二氮嗪介导的延迟预处理对未成熟心肌的保护机制研究

目的研究二氮嗪（DZX）介导的延迟预处理对缺血缺氧环境中未成熟心肌的保护作用机制。方法分离培养新生鼠心肌细胞随机分为：①缺氧组；②DZX组：细胞缺氧培养前24h放入含100μmol／L的DZX的培养液15min；③DZX＋PDTC组：细胞缺氧培养前24h放入含100μmol／LDZX和500μmol／L二硫代氨基甲酸吡咯烷（PDTC）的培养液15min；④对照组。前3组细胞在缺氧模型中培养16h，对照组一直有氧培养。采用Hoechst染色、Annexin V／PI流式检测凋亡细胞，Western Blot检测心肌细胞Bax和Bcl-2的表达。结果①流式检测示DZX组较缺氧组细胞凋亡明显降低（P〈0．01），Hoechst染色心肌凋亡细胞也减少；②与DZX组比较，加入PDTC后，流式检测显示细胞凋亡显著增多（P〈0．01），Hoechst染色心肌细胞凋亡增多，Westem blot检测显示Bcl-2表达减少，Bax表达增加。结论线粒体钾通道开放剂二氮嗪介导的延迟预处理对心肌有明显的保护作用；位于下游的NF-κB通过调控促凋亡蛋白Bax和抗凋亡蛋白Bcl-2的的表达在未成熟心肌的延迟预处理中起着关键作用。     

超声心动图评估直接心肌注射骨髓间充质干细胞对心肌梗死的治疗效果

由于心肌细胞属不可再生细胞，梗死心肌局部只能通过纤维瘢痕组织取代，这种心肌重构是造成患者心力衰竭及死亡的主要原因之一。近年来国内外实验及初期临床研究证明将骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSC）植入梗死心肌后，MSC可在病变区分化增殖成血管内皮细胞及有功能的心肌细胞，有效改善了梗死周边的血供及瘢痕形成所致的心室重构，     

益气活血方对气虚血瘀型心衰大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的观察自拟益气活血方对慢性气虚血瘀型心力衰竭大鼠心肌凋亡及其心室重塑的影响。方法将60只SD大鼠随机分为4组,即空白对照组、模型组、依那普利组、益气活血方组,每组15只。前两组给予等量的生理盐水灌胃,每日1次,后两组分别给予上述相应的药物治疗。各组大鼠分笼饲养,自由饮食。经过一系列措施在实验结束后观察对比4组血清AngⅡ、TNF-α、IL-6表达水平以及阳性反应面积率的差异。结果与模型组相比,益气活血方组、依那普利组均可有效降低大鼠血清AngⅡ、TNF-α、IL-6的水平(P0.05),且益气活血方组与依那普利组的AngⅡ、TNF-α、IL-6的水平无明显差异;与模型组相比,依那普利组、益气活血方组细胞凋亡的阳性反应面积率均降低(P0.01);益气活血方组细胞凋亡的阳性反应面积低于依那普利组(P0.05)。结论益气活血方对气虚血瘀型心衰大鼠的心功能有改善作用,其作用机制可能于抑制AngⅡ、TNF-α、IL-6达水平有一定的相关性。     

通心降脂滴丸在缺氧损伤中的保护作用研究

目的 观察通心降脂滴丸对小鼠及小鼠心肌细胞缺氧损伤的保护作用,为其临床试验及临床应用提供药效学依据。方法 体内实验采用昆明种小白鼠60只,随机分为5组,每组12只,分为模型组、阳性对照组、通心降脂滴丸低、中、高剂量组,观察小鼠在缺氧状态下的平均存活时间;体外实验将小鼠心肌细胞随机分为空白对照组、缺氧模型组、阳性对照组、通心降脂滴丸低、中和高剂量组,建立缺氧损伤模型,各组取培养液上清液测定乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶（CK）、超氧化物歧化酶（SOD）的活力以及丙二醛（MDA）的含量。结果 体内实验中,与模型组比较,通心降脂滴丸中、高剂量组可明显延长小鼠在缺氧状态下的存活时间（P<0.05）。体外实验中与空白对照组比较,缺氧模型组LDH、CK的活力升高,SOD的活力下降,MDA含量升高,具有显著性差异（P<0.05）;与缺氧模型组比较,通心降脂滴丸3个剂量组的LDH活力降低,SOD活力升高,MDA含量减少,中、高剂量组CK的活性降低,均有显著性差异（P<0.05）。结论 通心降脂滴丸可提高小鼠的耐缺氧能力并对缺氧损伤的心肌细胞具有一定的保护作用。     

基于β2AR2/βarrestin2/NFκB通路的地佐辛对心肌缺血再灌注损伤大鼠的作用及机制

目的 探讨地佐辛对心肌缺血再灌注损伤大鼠β2肾上腺素受体(β2AR)/β抑制蛋白2(β-arrestin2)/核转录因子-κB(NF-κB)通路及心肌凋亡的影响。方法 60只大鼠随机分为假手术组（Sham组）,心肌缺血再灌注模型组（MIRI组）,地佐辛高、中、低剂量组（20、10、5 mg/kg）,每组12只。地佐辛各剂量组在造模前30 min经股静脉注射相应剂量的地佐辛,Sham组和MIRI组给予等量生理盐水,采用手术结扎大鼠冠状动脉左前降支的方法复制大鼠MIRI模型。再灌注2 h后,检测各组大鼠心率（HR）、左心室收缩压（LVSP）、左心室舒张末（LVEDP）,评价心脏功能;并检测血清中肌酸激酶（CK）、肌酸激酶同工酶MB（CKMB）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）水平;HE染色观察左心室组织学变化;TUNEL染色观察心肌细胞凋亡情况,计算凋亡指数;免疫组织化学法检测心肌组织Bcl-2、Bax、Caspase-3的蛋白表达;Western blot检测心肌组织β2AR、β-arrestin2、IκBα、NF-κB p65蛋白表达。结果 心肌组织病理学可见,Sham组心肌纤维完整、排列整齐,MIRI组心肌严重受损,局部肌纤维横纹消失,大量炎性细胞浸润;与Sham组相比,各治疗组明显好转。与Sham组相比,MIRI组大鼠HR、LVSP、Bcl-2/Bax比值、心肌组织β2AR、β-arrestin2、IκBα蛋白表达显著降低,各治疗组较MIRI组明显升高（均P＜0.05）;与Sham组相比,MIRI组LVEDP、血清CK、CK-MB、TNF-α、IL-6水平、心肌组织Bcl-2、Bax、Caspase-3、NF-κB p65蛋白表达、心肌细胞凋亡率显著升高,各治疗组较MIRI组明显降低（均P＜0.05）。结论 地佐辛可抑制炎症反应,减少心肌细胞凋亡,对MIRI大鼠具有保护作用;其作用机制可能与上调β2AR、β-arrestin2、IκBα的表达,降低NF-κB p65表达有关。     

NLRP3炎性小体在脂多糖诱导的高糖心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用及机制

目的 探究NLRP3炎性小体在脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导的心肌细胞高糖缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation, H/R)损伤中的作用及机制。方法 取正常对数期生长的H9C2心肌细胞,随机分为4组,即高糖(H)组(n=3)、高糖+缺氧/复氧(H+H/R)组(n=3)、高糖+LPS+H/R(H+LPS+H/R)组(n=3)和BAY11-7082干预高糖+LPS+H/R(H+LPS+BAY+H/R)组(n=3)。采用CCK-8法检测细胞活力,ROS检测试剂盒测定线粒体氧化应激水平,RT-PCR检测细胞NLRP3、ASC、caspase-1和IL-1β的mRNA表达水平,Western blot法检测细胞NLRP3、ASC、caspase-1和IL-1β的蛋白表达水平。结果 与高糖组比较,H+H/R组细胞活性降低、LDH水平升高、线粒体ROS产生增加,NLRP3、ASC、caspase-1和IL-1β的mRNA表达上调,NF-κB、NLRP3、ASC、caspase-1和IL-1β蛋白水平增高(P<0.05);LPS处理后,H/R的高糖心肌细胞损伤进一步加重(P<0.05),而加用BAY11-7082后,LPS加重的损伤得以改善(P<0.05)。结论 BAY11-7082可以抑制NLRP3炎性小体激活,从而减轻LPS介导的H9C2细胞高糖H/R损伤。     

PI3K在舒尼替尼致hiPSC-CMs收缩功能障碍中的作用

目的 研究磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)在舒尼替尼致心肌收缩功能障碍中的作用。方法 以人源诱导型多能干细胞来源的心肌细胞(hiPSC-CMs)为研究对象,以不同浓度[0(对照)、0.5、1、3、5、10μmol/L]舒尼替尼干预hiPSC-CMs 24 h后,采用CardioExcyte 96系统检测细胞收缩力,并计算半数抑制浓度(IC₅₀);检测舒尼替尼(3.14μmol/L)对细胞收缩频率、钙瞬变幅度、钙瞬变恢复时程以及心房钠尿肽(ANP)、脑钠肽(BNP)、β-肌凝蛋白重链(β-MHC) mRNA表达水平的影响;以PI3K的激活剂3,4,5-三磷酸磷脂酰肌醇(PIP3,1μmol/L)和舒尼替尼共同干预hiPSC-CMs,考察PI3K在舒尼替尼致心肌收缩功能障碍中的作用。结果 舒尼替尼对hiPSC-CMs收缩力的抑制作用有浓度依赖趋势,IC₅₀值为3.14μmol/L。以3.14μmol/L舒尼替尼干预后,hiPSC-CMs的收缩频率和钙瞬变幅度均显著降低(P<0.05或P<0.01),钙瞬变恢复时程显著延长(P<0...     

香椿子总多酚对心肌缺血/再灌注损伤大鼠细胞凋亡的影响

目的:探讨香椿子总多酚(TSTP)对心肌缺血再灌注损伤(MIRI)大鼠细胞凋亡信号通路的影响。方法:采用左冠脉球囊垫扎术,缺血45 min再灌注6 h制备大鼠MIRI模型,随机分为模型组、TSTP高剂量组(100 mg·kg^-1)、TSTP低剂量组(50 mg·kg^-1)、假手术组,于造模术前7 d开始灌胃给药;采用染色法评估心肌梗死情况,FCM法检测细胞凋亡率,ELISA法检测胞浆线粒体细胞色素C(Cyt C)含量,荧光底物法检测心肌半胱氨酸蛋白酶caspase-3、caspase-8、caspase-9、caspase-12活性,RT-qPCR法测定心肌凋亡死亡受体通路指标(Fas和Fas-L)、线粒体通路指标(Bax和Bcl-2)、内质网应激通路指标(GRP78和CHOP)的基因表达。结果:TSTP高、低剂量组明显缩小心肌梗死区面积,与模型组比较差异有统计学意义;与模型组相比,TSTP高、低剂量组可显著降低心肌细胞凋亡率,可显著减少胞浆Cyt C释放量,明显降低胞浆caspase-3、caspase-9和caspase-12活性,可明显...     

恩格列净及达格列净对棕榈酸诱导的心肌细胞损伤的保护作用及其机制

目的 探讨钠-葡萄糖共转运蛋白-2抑制剂恩格列净（empagliflozin,EMPA）及达格列净（dapagliflozin,DAPA）对棕榈酸（palmitic acid,PA）诱导H9c2心肌细胞损伤的保护作用及其可能机制。方法 采用PA诱导H9c2心肌细胞损伤,CCK-8法筛选PA、EMPA及DAPA的最佳给药浓度;Western blotting检测TLR4、p-AKT、p-mTOR、Nrf2和HO-1的蛋白表达水平;ELISA法检测IL-1β、IL-6和TNF-α的含量;荧光显微镜和流式细胞术检测PA诱导H9c2心肌细胞中ROS水平。结果 PA 100 μmol·L^–1刺激24 h可诱导H9c2心肌细胞存活率明显下降（P<0.01）,IL-1β、IL-6、TNF-α、TLR4蛋白表达、p-mTOR蛋白表达及ROS水平明显增加（P<0.01）,p-AKT、Nrf2和HO-1蛋白表达显著降低（P<0.01）;与模型组比较,经EMPA及DAPA处理后,细胞存活率明显增加（P<0.01）,IL-1β、IL-6、TNF-α、TLR4蛋白表达、p-mTOR蛋白表达及ROS水平明显降低（P<0.05或P<0.01）,p-AKT、Nrf2和HO-1蛋白表达显著上调（P<0.05或P<0.01）。结论 EMPA及DAPA对PA诱导的心肌细胞损伤均具有保护作用,其机制可能与下调TLR4、p-mTOR蛋白表达,增强AKT蛋白磷酸化,激活Nrf2/HO-1通路,抑制ROS的生成有关。     

芒果苷减轻低氧致原代大鼠心肌细胞的凋亡

目的观察芒果苷对低氧诱导的原代大鼠心肌细胞凋亡的影响。方法无菌分离、培养原代大鼠心肌细胞,对心肌细胞予以2、4、8和12 h的低氧处理,根据心肌细胞凋亡结局确定低氧诱导的原代大鼠心肌细胞凋亡模型的低氧处理时间。将心肌细胞分为正常组、低氧组和芒果苷干预组,每组平行做3批次实验,每批次实验平行做3个复孔。实验结束后,流式细胞仪检测心肌细胞凋亡率;分光光度法检测心肌细胞裂解液中凋亡蛋白酶caspase-3和caspase-9的活性;Western blot检测促凋亡蛋白Bax和抗凋亡蛋白Bcl-2的蛋白表达水平。结果低氧处理12 h后,低氧组较对照组心肌细胞凋亡率显著上升(P<0.05);凋亡蛋白酶caspase-3和caspase-9的活性均显著上升(P<0.05);促凋亡蛋白酶Bax的蛋白表达量显著上升(P<0.05),抑凋亡蛋白酶Bcl-2的蛋白表达量显著下降(P<0.05)。经150μmol/L芒果苷干预后能显著缓解低氧组的各项变化。结论芒果苷能显著减轻低氧诱导的原代大鼠心肌细胞凋亡。