沙眼衣原体感染的HeLa细胞分泌IL-8和IL-10

沙眼衣原体 (ＣＴ)是一种严格的细胞内生长微生物 ,ＣＴ的致病机理涉及机体免疫防御和免疫病理反应。体外研究发现 ,ＣＴ能诱导外周血单核细胞和Ｕ937产生ＩＬ 1、ＩＬ 6、ＩＬ 8、ＩＬ 10和ＴＮＦ α等。感染ＣＴ的上皮细胞系ＨｅＬａ细胞分泌细胞因子的报道较少 ,ＩＬ 8是一种重要的炎性因子 ,具有化学趋化作用 ,并且能激活白细胞使白细胞聚集到感染部位发挥作用。ＩＬ 10为免疫活性因子 ,参与机体的免疫反应和免疫调节。本研究意在就感染ＣＴ的ＨｅＬａ细胞产生ＩＬ 8和ＩＬ 10能力进行研究 ,为防治和研究沙眼衣原体提供新思路。采用细胞…     

日本血吸虫中国大陆株琥珀酸脱氢酶铁硫蛋白的克隆与表达

目的：克隆日本血吸虫琥珀酸脱氢酶铁硫蛋白（sjSDISP）全长编码基因，并对所获基因在大肠杆菌中进行表达。方法：根据基因库中SjSDISP对应的EST（BU804141）以及日本血吸虫成虫cDNA文库载体λgtl1多克隆位点邻近核苷酸序列设计引物，以日本血吸虫成虫cDNA文库为模板，采用锚式PCR对SjSDISP基因不完整的3′端和5′端进行扩增、测序，用电子软件拼接成全长cDNA，将其克隆到表达载体pGEX-4T-1上，经琼脂糖凝胶电泳、限制性内切酶消化、PCR和测序鉴定后，选择阳性克隆进行表达及Western印迹分析。结果：获得1071bp全长cDNA，其理论推导为编码278个氨基酸残基的蛋白质。SjSDISP基因在大肠杆菌BL2．中获得良好表达。该融合表达产物相对分子质量约为56kD，且能被日本血吸虫成虫抗原免疫血清特异识别。结论：编码日本血吸虫琥珀酸脱氢酶铁硫蛋白全长cDNA克隆及其在大肠杆菌中的表达获得成功。     

幽门螺杆菌napA基因真核表达系统的构建及其在小鼠体内的表达

目的构建幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,Hp）napA基因真核表达系统,了解其在小鼠肌细胞中的表达情况。方法根据GenBank中HpnapA基因序列（AF227075）和真核表达质粒多克隆位点序列设计引物,以Hp-RNA逆转录产物为模板,扩增HpnapA编码基因,用基因重组技术将目的基因定向克隆到pcDNA3多克隆位点上,转化大肠杆菌,经质粒扩增和DNA测序后,进行小鼠肌肉免疫、目的基因表达水平和抗体水平检测。结果经双酶切、PCR和测序验证,真核表达质粒HpnapA/pcDNA3构建成功。动物实验结果表明：真核重组质粒在小鼠肌细胞内获良好表达,表达产物能刺激机体产生一定效价的抗体。结论成功构建了HpnapA/pcDNA3真核重组表达质粒;用以免疫小鼠,在小鼠肌细胞内获较好表达并具有免疫原性,有用于疫苗研究的潜在价值。