周期性张应力联合淫羊藿苷促进脂肪干细胞成骨分化的实验研究

目的探讨周期性张应力（CTS）联合淫羊藿苷促进脂肪干细胞（ASCs）成骨分化的作用。 方法分离10只Sprague-Dawley(SD)大鼠的ASCs,分别按不同的干预方法将收集的ASCs细胞分为对照组（仅用普通培养基干预）、淫羊藿苷组（仅用淫羊藿苷干预）、1000μ组（仅用1000μ的CTS干预）、2000μ组（仅用2000μ的CTS干预）、3000μ组（仅用3000μ的CTS干预）和联合干预组（用2000μ的CTS联合淫羊藿苷进行干预）。淫羊藿苷的作用浓度为10-7mol/L;CTS的设置参数为频率1.0Hz,应力大小分别为1000μ strain（简称1000μ）、2000μ、3000μ,每刺激5s之后休息15s,每日总刺激时间为2h。干预7d后,收获细胞采用Western Blot法检测碱性磷酸酶（ALP）蛋白的表达;用淫羊藿苷联合2000μ的CTS对ASCs进行干预3d后,收获ASCs细胞用Western Blot法检测其Runt相关基因转录因子2（Runx2）、YES相关蛋白（YAP）和结缔组织生长因子（CTGF）蛋白的表达;分别于干预3d和7d后,采用ALP活性定量检测试剂盒对ALP活性进行检测;干预3d后,利用RT-PCR检测YAP下游靶基因CTGF和锚蛋白重复结构域1（Ankrd1）的表达;干预7d后,利用RT-PCR检测成骨分化相关基因骨桥素（OPN）和Ⅰ型胶原的表达,并对各组所得数据进行统计学分析比较。 结果淫羊藿苷和CTS（1000μ、2000μ、3000μ）均能显著促进ALP蛋白的表达。与1000μ和3000μ应力大小的CTS相比,2000μ的CTS具有最强的促ALP蛋白表达能力;且2000μ的CTS联合淫羊藿苷能显著促进ALP的表达及Runx2和CTGF的表达,且其联合作用时效应更明显;但淫羊藿苷和2000μ的CTS单独作用并不能促进YAP蛋白的表达,只有联合作用时才具有促YAP表达作用。淫羊藿苷和2000μ的CTS单独作用3d和7d后均能显著上调ALP的活性,且其联合作用时上调ALP活性的效应更加明显。淫羊藿苷和2000μ的CTS单独作用7d后,能显著促进成骨分化基因OPN和Ⅰ型胶原蛋白的表达,且联合作用时效应更明显。淫羊藿苷和2000μ的CTS单独作用3d后能显著促进YAP靶基因CTGF和Ankrd1的表达,联合作用时效应更明显。 结论CTS和淫羊藿苷联合作用可以通过上调YAP活性来促进ASCs的成骨分化。     

机械应力调控软骨细胞炎症反应中长链非编码RNA的机制研究

目的探讨机械应力调控软骨细胞炎症反应的作用机制。 方法体外分离培养新生SD大鼠软骨细胞,经白介素-1β（IL-1β）干预构建软骨细胞炎症模型,设置对照组（IL-1β）、2000μstrain组（2000μstrain应力+IL-1β）、5000μstrain组（5000μstrain应力+IL-1β）,IL-1β浓度为5ng/ml,以1Hz应力干预2h。采用Real-time PCR和Western Blot检测Ⅱ型胶原（Col-2）、基质金属蛋白酶13（MMP13）、自噬标记蛋白LC3、Beclin-1及m-TOR表达,同时检测MEG3表达,采用免疫荧光染色检测自噬小体形成;si-RNA沉默MEG3后,采用Real-time PCR检测LC3及Beclin-1表达。 结果2000μstrain组软骨细胞Col-2、LC3、Beclin-1基因及Beclin-1蛋白表达量均较对照组及5000μstrain组明显上调（P<0.05）;2000μstrain组软骨细胞MEG3基因表达量较对照组及5000μstrain组明显下调（P<0.05）;5000μstrain组m-TOR蛋白表达较对照组及2000μstrain组明显增加（P<0.05）;应力组自噬标记蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ相对表达量均较对照组明显减少（P<0.05）;免疫荧光染色显示2000μstrain组自噬小体形成较对照组及5000μstrain组明显增加,5000μstrain组自噬小体形成较对照组及2000μstrain组明显减少（P<0.05）;si-RNA沉默MEG3后,发现LC3及Beclin-1表达量均明显增加（P<0.05）。 结论机械应力可影响软骨细胞LncRNA-MEG3表达,从而调控炎症环境中软骨细胞自噬水平。     

一期前后路联合手术治疗多节段颈椎间盘突出合并后纵韧带骨化症

背景:多节段颈椎间盘突出合并后纵韧带骨化症会对患者产生严重的脊髓损伤,手术治疗方案目前仍存在争议.采取一期前后路的手术方式治疗能否达到满意效果尚不清楚.目的:观察采取一期前后路联合手术治疗多节段颈椎间盘突出合并后纵韧带骨化症的临床疗效.方法:选择武汉同济医院骨科收治的颈椎多节段颈椎间盘突出合并后纵韧带骨化症患者17例,男11例,女6例,年龄42～74岁,平均51.5岁;均采用一期前后路联合手术治疗.术前X射线,CT或MRI检查提示颈椎被多个节段的颈椎间盘突出和骨化的后纵韧带压迫.术后定期复查X射线观察融合率和稳定性及并发症发生情况.结果与结论:术后伤口均一期愈合情况,全体病例术后随访6-36个月,平均24.5个月.JOA术后6个月评分为(12.88±2.47)分,较术前(6.41±1.28)分明显提高(P<0.05).JOA评分改善率为:优5例,良7例,可4例,优良率71%.全体病例植骨在三四个月后均获得融合,颈椎间隙高度及生理曲度恢复满意,未出现内固定断裂、松动及脱出等并发症.提示对于治疗多节段颈椎间盘突出合并后纵韧带骨化症,一期前后路联合手术能早期彻底地减压并重建脊柱的即刻稳定性,是安全有效的手术方式.     

利用藻酸盐与骨髓间充质干细胞及前列腺癌细胞混合培养:观察干细胞对癌细胞增殖速度及成簇大小的影响

背景:肿瘤外环境研究的模型主要集中在实验室细胞的二维培养与体外动物实验,缺乏三维立体模型的研究与构建.目的:体外模拟肿瘤骨转移的三维模型,并比较在有无骨髓间质干细胞时前列腺癌细胞的增殖速度与成簇大小以及成簇率.方法:清洁级SD大鼠2只用于提取骨髓间质干细胞.利用藻酸盐模拟骨髓微环境,将前列腺癌细胞与SD大鼠骨髓间质干细胞在藻酸钙中共培养.通过显微镜与组织切片观察细胞在模型中的生长情况.利用绿色荧光蛋白转染肿瘤细胞,通过培养在普通光及荧光显微镜下观察三维模型中肿瘤单克隆的生长扩增情况.结果与结论:有干细胞存在共培养的三维藻酸钙微环境中前列腺癌细胞的成簇速度、数量及成瘤率均较对照组高.对照组在7.75 d、有干细胞的混合培养组在6.00 d能形成单克隆细胞簇, 10 d后对照组瘤簇细胞计数为(95.13±11.63)个;有干细胞的混合培养组为(112.53±14.67)个,荧光细胞克隆形成率对照组为(77.10±6.85)%;有干细胞的混合培养组为(64.55±6.21)%;两者相比均有显著性意义.结果提示前列腺癌细胞与骨髓基质干细胞在藻酸钙微球环境中,有利于细胞增殖及成簇性发展.     

炎症微环境中ERN1调节软骨细胞炎症因子的实验研究

目的：探讨内质网到细胞核信号1(endoplasmic reticulum-to-nucleus signaling 1,ERN1)基因对炎症微环境中软骨细胞炎症因子和软骨分解代谢的影响。方法：通过CRISPR-Cas9系统构建人ERN1基因敲除的C28/I2软骨细胞株(ERN1 KO)；从C57BL/6J背景的ERN1软骨特异性敲除(ERN1 cKO)小鼠软骨组织分离原代软骨细胞，分别为对照组(ERN1^flox/flox)、ERN1 cKO组(ERN1^flox/flox-Col2Cre⁺)；在C28/I2人正常软骨细胞中过表达ERN1腺病毒(Ad ERN1)，以AdGFP为对照组；实验采用10μg/L白介素1β(interleukin-1β,IL-1β)诱导过表达ERN1软骨细胞或ERN1缺陷软骨细胞，形成炎症微环境，用qPCR和Western blot检测IL-1β处理ERN1缺失或过表达ERN1细胞后，肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α,TNFα)、IL-4、IL-6、IL-10等炎症因...     

关节炎中滑膜增生的研究进展

滑膜增生是类风湿性关节炎的主要特征，也是其他关节炎如血友病性关节炎和骨关节炎中不可忽视的病理改变之一。本文通过对中国知网、万方数据库、PubMed和Web of Science等数据库的相关检索结果进行归纳分析，总结了滑膜增生的主要细胞来源、滑膜异常增生对关节的影响和参与调控滑膜增生的诸多信号通路。最后，我们强调了成纤维样滑膜细胞的增殖、凋亡、自噬和铁死亡等细胞死亡机制在滑膜增生中的重要作用，期望对于整体阐明滑膜病变在关节疾病进程中的作用有所帮助。     

组织工程技术联合早期康复治疗关节软骨缺损

目的 :观察组织工程技术联合早期康复对关节软骨缺损修复的影响。方法 :用Percoll密度梯度离心法分离羊自体骨髓间充质干细胞 (MSCs) ,体外扩增并与多孔生物陶瓷 β 磷酸三钙 ( β TCP)复合后手术植入羊右侧股骨内侧髁负重关节面缺损处 ( 8× 4mm)作为实验组 ,其中又分为术后给予康复干预的实验组 1和让其自由活动的实验组 2 ,并设空白组作为对照组。术后 12周取材 ,进行大体观察、组织学分析。结果 :实验组 1和 2的缺损修复区均生成外观透明的新生软骨 ,实验组 1新生软骨组织表面与周边正常软骨自然连续 ,平齐 ,而实验组 2修复平面略下陷 ;组织学均表现为 β TCP支架材料大部分降解 ,新生软骨组织基质异染明显。对照组缺损未得到明显修复。结论 :以 β TCP多孔生物陶瓷为支架材料 ,自体MSCs为种子细胞构建的组织工程化软骨具有明显的关节软骨缺损修复能力 ,辅以一定的康复干预措施更有利于关节软骨缺损的早期修复 ,显示了广阔的临床应用前景     

不同转移潜能骨肉瘤细胞差异表达基因的筛查

目的: 研究不同转移潜能骨肉瘤细胞差异表达的基因,筛选骨肉瘤转移相关的基因。方法: 分别提取低转移骨肉瘤细胞株M6和高转移骨肉瘤细胞株M8细胞总RNA,采用cDNA基因芯片筛查M6和M8细胞差异表达的基因,杂交信号用Generation Ⅲ array扫描,结果用Imagequant 5.0软件分析。选择基因芯片筛选到的典型差异表达基因用实时定量PCR进行验证。结果: M6和M8骨肉瘤细胞株差异表达的基因共有330个,其中与低转移组（M6）相比,在高转移组（M8）中显著性上调表达的基因有178个,下调表达的基因有152个。其中发生非常显著性上调表达的基因43个,发生非常显著性下调表达的基因49个。差异基因主要包括与细胞增殖相关的基因,提示与M8细胞增殖受抑相关;其次是与基因表达调控及信号转导相关的基因,提示这些基因和肿瘤转移有关联性。结论: 基因芯片方法对于筛选骨肉瘤转移相关基因有独特的优势,MG63细胞M8亚株中筛查到显著性上调的基因43个,显著性下调的基因49个,与骨肉瘤的转移有关。     

骨骺干细胞的体外培养及生长特性

目的：观察体外培养大鼠骨骺干细胞及其生长特性。方法：采用显微取材后酶消化获取骨骺干细胞，用Percoll密度梯度离心法纯化，并测定其细胞生长曲线、细胞分裂指数、碱性磷酸酶活性，用免疫组化及免疫荧光染色的方法检测Ⅱ、Ⅹ型胶原的合成情况和透射电镜观察粗面内质网的丰富程度。结果：大鼠骨骺干细胞形状类似成纤维细胞，呈梭型，碱性磷酸酶活性低，粗面内质网少，Ⅱ型胶原合成量较多。结论：体外培养的骨骺干细胞能向成熟阶段分化，可为软骨或骨组织工程提供理想的种子细胞。     

磁刺激和碱性成纤维细胞生长因子对脊髓损伤早期的保护作用

目的探讨脊髓损伤后，应用磁刺激和外源性碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对损伤脊髓组织早期的保护作用。方法实验利用Allen WD(weight drop)技术，以致伤力(砝码质量10g，下落高度2．5cm)制成wistar大鼠T8脊髓损伤模型，治疗组分别于术后即刻、1h、2h、4h、24h分别予0．5HZ、70％输出强度的磁刺激，同时经蛛网膜下腔导管注入20ul bFGF，对照组不做处理。术后2h、6h、24h取治疗组、对照组动物损伤区脊髓组织作以下检测：用干湿法测水含量；用原子吸收光谱法测钙、镁离子含量；伤后5d取损伤脊髓组织，电镜观察脊髓结构。结果损伤区脊髓组织水含量增多，钙离子水平升高，镁离子水平下降，白质内髓鞘结构紊乱，囊性变严重；而应用磁刺激和bFGF可改善上述变化。结论脊髓损伤后应用磁刺激和bFGF可减轻脊髓损伤后的离子失衡，从而对继发性脊髓损伤具有保护作用。