蛋白酶体抑制剂MG132诱导人血管平滑肌细胞凋亡及其机制研究

目的：观察蛋白酶体抑制剂MG132对人脐静脉血管平滑肌细胞（vascular smooth musele cells,VSMC）的致凋亡作用及其对凋亡相关的天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白酶3（caspase 3）表达的影响。方法：采用多个浓度（2．5、5、10μmol／L）的蛋白酶体抑制剂MG132处理人脐静脉VSMC 24h和48h;流式细胞术分析细胞凋亡率;RT-PCR检测泛素-蛋白酶体途径（ubiquitin-proteasome pathway,UPP）相关基因泛素、泛素活化酶（E1）、泛素缀合酶（E2）、泛素连接酶（E3）、26S蛋白酶体和caspase 3基因转录水平;免疫细胞化学检测细胞caspase 3蛋白表达。结果：蛋白酶体抑制剂MG132处理48h后细胞凋亡率增加：细胞内UPP相关的基因rnRNA表达降低,而caspase 3 mRNA表达增高;免疫细胞化学检测细胞caspase 3蛋白表达水平升高。结论：蛋白酶体抑制剂MG132能够诱导人脐静脉VSMC凋亡,其作用呈量-效关系;MG132诱导vSMC凋亡与下调UPP相关基因和上调caspase 3基因及蛋白的表达有关。     

蛋白酶体抑制剂MG132诱导人巨噬细胞THP-1凋亡

泛素-蛋白酶体途径是生物体内进行蛋白质选择性降解的重要途径之一，广泛参与细胞周期调控、DNA修复、细胞信号转导、细胞凋亡等多种生理过程。为了研究调控泛素一蛋白酶体途径表达对巨噬细胞THP-1凋亡和细胞内载脂蛋白B的蓄积的影响，本实验采用蛋白酶体抑制剂MG132(5／μmol／L)处理THP-1细胞，流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞内载脂蛋白B含量，用半定量逆转录一聚合酶链反应检测细胞内UPP途径相关基因的表达。结果发现：MG132可以诱导THP-1细胞凋亡；实验组细胞内载脂蛋白B蓄积增加；实验组细胞内泛素活化酶、泛素缀合酶和泛素-蛋白连接酶mRNA表达均降低，而26S蛋白酶体mRNA无显著改变。结果提示，蛋白酶体抑制荆MG132能够诱导THP-1细胞凋亡，其机制可能与MG132抑制泛素-蛋白酶体途径中泛素活化酶、泛素缀合酶和泛素一蛋白连接酶活性，使细胞内载脂蛋白B经泛素-蛋白酶体途径降解减少，在细胞内蓄积而使细胞凋亡率增加。     

MG132对兔颈总动脉球囊损伤后狭窄部位泛素和Caspase-3表达的影响

目的 采用球囊拉伤新西兰白兔颈总动脉,复制出血管损伤后狭窄模型;在损伤血管局部应用蛋白酶体抑制剂MG132,观察蛋白酶体抑制剂MG132对球囊损伤后血管狭窄部位泛素和Caspase-3表达的影响.方法 将新西兰白兔30只随机分成对照组、球囊损伤组和MG132组,喂养8周后取颈总动脉损伤段血管制成病理切片,采用免疫组织化学法观察泛素蛋白和Caspase-3蛋白的变化.结果 免疫组织化学法检测到球囊损伤组颈总动脉管壁泛素蛋白表达加强;而MG132组与球囊损伤组比泛素蛋白表达明显减少(P<0.01).Caspase-3蛋白表达显著增加(P<0.01).结论 局部应用蛋白酶体抑制剂MG132能抑制颈总动脉管壁泛素蛋白表达,并增强Caspase-3蛋白表达.     

蛋白酶体抑制剂MG132诱导HepG2细胞凋亡及其机制研究

目的观察蛋白酶体抑制剂MG132对人肝癌细胞HepG2的致凋亡作用,并从泛素蛋白酶体途径(UPP)相关基因E1、E2和E3及天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白酶3(Caspase3)表达初步探讨MG132的致细胞凋亡机制。方法采用多个浓度(2、5、10μmol·L-1)的蛋白酶体抑制剂MG132处理HepG2细胞;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡率,DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡;逆转录聚合酶链反应(RTPCR)检测UPP相关基因E1、E2、E3和凋亡相关基因Caspase3的转录水平;免疫细胞化学检测Caspase3蛋白表达。结果对照组HepG2细胞凋亡率低于5%,在2、5和10μmol·L-1MG132作用下,细胞凋亡率分别为42.9%、66.1%、72.8%,MG132诱导HepG2细胞凋亡具有量效关系;RTPCR检测发现细胞内UPP相关基因E1、E2、E3mRNA表达下降,而凋亡相关基因Caspase3mRNA表达上调;免疫组化检测Caspase3蛋白表达水平升高。结论蛋白酶体抑制剂MG132能够诱导HepG2细胞凋亡,其机制可能与MG132抑制UPP活性,使细胞内Caspase3蛋白降解减少,同时上调Caspase3基因转录,促进细胞凋亡。     

干扰3T3-L1脂肪细胞生长激素受体对生长激素诱导的细胞炎症因子表达和分泌的影响

目的:探讨干扰3T3-L1脂肪细胞生长激素受体(GHR)对生长激素(GH)诱导的脂肪细胞核因子κB(NF-κB)激活及炎症细胞因子mRNA表达和分泌的影响。方法:采用RNA干扰技术抑制3T3-L1脂肪细胞中GHR的表达;Western blot检测GHR的蛋白表达;双萤光素酶报告基因系统分析GHR对GH激活的3T3-L1脂肪细胞NF-κB转录活性的影响;real-time RT-PCR和ELISA技术检测GHR对GH诱导的3T3-L1脂肪细胞炎症因子mRNA表达和分泌的影响。结果:干扰3T3-L1脂肪细胞GHR的表达能够显著抑制生长激素诱导的细胞NF-κB的激活,并减少TNF-α、IL-1β和IL-6等炎症细胞因子的mRNA表达和分泌。结论:干扰3T3-L1脂肪细胞GHR可抑制GH诱导的炎症细胞因子表达和分泌。     

IHC、FISH、qRT-PCR检测NSCLC ALK融合基因的对比分析

目的对比分析免疫组化(IHC)、荧光原位杂交(FISH)、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测非小细胞肺癌(NSCLC)ALK融合基因情况。 方法收集453例NSCLC标本。随机选取IHC检测的ALK融合基因不同表达程度标本40例,采用FISH和qRT-PCR法分别检测各组ALK融合基因表达水平,并进行一致性分析。 结果IHC与FISH、qRT-PCR的ALK融合基因检测结果比较,IHC ALK(－)/(3+)与FISH、qRT-PCR检测结果一致率均为100%,具有高度一致性(r=0.781、r=0.740,P＜0.05)。FISH与qRT-PCR的检测结果一致率为97.5%,具有高度一致性(r=0.943,P＜0.05)。 结论FISH、qRT-PCR法与IHC法检测在不同表达程度ALK融合基因样本中检测结果存在差别,IHC敏感性更高。FISH、qRT-PCR法在ALK融合基因样本的检测结果具有高度一致性。     

外源性Rb基因导入对U937细胞周期和p21基因表达的影响

目的 利用RLb基因重组腺病毒载体(AdCMV-RLb)，将外源性RLb基因导入U937细胞，研究其对细胞周期、细胞凋亡及原癌基因p21表达的影响。方法 AdCMV-Rb导入U937细胞后，用流式细胞术分析细胞周期和细胞凋亡率及Rb蛋白和p21蛋白的表达；RT-PCR检测原癌基因p21的表达。结果 AdCMV-Rb可以高效导入U937细胞，RLb基因导入使U937细胞主要阻滞在G1期，细胞凋亡率在RLb基因导入24h后无明显改变，48h后凋亡率增高；Rb蛋白和p21蛋白表达增强；RT-PCR结果显示Rb基因的导入可以上调p21基因的表达。结论 外源性Rb基因的导入可以上调原癌基因p21的表达，使得U937细胞周期阻滞在G1期。     

血管壁细胞人突触相关蛋白的表达

目的　目前尚无文献报道人突触相关蛋白与脂蛋白代谢和泡沫细胞形成、凋亡的关系。本文研究氧化型低密度脂蛋白致THP 1细胞泡沫化过程中人突触相关蛋白基因的表达 ,用制备的兔抗人突触相关蛋白多克隆抗体检测其在血管细胞及肝癌细胞系HepG2细胞中的表达。方法　THP 1细胞用 16 4 0培养 ,PMA处理诱导其向巨噬细胞分化 ,实验组加氧化型低密度脂蛋白(终浓度 80mg/L) ,对照组不加氧化型低密度脂蛋白。根据人突触相关蛋白基因序列设计引物 ,以看家基因GAPDH为内对照 ,反转录—聚合酶链反应半定量检测人突触相关蛋白基因的表达。用特异的抗人突触相关蛋白的多克隆抗体 ,采用免疫组织化学或流式细胞术检测人突触相关蛋白在人内皮细胞、平滑肌细胞、THP 1细胞和肝癌细胞系HepG2细胞中的表达。结果　人突触相关蛋白基因在氧化型低密度脂蛋白致THP 1细胞泡沫化过程中表达增高 ,与抑制消减杂交结果一致。免疫组织化学或流式细胞术检测 ,人突触相关蛋白在人内皮细胞、平滑肌细胞、THP 1细胞和肝癌细胞系HepG2细胞中均有表达 ,主要定位在细胞质 ,与该基因的生物信息学分析结果一致。结论　人突触相关蛋白在多种细胞中均有表达 ,人突触相关蛋白基因在单核细胞泡沫化过程中表达增高 ,可能与单核细胞源性泡沫化细胞形成     

高浓度低密度脂蛋白对血管内皮细胞NADPH氧化酶4mRNA水平、活性氧产生及细胞凋亡的影响****★◆

目的: 低密度脂蛋白进入血管内皮细胞后可刺激细胞产生活性氧,在内皮细胞的生长与损伤过程中起关键作用。实验拟进一步观察高浓度低密度脂蛋白对人脐静脉内皮细胞活性氧、NADPH氧化酶4 mRNA 水平和凋亡的影响。 方法：实验于2004-12/2006-02在卫生部老年医学重点实验室完成。①实验材料：脐带来自卫生部北京医院产科，产妇或家属签署知情同意书；低密度脂蛋白由卫生部北京医院老年医学研究所生化室经过超速离心提取。②实验过程及分组：分离人脐静脉内皮细胞。先以不同浓度的低密度脂蛋白处理人脐静脉内皮细胞 24 h以选取最佳的浓度，观察NADPH氧化酶4表达，分为：不加低密度脂蛋白的对照组；0.8 g/L 低密度脂蛋白组；1.6 g /L 低密度脂蛋白组；2.4 g/L低密度脂蛋白组。再以1.6 g/L 低密度脂蛋白浓度处理人脐静脉内皮细胞不同的时间以选取最佳的处理时间观察NADPH氧化酶4表达，分为：不加低密度脂蛋白的对照组，12 h处理组，24 h处理组，48 h处理组。以最佳浓度和最佳时间处理人脐静脉内皮细胞，并观察其NADPH氧化酶4表达、活性氧生成和凋亡。③实验评估：反转录－聚合酶链反应检测人脐静脉内皮细胞中NADPH氧化酶的表达；流式细胞仪检测胞内活性氧生成量和细胞凋亡率，Hoechst 33342染色分析细胞凋亡。 结果：①1.6 g/L低密度脂蛋白处理24 h后人脐静脉内皮细胞内活性氧生成量高于对照组（P < 0.05）。②1.6 g/L低密度脂蛋白处理24 h组细胞凋亡也比对照组明显增加（P < .05）。③用反转录-聚合酶链反应检测不同浓度（0.8，1.6，2.4 g/L）低密度脂蛋白处理人脐静脉内皮细胞 24 h和以1.6 g/L低密度脂蛋白处理人脐静脉内皮细胞不同时间（12，24和48 h）时NADPH氧化酶4 mRNA水平变化，结果显示与不加低密度脂蛋白的对照组相比，各组NADPH氧化酶4 mRNA表达均增强。 结论：低密度脂蛋白上调人脐静脉内皮细胞内NADPH氧化酶4 mRNA表达，并促进细胞内活性氧生成和细胞凋亡。     

成纤维细胞生长因子21心肌保护作用的研究进展

成纤维细胞生长因子21(FGF21)主要参与糖脂代谢的调节,与肥胖、糖尿病、代谢综合征和非酒精性脂肪肝等多种疾病或病理过程密切相关。目前研究表明,FGF21可以拮抗心肌缺血和缺血再灌注损伤,发挥明显的心肌保护作用,其作用机制可能与抗心肌细胞凋亡、抗炎、抗氧化应激、调节心肌细胞能量代谢和线粒体功能等有关。本综述简要概括FGF21心肌保护作用及其机制的研究进展。