Prohibitin的研究进展

Prohibitin(phb)基因是一种有效的肿瘤抑制基因,广泛分布于不同种属的各种生物细胞中,它所编码的产物Prohibitin(PHB)蛋白结构保守,既存在于线粒体内膜上,发挥分子伴侣作用,也存在于细胞核内,具有负性转录调控作用,因而对细胞代谢、生长、分化、衰老以及凋亡等诸多方面发挥着重要的调控作用,可能与某些肿瘤和退行性疾病的发生有关。     

1-羟基-2，3，5-三甲氧基[口山]酮对脂多糖致小鼠急性肺损伤的保护作用

目的探讨1-羟基-2,3,5-三甲氧基■酮(QGS)对脂多糖(LPS)致小鼠急性肺损伤的保护作用及其机制。方法采用ipLPS的方法建立小鼠急性肺损伤模型。检测肺脏指数,酶法检测支气管及肺泡灌洗液(BALF)中NO水平,Western blotting法检测核转录因子κB抑制蛋白IκB-α,诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)及环氧合酶Ⅱ(COX-2)等蛋白的表达,HE染色观察肺组织病理学改变。结果QGS500mg/kg组能显著降低LPS引起的小鼠的肺脏指数(P<0.05)。QGS250、500mg/kg组均能显著降低LPS致伤小鼠BALF中NO水平,抑制率分别达到了37%和48.1%。同时QGS500mg/kg组还能够明显增加肺组织中IκB-α蛋白表达量并下调iNOS及COX-2蛋白表达量。结论QGS对LPS引起的小鼠急性肺损伤有保护作用,该作用与其增加IκB-α蛋白表达而抑制iN-OS和COX-2蛋白的表达有关。     

TUNEL与碘化丙啶双染检测耳蜗毛细胞的损伤

目的应用TUNEL与PI（碘化丙啶）双染法检测耳蜗毛细胞损伤。方法听力正常豚鼠经庆大霉素致聋后，做耳蜗基底膜铺片，用TUNEL与PI双染检测耳蜗毛细胞损伤的情况。结果在核固缩、核碎裂及部分核肿胀的细胞中TUNEL染色为阳性．细胞核正常及部分核肿胀的细胞中TUNEL染色为阴性。所有有核细胞均能被PI染色。结论通过TUNEL与PI双染可以确定TUNEL染色为阳性的细胞为凋亡的细胞，而核肿胀的细胞中TUNEL染色为阴性者可能为胀亡细胞。     

Smad5 基因在小鼠耳蜗胚胎发育中的作用

目的检测Smad5基因在小鼠耳蜗胚胎发育中的作用。方法选用耳廓反应灵敏、健康的C57BL／6小鼠作为种鼠交配．用观察阴栓方法获得胚胎9天到20天的胎鼠，≤17天取胚胎头，≥18天在显微镜下取耳蜗，胚胎头水平冰冻切片，耳蜗平行于蜗轴冰冻切片，HE染色方法观察小鼠内耳发育形态演变过程，免疫组织化学方法检测Smad5蛋白在小鼠胚胎10～20天的表达情况。结果胚胎10天，听泡发育，胚胎12天听泡下部有蜗管始基形成并开始发育。胚胎18天，蜗管发育了2圈，形成了可以辨认的内、外毛细胞，血管纹开始分化。Smad5在小鼠内耳胚胎发育全程均有阳性表达，且表达比较广泛，尤其早期在整个听囊均有表达。在胚胎15～17天．主要集中在即将发育成基底膜听觉感受器的部分。在胚胎发育中后期在内外毛细胞、螺旋神经节细胞、支持细胞、血管纹、基底膜、前庭膜等也有表达。结论Smad5参与小鼠耳蜗胚胎发育全过程，它可能为听觉的发生所必需的基因。     

鸟氨酸-氨甲酰转移酶缺陷症1例

患儿女 ,3岁 7个月 ,因呕吐 1周伴呕血 1d于 2 0 0 2年7月 2 2日收入北京儿童医院。患儿出生后易呕吐 ,频繁时1～ 2d 1次 ,轻时 1～ 2个月 1次 ,每次症状持续 1周左右可自行缓解 ,均为非喷射性呕吐 ,呕吐物为胃内容物。入院前2 0个月 ,曾因呕吐、抽搐、嗜睡被当地医院诊断为高氨血症 ,给予精氨酸注射治疗后好转。本患儿为第 1胎 ,孕 7个月时因前置胎盘行剖宫产 ,出生体重 2 10 0 g ,出生后无窒息 ,新生儿期体健。体格发育与同龄儿相仿 ,智力发育稍落后于同龄儿。父亲体健 ,母亲劳累后易头晕 ,有多睡史。非近亲婚配。入院查体 :血压 11 7/ 7 …     

阳离子脂质体介导BFGF/GFP基因对药物性耳蜗损害的防治作用

目的 探讨阳离子脂质体(天然碱性脂SA)携带碱性成纤维细胞生长因子/绿色荧光蛋白(bFGF/GFP)基因在豚鼠耳蜗中的表达,以及对庆大霉素所致耳蜗损害的防治作用。方法 将36只豚鼠分为3组,预防组右耳园窗注入SA-bFGF/GFP复合物后次日肌肉注射庆大霉素150mg.Kg~(-1).d~(-1)8天,治疗组先用庆大霉素8d后次日右耳给药,对照组单用庆大霉素8d。分别于实验前后及处死前行听觉脑干诱发电位(ABR)测试。荧光显微镜下观察耳蜗GFP的表达;用耳蜗琥珀酸脱氢酶染色铺片,扫描电镜观察毛细胞的缺失情况。结果 荧光显微镜下见双侧耳蜗均有GFP表达。预防和治疗组处死前的双耳ABR阈值与对照组比较差异有显著意义(P<0.01,P<0.05),耳蜗内外毛细胞缺失数与对照组比较差异有显著意义(P<0.01,P<0.05)。结论 SA脂质体介导的bFGF/GFP基因单耳给药双侧耳蜗均有高效表达,并对庆大霉素所致的耳蜗损害有防治作用。     

SA脂质体介导GFP/bFGF基因在豚鼠耳蜗中的表达

目的观察天然碱性脂(Stearylamine,SA)脂质体介导绿色荧光蛋白/碱性成纤维细胞生长因子(GFP/bFGF)基因于不同时间段豚鼠耳蜗中的表达,为进一步研究耳聋的基因治疗提供实验基础.方法取豚鼠16只,分成4组,每组4只.其中3只右耳圆窗内注入SA-GFP/bFGF复合物,1只同法注入生理盐水作为对照.分别于术后第2、7、14、21天取材.在荧光显微镜下观察GFP的表达,用免疫组化法检测bFGF的转导情况.结果荧光显微镜下见双侧耳蜗于术后第2天开始部分细胞发出绿色荧光,第7天达到高峰,支持细胞及内外毛细胞均显荧光,细胞轮廓清晰;第14天开始减弱,第21天消失.免疫组化染色显示,除血管纹外,耳蜗各回Corti器、螺旋韧带、螺旋缘及螺旋神经节细胞均有高浓度的表达产物,对照动物呈阴性表达.结论SA脂质体介导的GFP/bFGF基因单耳给药双侧耳蜗均有高效表达,为进一步研究基因治疗耳聋提供了可能.     

脑源性神经营养因子对耳蜗螺旋神经节的保护作用

目的　观察腺病毒携带的脑源性神经营养因子 (brainderivedneurotrophicfactor,BDNF)在豚鼠耳蜗中的表达 ,及噪声损伤后对螺旋神经节的保护作用。方法　 2 7只白色纯种豚鼠 ,暴露于135dBSPL ,4kHz的窄带噪声 4h。 7d后 ,12只经圆窗注入腺病毒携带BDNF(adenoviral mediatedBDNF ,ad BDNF) ,12只经圆窗注入ad LacZ ,3只注入人工外淋巴液。分别于 1、4、8周后取材 ,石蜡包埋中轴切片后 ,用免疫组化方法 (ABC法 )检测BDNF的表达。于光镜下计数螺旋神经节细胞。结果　在耳蜗各回中BDNF均有表达 ,4、8周组动物较 1周组动物表达弱。在 8周 ,注入ad BDNF组较ad LacZ组和人工外淋巴组螺旋神经节发生退行性病变的数目少 ,螺旋神经节细胞计数结果经统计学t检验 ,P <0 0 1,差异有显著性。结论　腺病毒携带的神经营养因子在耳蜗中能高效表达 ,在噪声损伤情况下腺病毒携带的脑源性神经营养因子对螺旋神经节有保护作用。该研究为基因治疗感音神经性聋提供了坚实的实验基础     

NT3重组腺病毒对耳蜗螺旋神经节的保护作用

目的　观察含有神经营养素 - 3(neurotrophin - 3,NT3)的重组腺病毒在豚鼠耳蜗中的表达及其在噪声损伤后对螺旋神经节的保护作用。方法　 2 7只白色纯种豚鼠 ,暴露于 135dBSPL、4kHz的窄带噪声中 4h。 7天后 ,12只经圆窗注入ad -NT3,12只经圆窗注入腺病毒携带的Lac2基因 (adenviruslacopron ,ad -LacZ) ,3只注入人工外淋巴液。分别于 1、4、8周后取材 ,石蜡包埋中轴切片后 ,用免疫组化方法 (ABC法 )检测NT3的表达。于光镜下计数螺旋神经节细胞。结果　在耳蜗各回中NT3均有表达 ,4、8周组动物较 1周组动物染色弱。注入ad -NT3组较ad -LacZ组和人工外淋巴组螺旋神经节发生退行性病变的数目少 ,螺旋神经节细胞计数结果经t检验有显著性差异 (P <0 .0 1)。结论　含有NT3的重组腺病毒在耳蜗中能高效表达 ,且在噪声损伤情况下对螺旋神经节有保护作用     

联合应用卡那霉素和速尿的豚鼠耳蜗毒性实验观察

目的探讨卡那霉素和速尿联合用药对豚鼠耳蜗的毒性作用。方法实验组25只豚鼠先行肌肉注射卡那霉素500mg／kg，2小时后静脉注射速尿50mg／kg，对照组4只豚鼠。于药物注射后7天行听觉脑干诱发电位（ABR）仪检测试验组和对照组豚鼠耳蜗听功能，对阈值大于95dBSPL豚鼠行耳蜗铺片免疫荧光染色和常规切片观察，并对耳蜗进行扫描电镜观察。结果实验组25只豚鼠中有13只豚鼠ABR测试阈值高于95dBSPL，将这些致聋豚鼠作为观察对象，发现毛细胞和神经纤维明显受损，以耳蜗第一、二回损伤明显。结论卡那霉素和速尿联合用药可导致豚鼠毛细胞和神经纤维严重受损，是建立耳聋模型的一种快速而有效的方法。