉眼可见的白色结节，von Kossa染色显示结节内有钙盐沉积，碱性磷酸酶活性测定表明随着矿化培养时间的延长牙周韧带成纤维细胞组ALP活性比牙龈成纤维细胞组增高明显，扫描电镜下表明结节处电子反射增强，X射线能谱分析显示钙化结节内的钙磷比例与矿化组织相似；牙龈成纤维细胞及对照组体外不能形成钙化结节。结论：人牙龈和牙周韧带成纤维细胞体外矿化能力不同。     

不同培养条件下牙周韧带细胞矿化能力的比较研究

目的：探讨牙周韧带细胞体外常规状态及矿化诱导下钙化特性的差异。方法：用组织块培养法进行人牙周韧带细胞的原代培养，取第4代细胞用于实验，在体外长期培养，条件培养组加入矿化诱导液，常规培养组不加任何矿化诱导因素，倒置显微镜下观察矿化情况，茜素红与Von-Kossa染色显示钙盐沉积。结果：牙周韧带细胞在体外长期培养过程中，两组均表现为融合期、复层期、结节期、矿化期，形成肉眼可见的白色结节，茜素红与Von-Kossa染色均显示结节内有钙盐沉积。但常规培养组矿化所需的时间要比条件培养组长1周左右。结论：牙周韧带细胞在体外长期培养过程中，无论有无矿化诱导因素存在，均具有向矿化组织形成细胞分化的趋势，但矿化诱导因素的存在可以促进矿化结节的早期形成。     

牙周韧带细胞体外矿化的研究——骨唾蛋白与骨桥素在矿化过程中的表达

目的：研究骨唾蛋白与骨桥素在体外培养的人牙周韧带细胞矿化过程中的表达。方法：体外培养的人牙周韧带细胞，经地塞米松矿化液诱导，分别于不同时间在相差显微镜下观察其矿化结节的形成，采用免疫细胞化学的方法观察骨唾蛋白与骨桥素的表达情况。结果：矿化培养1周细胞呈复层生长，骨桥素呈阳性染色；两周细胞密集呈结节状，骨唾蛋白与骨桥素均为阳性，胞浆染成黄褐色；3周出现矿化结节，矿化以后骨唾蛋白与骨桥素保持稳定表达。结论：牙周韧带细胞在适当的条件下可以向成骨细胞表型分化，表达矿化相关蛋白，形成矿化结节。     

米诺环素对体外培养的成年大鼠牙槽骨成骨细胞生物活性的影响

目的:研究不同浓度的米诺环素对体外培养的成年大鼠牙槽骨成骨细胞(mature rat alveolarosteoblast,MRAOBs)增殖、蛋白合成及碱性磷酸酶活性(alkaline phosphatase,ALP)的影响。方法:将不同浓度的米诺环素(1、5、10、20、40、100、200mg/L)加入体外培养的第4代MRAOBs中,孵育2d和4d后,倒置显微镜下观察其对细胞形态的影响,并于2d后检测其对细胞的增殖活性及蛋白合成的影响,4d后检测其对细胞的碱性磷酸酶活性的影响。结果:在1-200mg/L的浓度范围内,米诺环素对细胞形态无影响,可显著促进MRAOB的增殖和蛋白合成(P<0.01),1-100mg/L浓度范围内随着浓度的增加,促进细胞增殖和蛋白合成的作用显著增强,至100mg/L时达最大促进效应。1-200mg/L的米诺环素能显著抑制MRAOBs的ALP活性,随浓度的增加抑制作用逐渐增强。结论:一定浓度的米诺环素有促进成骨细胞的增殖、蛋白合成和抑制成骨细胞分化的作用。     

富血小板血浆对犬骨髓间充质细胞矿化能力的影响

目的研究富血小板血浆(platelet-rich plasma,PRP)对犬骨髓间充质细胞(marrow stromal cells,MSCs)碱性磷酸酶(alka-line phosphatase,ALP)及矿化结节形成能力的影响。方法将不同浓度(10%、20%、30%)的PRP及重组人骨形成蛋白(rhBMP-2)加入体外培养的第3代MSCs中,对照组为无血清培养液,检测其对细胞ALP活性的影响;将第3代的MSCs在体外进行培养,实验组加入矿化液和PRP(10%或30%),对照组只加矿化液。4周后用茜素红及Von-Kossa染色检测矿化结节的形成。结果10%PRP和rhBMP-2能显著提高MSCs的ALP活性,其中10%PRP对体外矿化结节的形成,亦有一定程度的促进作用。结论PRP有促进MSCs向成骨细胞方向转化的趋势。     

苯妥英钠对人牙周膜成纤维细胞生物学活性影响的实验研究

目的研究苯妥英钠（PHT）对体外培养的人牙周膜成纤维细胞（hPDLF）生物学功能的影响，并探讨其用于促进牙周组织再生的可能性。方法将不同质量浓度的PHT（1、5、20、100、500、2 500 mg/L）加入体外培养的第4代hPDLF，检测其对细胞增殖活性、蛋白合成、碱性磷酸酶（ALP）活性的影响；Von Kossa染色法检测PHT（20、100、500 mg/L）对第4代hPDLF矿化结节形成能力的影响；应用ELISA法测定PHT（20、100 mg/L）对第3代hPDLF中骨形态发生蛋白- 2（BMP- 2）表达的影响。结果在20、100 mg/L的质量浓度时，PHT可显著促进hPDLF的增殖及分化（P<0.01）；在质量浓度100 mg/L时，PHT可增强hPDLF的蛋白合成（P<0.05）；同时，PHT在质量浓度100 mg/L可显著促进hPDLF的矿化能力及BMP- 2的表达（P<0.01）。但高质量浓度（2 500 mg/L）的PHT则严重抑制细胞的生物学活性。结论适当质量浓度的PHT对hPDLF的增殖和分化有促进作用，但过高质量浓度的PHT具有细胞毒性，不利于牙周组织的修复和再生。     

牙周韧带细胞体外矿化的研究——骨唾蛋白与骨桥素在矿化过程中的表达

目的 :研究骨唾蛋白与骨桥素在体外培养的人牙周韧带细胞矿化过程中的表达。方法 :体外培养的人牙周韧带细胞 ,经地塞米松矿化液诱导 ,分别于不同的时间在相差显微镜下观察其矿化结节的形成 ,采用免疫细胞化学的方法观察骨唾蛋白与骨桥素的表达情况。结果 :矿化培养 1周细胞呈复层生长 ,骨桥素呈阳性染色 ;两周细胞密集呈结节状 ,骨唾蛋白与骨桥素均为阳性 ,胞浆染成黄褐色 ;3周出现矿化结节 ,矿化以后骨唾蛋白与骨桥素保持稳定表达。结论 :牙周韧带细胞在适当的条件下可以向成骨细胞表型分化 ,表达矿化相关蛋白 ,形成矿化结节。     

牙周组织病

bFGF和rhBMP对牙周膜细胞胶原酶水平的影响，龈上牙结石附着面和游离面晶体构型的扫描电镜观察，米诺环素对人牙周韧带绷胞矿化能力的影响，米诺环素软膏局部治疗慢性牙周炎的峰床疗效[编者按]     

矿化液促进犬牙周膜细胞异位成骨实验

目的：探讨矿化液对犬牙周膜细胞（PDLCs）体外诱导分化、体内成骨作用的影响。方法：酶消化法原代培养成年犬前磨牙PDLCs并鉴定。再以含地塞米松、β甘油磷酸钠和抗坏血酸的矿化液连续诱导PDLCs，观察细胞形态变化，检测骨涎蛋白（BSP）表达碱性磷酸酶（ALP）活性。将诱导14d的细胞接种于钠米羟基磷灰石-胶原-聚乳酸复合支架（nHAC／PLA）上，体外培养5d后植入犬自体皮下，8W取材HE、三色法染色评价骨形成情况。以未诱导细胞为对照。结果：PDLCs波形丝蛋白（VIM）表达阳性，角蛋白（CK）阴性。矿化诱导后强阳性表达BSP，ALP活性也显著升高，提示细胞向成骨样细胞分化。体内移植8W，组织学见对照组主要形成纤维样组织而诱导组形成大量骨样组织。结论：矿化液具有促进PDLCs体外向成骨细胞分化和体内成骨作用。     

The biological effects of transforming growth factor-beta on human periodontal ligament fibroblasts]

OBJECTIVE: To evaluate the biological effects of transforming growth factor-beta (TGF-beta) on human periodontal ligament fibroblasts (HPDLFs). METHODS: HPDLFs were primary cultured and examined for the effects of TGF-beta on its proliferation, alkaline phosphatase (ALP) activity, osteocalcin (OC) synthesis and formation of the mineralized nodules. RESULTS: TGF-beta(0.0050-0.1000 mg/L) significantly stimulated the proliferation of HPDLFs. The ALP activity of HPDLFs was elevated evidently by 0.0050 mg/L TGF-beta. TGF-beta (0.0005-0.1000 mg/L) had no effects on OC synthesis and formation of the mineralized nodules of HPDLFs. CONCLUSIONS: The effects of TGF-beta on HPDLFs are dose-dependent. TGF-beta can stimulate HPDLFs to express some of osteoblastic phenotype, and it lacks the abilility to promote maturation of the osteogenic phenotype.     

p38信号通路在牙周膜细胞成骨分化中的调控作用

目的 研究p38信号通路在人牙周膜细胞成骨分化中的调控作用。 方法 体外培养人牙周膜细胞,取第三代细胞进行成骨诱导培养,实验组加入p38信号通路抑制剂(SB203580),诱导培养4周后通过定量PCR和茜素红染色检测其成骨能力。 结果 成骨诱导可促进牙周膜细胞中p38的磷酸化（p-p38）。抑制p38的磷酸化可降低成骨标记物Runx相关基因（Runx2）、碱性磷酸酶（ALP）、骨桥蛋白（OPN）和骨钙素（OCN）的表达,减少钙结节形成。 结论 p38信号通路在体外培养的牙周膜细胞成骨分化中具有重要的调控作用。     

转化生长因子β对人牙周膜成纤维细胞的生物学作用

目的 研究转化生长因子β（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ－β,ＴＧＦ－β）对人牙周膜成纤维细胞（ｈｕｍａｎ ｐｅｒｉｏｄｏｎｔａｌ ｌｉｇａｍｅｎｔ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ,ＨＰＤＬＦｓ）的生物学作用。方法 原代培养ＨＰＤＬＦｓ,并观察ＴＧＦ－β对ＨＰＤＬＦｓ的增殖、碱性磷酸酶（ａｌｋａｌｉｎｅ ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ,ＡＬＰ）活性、骨钙素（ｏｓｔｅｏｃａｌｃｉｎ,ＯＣ）合成及矿化结节形成的作用。结果 ０．００５０～０．１０００ｍｇ／ＬＴＧＦ－β可明显刺激ＨＰＤＬＦｓ的增殖,０．００５０ｍｇ／ＬＴＧＦ－β可显著提高ＨＰＤＬＦｓ的ＡＬＰ活性,０．０００５～０．１０００ｍｇ／ＬＴＧＦ－β对ＨＰＤＬＦｓ合成ＯＣ和矿化结节的形成无明显影响。结论 ＴＧＦ－β对ＨＰＤＬＦｓ的作用呈剂量依赖性。ＴＧＦ－     

维甲酸诱导牙周韧带细胞分化的研究

目的研究并比较维甲酸对牙周韧带细胞和牙龈成纤维细胞向成骨样细胞分化潜能的影响。方法体外培养牙周韧带细胞与牙龈成纤维细胞,通过生化法、原位杂交及RT- PCR分别检测维甲酸作用前后碱性磷酸酶（ALP）活性的变化及其mRNA的表达情况。结果正常牙周韧带细胞与牙龈成纤维细胞的ALP活性有明显差别,前者高于后者;原位杂交及RT- PCR均检测到牙周韧带细胞有mRNA表达而牙龈成纤维细胞无表达。维甲酸作用后牙周韧带细胞ALP活性明显升高,mRNA表达信号相应增强,且在5×10- 6 mol/L组效果最明显;牙龈成纤维细胞ALP活性亦有升高,在mRNA水平仅RT- PCR检测到5×10- 6 mol/L组有较弱的表达,其他组及原位杂交均未见表达。结论牙周韧带细胞和牙龈成纤维细胞在向成骨方向的分化潜能上存在差异。     

姜黄素通过调控Wnt通路改善牙周膜干细胞成骨分化能力

目的:探讨姜黄素对人牙周膜干细胞(PDLSCs)成骨分化的影响。方法:取第4~6代的PDLCs进行实验,用CCK-8实验检测姜黄素对PDLCs增殖活性影响,通过检测碱性磷酸酶(ALP)活性、矿化结节染色以及ALP、OCN和Runx2等成骨相关基因的表达水平来探讨姜黄素对牙周膜干细胞成骨分化能力的影响,同时检测姜黄素对经典Wnt通路及其配体的影响。结果:姜黄素对PDLSCs的增殖能力无影响。与对照组相比较,姜黄素能增加PDLSCs的ALP活性、上调ALP、OCN和Runx2等成骨相关基因的表达、增加矿化结节数量(P<0.05)。姜黄素能阻断Wnt信号通路,但加入Wnt信号通路激动剂(氯化锂)后,PDLSCs的成骨分化能力显著下降。结论:姜黄素能通过抑制Wnt信号通路,增强牙周膜干细胞成骨分化能力。     

Estradiol enhances the production of mineralized nodules by human periodontal ligament cells

A primary objective in the treatment of periodontal disease is the regeneration of the mineralized and soft connective tissue. PDL cells produce mineralized nodules in vitro which is one of the important functions of PDL cells for regenerative therapy. The purpose of this study was to investigate the effects of estradiol on mineralized nodule formation by human PDL cells. PDL cells were obtained from healthy donors and maintained in DMEM with 10% fetal bovine serum. Serum-free medium was used when the effects of estradiol were tested. ALP activity in the supernatant of cells disrupted by sonication was analyzed spectrophotometrically. The formation of mineralized nodules was assessed by staining the PDL cells with alizarine red and counting the number of nodules. at Estradiol 20 ng/ml significantly enhanced the ALP activity and mineralized nodule formation compared to the control. These results suggested that estrogen status may modify the regenerative activity of periodontal tissue.     

重组人骨形成蛋白2对人牙周膜成纤维细胞的生物学作用

目的:研究重组人骨形成蛋白2 (rhBMP2) 对人牙周膜成纤维细胞(HPDLFs) 的生物学作用。方法:原代培养HPDLFs ,并观察rhBMP2 对HPDLFs 增殖、碱性磷酸酶(ALP) 活性、骨钙素(OC) 合成及矿化结节形成的作用。结果:0125～2 mgPml rhBMP2 对HPDLFs 的增殖无明显作用,015～2 mgPml rhBMP2 显著提高HPDLFs 的ALP 活性,刺激OC合成和矿化结节形成。结论:rhBMP2 对HPDLFs 的作用具有剂量依赖性。rhBMP2 能够刺激HPDLFs 表达成骨细胞表型并促进其表型成熟。