百里香活性成分及药理作用研究

百里香（Thyme）为唇形科百里香属（Thymus L．）植物的统称,属矮小半灌木,茎匍匐生长,常生长于山坡、海边低丘上。百里香属植物全世界约有300～400种,分布在非洲北部、欧洲及亚洲温带地区,中国有11种和2个变种,多分布于黄河以北地区。     

何首乌、虎杖、大黄水提物中游离蒽醌含量的测定及对人正常肝细胞的毒性作用

目的：测定何首乌、虎杖、大黄3种中药水提物中游离蒽醌含量，比较3种中药水提物对人肝祖细胞HepaRG的体外细胞毒作用，探讨何首乌、虎杖、大黄中游离蒽醌含量与肝细胞毒性的关系。方法：煎煮法制备何首乌、虎杖、大黄3种受试饮片水提物，采用高效液相色谱色谱法分别同步测定3种水提物中5种主要游离蒽醌大黄素、大黄素甲醚、芦荟大黄素、大黄酸、大黄酚的含量；分别以浓度为1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mg/mL的3种中药水提物溶液处理HepaRG细胞48 h后，加入噻唑兰检测其活力；分别以1.5、2.0、2.5 mg/mL的3种中药水提物溶液处理HepaRG细胞48 h后，Annexin Ⅴ/PI双染后流式细胞术检测凋亡细胞比例。结果：何首乌水提物中主要游离蒽醌含量为0.229%，虎杖水提物中为0.545%，大黄水提物中为2.593%；何首乌水提物（2.0、2.5、3.0 mg/mL）、虎杖水提物（1.5、2.0、2.5、3.0 mg/mL）、大黄水提物（1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mg/mL）均可抑制HepaRG细胞活力，且抑制程度与主要游离蒽醌含量呈正相关；细胞凋亡实验结果表明，3种中药水提物（1.5、2.0、2.5 mg/mL）均明显诱导HepaRG细胞凋亡，且凋亡率与主要游离蒽醌含量呈正相关。结论：3种中药水提物中主要游离蒽醌含量由低到高依次为何首乌、虎杖、大黄，该含量与其体外肝细胞毒性作用成正相关，提示游离蒽醌可能是3种中药产生肝细胞毒性的重要成分。     

去甲斑蝥素诱导人卵巢癌SK-OV-3细胞发生有丝分裂期阻滞与凋亡

目的考察去甲斑蝥素(NCTD)对人卵巢癌SK-OV-3细胞生长的抑制作用,探究其诱导细胞发生有丝分裂期阻滞及凋亡的过程及相关性。方法 NCTD 30,60,120和240μmol.L-1分别作用人卵巢SK-OV-3细胞24,48和72 h后,MTT法检测细胞存活率;NCTD 60μmo.lL-1分别作用SK-OV-3细胞0,6,12和24 h后,流式细胞术测定细胞周期的变化;NCTD 60μmol.L-1分别作用SK-OV-3细胞0,6,12和24 h,倒置显微镜下检测其对细胞形态学变化的影响;Giemsa染色检测细胞核的变化;间接免疫荧光术结合激光扫描共聚焦显微镜技术检测细胞内微管分布及有丝分裂期纺锤体形成的影响。NCTD 60μmol.L-1分别作用12和36 h后,流式细胞术检测细胞凋亡情况;再将NCTD 60μmo.lL-1作用12 h后的细胞,采用温和的机械振荡法分离为悬浮细胞和贴壁细胞,继续作用24 h,流式细胞术及Giemsa染色检测分析两个时相两种细胞凋亡的影响。结果 MTT结果显示,NCTD 30～240μmol.L-1对SK-OV-3细胞的生长抑制作用存在明显的时间(P<0.05)和浓度依赖性(P<0.05);NCTD作用SK-OV-3细胞24,48和72 h的IC50分别为(261.3±2.4)μmo.lL-1,(48.3±1.7)μmol.L-1和(10.9±1.0)μmol.L-1。NCTD 60μmol.L-1分别作用于SK-OV-3细胞0,6,12和24 h,SK-OV-3细胞逐渐表现出G2/M期阻滞,呈时间依赖性;倒置相差显微镜下观察,NCTD引起SK-OV-3细胞逐渐收缩变圆,与周围细胞分离;Giemsa染色可见处于有丝分裂期的细胞显著增多,多个核细胞比例增多;免疫荧光染色发现,NCTD组细胞的微管系统受到干扰,有丝分裂期细胞纺锤体形成异常。NCTD作用细胞12和36 h凋亡率分别达20.4%和62.3%;将NCTD作用12 h的细胞,人工振荡分离为悬浮细胞和贴壁细胞,检测凋亡情况,同时检测继续作用24 h后两组细胞凋亡情况,发现处于有丝分裂间期的SK-OV-3细胞凋亡率大于处于有丝分裂期的细胞。结论 NCTD主要通过诱导人卵巢癌SK-OV-3细胞G2/M期阻滞和细胞凋亡抑制细胞生长。干扰细胞有丝分裂过程中微管的组装和纺锤体的形成可能是NCTD诱导SK-OV-3细胞M期阻滞的原因之一。NCTD诱导的SK-OV-3细胞发生凋亡可不依赖细胞M期阻滞。     

去甲斑蝥素降低人胃癌细胞程序性细胞死亡因子4的表达

目的 研究去甲斑蝥素(NCTD)降低程序性细胞死亡因子4(PDCD4)表达的机制。方法MTT法测定NCTD 5~640 μmol·L^-1与人胃癌BGC-823细胞作用24,48和72 h细胞存活率;Western蛋白质印迹法测定NCTD 0, 6, 30和60 μmol·L^-1作用BGC-823细胞24 h PDCD4蛋白表达水平;NCTD 60 μmol·L^-1作用20 h后加入MG132 10 μmol·L^-1作用4 h对PDCD4蛋白表达的影响;逆转录PCR法测定NCTD 60 μmol·L^-1作用BGC-823细胞24 h后PDCD4 mRNA表达的变化;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)测定NCTD 60 μmol·L^-1作用BGC-823细胞6, 12和24 h后microRNA-21(miR-21)的表达。Western蛋白质印迹法测定细胞转染miR-21抑制剂对PDCD4蛋白表达的影响。结果 NCTD作用后BGC-823细胞存活率明显下降,NCTD作用BGC-823细胞24, 48和72 h IC₅₀分别为74.5, 35.0和10.3 μmol·L^-1。NCTD 6, 30和60 μmol·L^-1作用于BGC-823细胞24 h,PDCD4蛋白分别降低9%, 47%和62%。NCTD对PDCD4 mRNA表达无影响。与NCTD处理组相比,MG132和NCTD共处理对PDCD4蛋白表达无明显影响。NCTD 60 μmol·L^-1作用BGC-823细胞12和24 h后,细胞中miR-21的表达显著升高(P<0.01)。细胞转染miR-21抑制剂后,可抑制NCTD降低PDCD4蛋白表达的作用。结论 NCTD通过调控miR-21降低PDCD4蛋白的表达。     

何首乌不同分离部位对人正常肝L02细胞和 肝癌HepG2细胞的杀伤作用

目的:考察何首乌不同分离部位对入正常肝L02细胞和肝癌HepG2细胞的杀伤作用,寻找能明显杀伤肝癌细胞但对正常肝细胞生长影响较小的分离部位,并初步探讨其对2种细胞不同作用的机制.方法:何首乌70％乙醇提取物经AB-8型大孔树脂吸附,依次用水、50％乙醇和95％乙醇洗脱得到何首乌乙醇提取物的水洗脱部位(RW)、50％乙醇洗脱部位(R50)和95％乙醇洗脱部位(R95);体外培养人正常肝L02细胞及肝癌HepG2细胞,用含何首乌各分离部位的细胞培养液与细胞共同孵育一定时间后,MTT检测及倒置镜下观察约物对L02及HepG2细胞生长的影响,筛选具有区别杀伤作用的部位,考察其剂量和时间作用效应.进一步通过Giemsa染色观察药物作用后细胞核的变化,流式细胞术检测L02细胞周期和凋亡情况.结果:MTT和倒置镜下镜检结果均表明,R50对L02细胞和HepG2细胞具有明显的区别杀伤作用.Giemsa染色和流式细胞术结果表明,R50诱导2种细胞凋亡的程度不同:试验的各个时相下HepG2中凋亡细胞的比例均明显高于L02细胞(HepG2细胞中凋亡细胞的比例在24,48,72 h分别为83.62％,60.52％,74.49％,L02细胞中凋亡细胞的比例则分别为31.02％,20.57％,25.32％,2种细胞阴性对照组中凋亡细胞的比例在各个时相均小于5％),但对2种细胞的细胞周期没有明显影响.结论:何首乌提取物的R50部位对人正常肝L02细胞和肝癌HepG2细胞具有明显的区别杀伤作用,区别杀伤作用的本质是药物诱导2种细胞凋亡的程度不同.     

金莲花不同花部对总黄酮的贡献度研究

目的:测定金莲花不同花部总黄酮的含量及质量分数,确定各花部对金莲花总黄酮的贡献度。方法:比色法测定金莲花不同花部中总黄酮的含量;质量分析法测定不同花部的质量分数;采用数学方法计算各花部对金莲花总黄酮的贡献度。结果:金莲花各花部的总黄酮含量为:花萼(6.18%)、花柄(2.84%)、花冠(2.22%)、子房(1.52%)、花蕊群(1.07%)。金莲花各花部的质量分数为:花萼(41.90%)、花蕊群(22.40%)、子房(15.29%)、花冠(10.24%)、花柄(10.17%)。结论:金莲花5个花部对总黄酮的贡献度依次为:花萼(72.00%)、花柄(8.19%)、花蕊群(6.85%)、子房(6.54%)、花冠(6.42%),花萼对总黄酮的贡献度最大。     

何首乌临床不良事件回顾性研究及风险控制措施探讨

目的:为了了解与何首乌有关不良事件相关不合理用药情况及影响因素,提高临床合理用药水平控制风险提供依据.方法:检索1978-2008年国内公开发表的有关何首乌相关不良事件个案病例报告信息,进行调查登记、数据整理、统计分析.结果:共获得文献26篇,涉及不良事件38例,包括变态反应10例,肝损害24例,其他4例.结论:无论患者自用还是医师处方,何首乌不合理使用情况普遍存在,这是用药后出现不良事件的主要因素之一,提高临床合理用药水平是控制其风险的最重要途径.     

艾迪注射液的不良反应及合理使用

近年来，随着艾迪注射液广泛应用于临床恶性肿瘤的治疗，其不良反应报道也日益增多，其不良反应包括过敏反应、恶心呕吐、静脉炎、一过性转氨酶增高等，严重者表现为过敏性休克、呼吸困难等。通过对相关报道进行分析和讨论，提醒临床医护工作者加强临床用药监护，提高合理用药水平，从而保证公众用药安全。同时建议药品生产企业加强基础研究，改进工艺,从源头上减少中药注射剂的不良反应。     

二甲双胍抑制人MDA-MB-231细胞增殖及迁移的体外实验研究

目的： 研究二甲双胍对体外培养的人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖及迁移的影响。方法： MTT实验分为4个处理组,分别为RPMI 1640培养基对照组,浓度为1、2、4 mmol/L的二甲双胍处理组,在作用48、72 h后测定各组的细胞活力并进行统计学分析;倒置相差显微镜下观察药物处理72 h后人乳腺癌MDA-MB-231细胞与对照组相比的形态变化;Giemsa染色观察4 mmol/L二甲双胍作用48 h后的细胞形态;采用细胞划痕实验和Transwell实验,检测二甲双胍（2、4 mmol/L）作用人乳腺癌MDA-MB-231细胞24 h后,对细胞迁移能力的影响。结果： MTT实验结果显示4 mmol/L二甲双胍作用72 h可显著抑制MDA-MB-231细胞的活力,抑制率为（29.83±2.25）％,与对照组相比,细胞活力降低（P<0.05）。倒置相差显微镜下形态学观察发现,与对照组相比,4 mmol/L二甲双胍处理组细胞密度降低,变圆的细胞数量增加,细胞与细胞之间的联系减少。Giemsa染色结果显示4 mmol/L二甲双胍作用48 h后,部分细胞出现凋亡细胞核碎裂形态。划痕实验结果表明,2、4 mmol/L二甲双胍作用24 h后细胞汇合度明显低于对照组,其中4 mmol/L处理组的划痕愈合率为（52.67±4.48）%,与对照组间的差异显著（P<0.01）;Transwell实验结果表明,2、4 mmol/L二甲双胍作用细胞24 h后穿膜细胞数量减少,穿膜细胞数量分别为（61.6±1.6）、（51.3±2.6）个,均低于对照组的（99.3±18.9）个（P<0.05）。结论： 二甲双胍在体外可抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖及迁移。     

大鼠肝微粒体代谢对何首乌水提物肝细胞毒性的影响

目的：研究大鼠肝微粒体代谢对何首乌水提物肝细胞毒性的影响。方法：利用大鼠肝微粒体对何首乌水提物进行体外代谢;将经代谢前后的何首乌水提物溶液冷冻干燥,以不同浓度（相当于生药1.5、3、6、12 mg/mL）分别作用肝L02及HepG2细胞24 h及48 h,MTT法检测其对两种细胞活力的影响;HPLC测定何首乌水提物溶液中3种主要成分（二苯乙烯苷、大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷、大黄素）的含量变化。结果：何首乌水提物代谢后,随着其剂量的增加,对细胞活力的抑制作用逐渐增强,与何首乌水提物未代谢组相比,浓度为12 mg/mL的何首乌水提物代谢组毒性明显降低（P < 0.01）。HPLC测定结果显示,何首乌水提物代谢组上述3种主要成分含量均有所降低。结论：何首乌水提物经大鼠肝微粒体代谢后对肝细胞毒性降低,与其主要成分含量降低之间的关系需要进一步研究。