神经元特异性烯醇化酶异常表达对肺癌诊断价值的研究

肺癌一直是危害人类健康的多发病和常见病,也是当今恶性疾病死亡的主要原因之一。神经元特异性烯醇化酶(ＮＳＥ)是糖酵解中的酶烯醇化酶的同工酶,广泛存在于中枢和周围神经组织及小细胞肺癌(ＳＣＬＣ)中,近来发现在非小细胞肺癌(ＮＳＣＬＣ)中也有升高。对各种肺癌的组织、血清进行了ＮＳＥ测定,以探讨ＮＳＥ在肺癌中的作用。材料与方法　(1)人肺组织标本:收集1999年4月～1999年8月手术后新鲜肺癌组织21份。立即于-85℃冰箱保存。经病理切片诊断,鳞癌12例,腺癌7例,小细胞肺癌2例。(2)肺癌病人血清:收集本院1998年～1999年住院病人中的原发性…     

急性丙型肝炎患者病毒株部分基因克隆及其序列分析

目的探讨HCV感染在肝炎发生中的病原学作用。方法对89例急性肝炎进行HCV标志物分析,并从HCVRNA阳性的5例非甲非乙型急性肝炎患者血清中提取HCVRNA,经随机引物逆转录合成cDNA,先以型别特异的PCR法分型,再用巢式PCR扩增部分核心基因区序列,将产物连接p-GEM-T载体,在大肠杆菌中表达后测序分析。结果非甲非乙型急性肝炎中HAV、HBV和HCV阳性分别占47.2%、28.1%和15.7%,HAV和HBV双重感染占14.6%,非甲、非乙和非丙肝炎占9%;HCV分型显示Ⅱ型、Ⅲ型和Ⅱ/Ⅲ混合型分别占85.8%、7.1%和7.1%;Ⅱ型血清用于序列分析,扩增序列424bp与原设计完全一致。急性肝炎株间核苷酸同源性在98.1%～99.5%。氨基酸同源性在97.6%～99.2%;前者的同源性在Ⅰ型为91.9%,在Ⅱ型为94.3%～95.6%;后者与Ⅰ型、Ⅱ型的同源性在92.3%～95.8%。结论HCV为引起非甲非乙型急性肝炎的主要病毒之一,以Ⅱ型为主,应引起临床重视。     

大鼠脊髓损伤后诱导型一氧化氮合酶的表达及动态改变

目的：探讨大鼠急性脊髓损伤后不同时段髓内诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA动态表达。方法：36只SD大鼠抽签法随机分组，任选一组作为对照。采用Allen法制作急性脊髓损伤模型，在损伤后2，6，12，24，48h等时段，以反转录酶聚合酶链式反应(RT-PCR)分析：iNOS mRNA表达。在脊髓损伤后24h，用免疫组化方法分析iNOS在脊髓不同类型神经细胞中的表达与分布，并以比色法测定脊髓损伤后血清NOS及一氧化氮的含量。结果：脊髓损伤后，神经元、星形细胞和小胶质中均可见iNOS表达，以神经元表达为主。脊髓损伤后2h可见iNOS表达0．56&;#177;0．02，24h达高峰1．20&;#177;0．05，48h开始降低0．70&;#177;0．06。血清中NOS及一氧化氮的动态改变与损伤组织iNOS mRNA变化趋势相一致。结论：研究资料提示脊髓损伤后脊髓内iNOS表达增高，过量产生的一氧化氮加重了继发性脊髓损伤。     

血管内皮生长因子基因表达对肺癌生长及预后的评估作用

目的：旨在探讨血管内皮生长因子(vascular endochelial growthktor，VECF)在肺癌组织中的分布及其表达水平。方法：对象为南通大学附属医院2000—07／2001—05肺癌手术中新鲜肺癌组织标本。采用免疫组织化学法分析了VEGF在38例肺癌组织的胞内定位及其表达状态；并测定癌、癌旁及远癌组织中总RNA水平，以反转录聚合酶链式反应分析组织中VEGF mRNA的表达水平。结果：38例肺癌组织中VEGF阳性表达率为76％，其中在Ⅲ期、Ⅳ期肺癌达90％，伴有淋巴结转移者为84％，癌组[(1．44&;#177;1．06)ng／g组织]总RNA水平高于癌旁组[(0．63&;#177;0．24)ng/g组织]和远癌组[(0．50&;#177;0．27)ng／g组织]，并与总RNA浓度呈显著正相关(P&;lt;0．01)；基因扩增显示VEGF121和VECF165为肺癌组织中表达的两个主要基因片段。结论：肺癌组织中VEGF呈过度表达状态，VEGF mRNA分析可以作为肺癌血管生成及转移可靠指标。     

亲和层析微柱法测定肝癌特异性AFP

目的建立一种方便、经济的方法检测血清中肝癌(HCC)特异性AFP(AFP-L3).方法用小扁豆凝集素(LCA)亲和层析柱分离血清中AFP-L3,放射免疫法测定AFP及AFP-L3.结果肝癌患者血清经LCA-Sepharose 4B亲和层析柱分离和含α-甲基-D-甘露糖苷的解吸液洗脱可得到AFP-L3.以AFP-L3在总AFP中所占百分比≥15%作为临界值,本法诊断HCC的敏感性为92.7%,特异性为88.2%.结论该法特异性强、敏感性高、重复性好,且方便、经济,为临床早期诊断肝癌的有用指标.     

骨折愈合修复过程中血管内皮生长因子的表达及其动态改变

目的:通过研究骨折愈合过程中骨痂组织内血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)的基因表达水平的动态变化,探讨VEGF对骨折愈合的影响。方法:实验于2004-01/10在南通大学实验动物中心完成。采用RT-PCR方法检测大鼠骨折不同阶段(3,6,12,24,48d)骨痂组织中VEGF基因的表达及动态变化。结果:VEGFmRNA在骨折后3d开始表达,24d达到高峰,其与β-actin表达量比值在骨折后3,6,12,24,48d分别为0.65±0.22,0.78±0.23,3.81±1.04,5.20±2.15,0.98±0.46,其中12d组、24d组与3d组比较差异有显著性意义(P<0.01),48d组与3d组比较差异有显著性意义(P<0.05)。结论:VEGF参与调节骨折愈合的修复并可能在骨愈合中起重要作用。     

肝癌发生相关细胞因子及脂质结合唾液酸检测与诊断价值的临床评价

目的探讨外周血血管内皮生长因子（VEGF）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、游离胰岛素样生长因子-Ⅱ（FIGF-Ⅱ）和脂质结合唾液酸（LSA）浓度分析对肝癌诊断与鉴别的临床价值。方法以不同的定量方法,分别检测了肝癌、慢性肝炎和肝硬化患者外周血VEGF、TNF-α、FIGF-Ⅱ和LSA浓度,综合比较评价了多项指标对肝癌诊断与鉴别的临床意义。结果肝癌组患者外周血VEGF、FIGF-Ⅱ、LSA和TNF-α水平显著高于慢性肝炎组和肝硬化组（P〈0．05,P〈0．01）,其阳性率分别为87．8％、75．6％、67．8％和86．7％。然而,未见良性肝病组间存在明显差异。综合评价多指标对肝癌诊断的敏感性、特异性和准确度,VEGF较好,分别为87．8％、87．2％和87．5％;TNF-α次之,分别为86．7％、65．4％和76．8％。结论肝癌发生相关细胞因子浓度分析有助于肝癌诊断及预后观察。     

胰岛素抵抗肝癌细胞IGF-1R/NF-κB表达及多药耐药机制研究

目的 探讨胰岛素抵抗（IR）肝癌细胞胰岛素样生长因子1受体（IGF-1R）和核因子-κB（NF-κB）表达变化及多药耐药（MDR）发生机制。方法 采用高浓度胰岛素诱导人肝癌细胞（HepG2和HepG2.2.15）建立胰岛素抵抗（IR）细胞模型。采用Western blot 法检测胰岛素受体（InsR）、IGF-1R、NF-κB 和 P-糖蛋白（P-gp）表达变化。使用流式细胞仪（Annexin V-FITC法）检测阿霉素对细胞凋亡的影响。结果 分别用100 nmol/L 和 1 000 nmol/L 胰岛素培养 HepG2 和 HepG2.2.15 细胞 48 h,成功建立 IR 肝癌细胞模型;IR 肝癌细胞 IGF-1R、NF-κB、P-gp 表达上调,而InsR 表达下调;应用 25μg/mL 阿霉素作用细胞 24 h 后,IR-HepG2 细胞组凋亡率（31.1%±1.9%）显著低于HepG2 细胞组【（49.7%±2.2%）,P＜0.01】,IR-HepG2.2.15细胞凋亡率【（20.1±1.7） %】显著低于 HepG2.2.15 细胞【（33.8±1.8）%,P＜0.01】;HepG2.2.15 和 IR-HepG2.2.15 细胞凋亡率分别较 HepG2 和 IR-HepG2 细胞显著降低（P＜0.01）。结论 IGF-1R/NF-κB/P-gp 过表达可能介导 IR 肝癌细胞对阿霉素的多药耐药。     

凋亡抑制蛋白livin在人非小细胞肺癌中的表达以及和survivin表达的关系

目的:探讨非小细胞肺癌(NSCLC)组织中凋亡抑制蛋白 livin 表达及其与各临床病理因素的关系, 以及和凋亡抑制蛋白 survivin表达的相关性. 方法: 采用免疫组织化学法检测100例NSCLC患者的病变肺组织(肺癌组) 以及10例正常或肺良性疾病患者肺组织(对照组) livin蛋白和survivin蛋白的表达水平,并分析2者与肺癌的组织类型、分化程度、淋巴结转移之间的关系,以及2种蛋白表达的相关性.结果:100例NSCLC组织中livin表达阳性率为 68.0%、survivin 为62.0%, 而在正常和癌旁组未检出阳性结果; livin的表达与组织分化和淋巴结转移有关,组织分化差,淋巴结转移者livin表达率高(P<0.05).62例survivin阳性样本中有 38例livin 呈阳性.结论: livin 和survivin 蛋白在癌组织中表达上调,提示其可能在非小细胞肺癌发生发展中起促进作用. survivin 和淋巴结转移的密切关系表明它的高表达可能反映患者较差的预后.livin基因可能成为非小细胞肺癌治疗的一个靶基因.     

血清GGT、GGT/ALT及AFP检测对肝脏良恶性疾病的临床价值

目的:探讨检测血清GGT、GGT/ALT以及AFP对肝脏良恶性疾病的临床价值。方法:采用全自动生化仪检测114例肝脏良、恶性疾病患者GGT、ALT活性,采用酶标仪检测AFP活性。结果:原发性肝癌组GGT活性高于慢性肝炎组和肝硬化组(P<0.05);胆道梗阻组GGT活性显著高于急性黄疸型肝炎组(P<0.01)、慢性肝炎组(P<0·01)、肝硬化组(P<0.01)及肝癌组(P<0.05);原发性肝癌组GGT/ALT比值显著高于肝硬化组(P<0.05)、急性黄疸型肝炎组(P<0.01)、慢性肝炎组(P<0.01)。原发性肝癌病例进行AFP和GGT联检可提高阳性率。结论:血清GGT、GGT/ALT比值以及AFP联合检测可有效辅助鉴别肝脏良恶性病变。