颞骨火棉胶切片原位杂交技术及线粒体基因缺失定位研究

目的 发展基于颞骨火棉胶切片的突变基因定位方法。方法 选取5例PCR证实具有线粒体DNA(mtDNA)4977缺失的老年性聋颞骨切片,5例对照颞骨切片无mtDNA4977缺失。应用作者首先发展的颞骨火棉胶切片原位杂交技术进行mtDNA4977缺失的定位研究。结果 5例PCR证实具有mtDNA4977缺失的老年性聋颞骨切片中,3例经原位杂交获得代表mtDNA4977缺失的阳性信号,分布于耳蜗、内听道的神经细胞及神经纤维中。5例对照颞骨中未见阳性杂交信号。结论 耳蜗是由多种不同形态、功能的细胞组成,火棉胶切片的原位杂交技术可以定位特殊基因或基因变化于耳蜗内特定的细胞群,为在分子细胞水平研究聋病的发病机制提供了有力的工具。     

宫内生长迟缓对大鼠肾脏血管紧张素Ⅱ受体 mRNA表达的影响

目的 探讨宫内生长迟缓（IUGR）对大鼠肾脏血管紧张素Ⅱ受体mRNA表达的影响，为研究发育程序化成年疾病的发病机制提供实验依据。方法 SD大鼠，孕期全程低蛋白（6％蛋白）营养，建立IUGR大鼠模型。选取IUGR雄鼠作为研究对象。实时定量聚合酶链反应（PCR）检测生后1d和4周龄大鼠肾组织血管紧张素Ⅱ-1型受体（AT，）亚型AT1A，小AT1B及血管紧张素Ⅱ-2型受体（AT2）mRNA含量；放免法测定4周龄大鼠血浆中肾素、血管紧张素Ⅱ和醛固酮浓度。结果 与对照组相比，IUGR新生鼠肾脏AT1A、AT2 mRNA表达明显下调（P均〈0．05）。4周龄时，IUGR大鼠肾脏AT2 mRNA表达仍明显降低（P〈0．05）；AT1A mRNA表达虽较对照组增加，但差异无统计学意义（P〉0．05）；血浆中肾素、血管紧张素Ⅱ和醛固酮浓度两组之间无统计学意义（P〉0．05）。结论 肾内血管紧张素Ⅱ受体的异常表达可能是IUGR影响肾脏发育和引起高血压的分子机制之一。     

卡那霉素和速尿联合用药后豚鼠耳蜗听功能研究

目的 探讨卡那霉素和速尿联合用药对豚鼠耳蜗听功能的影响。方法实验组50只豚鼠肌肉注射卡那霉素500mg／kg，同时静脉注射速尿40mg／kg，空白对照组4只豚鼠。于药物注射3天（25只）和7天（25只）后行听觉脑干诱发电位（auditory brainstem response，ABR）．听神经复合动作电位（compound action potential，CAP）及耳蜗微音电位（cochlear microphonic，CM）检测，观察所有动物的中耳结构，对实验组和对照组豚鼠耳蜗听功能进行统计学分析。结果观察所有实验组豚鼠的中耳结构可见鼓膜完整．无充血或者穿孔．听骨链完整．听骨结构无破坏或者移位。豚鼠用药后听阈的个体差异较大，用药后同一频率CAP阈值低于ABR阈值，有的豚鼠用药后CAP阈值轻度提高，但是CM明显异常；将听阈〉95 dB SPL的豚鼠分为用药3天组和用药7天组，发现用药3天组各频率（2kHz，4kHz，8kHz和16kHz）比正常对照组同一频率的听力阈值明显提高（方差分析P〈0．01，差异有显著性），而用药3天组和用药7天组各频率（2kHz，4kHz，8kHz和16kHz）比较阈值没有差别（方差分析P〉0．05，差异没有显著性），用药后较高频率（8kHz，16kHz）的听力损失大于较低频率（2kHz，4kHz）。结论卡那霉素和速尿联合用药后3天可使豚鼠听功能严重受损，因此，卡那霉素和速尿联合用药是建立耳聋模型的一种快速而有效的方法。     

两种神经营养因子对噪声性毛细胞损伤协同防护作用的观察

目的观察胶质细胞源性神经营养因子(glialcellline-derivedneurotrophicfactor,GDNF)和神经营养素-3(neurotrophin-3,NT-3)对噪声引起毛细胞肌动蛋白损伤的协同防护作用.方法采用改进的豚鼠耳蜗微渗透压泵慢性灌注技术,将GDNF和NT-3缓慢注入12只豚鼠左侧内耳,以左耳灌注人工外淋巴液的9只豚鼠为对照,检测噪声暴露后豚鼠听功能和耳蜗毛细胞缺失率的变化.结果动物术后14d(噪声暴露后10d)实验组手术耳和非手术耳的脑干诱发电位反应(auditorybrainstemresponses,ABR)阈值低于对照组(秩和检验,下同.P＜0.05,P＜0.01),毛细胞表皮板和纤毛肌动蛋白荧光染色计数发现实验组手术耳和非手术耳外毛细胞缺失率均低于对照组(P＜0.001,P＜0.01),内毛细胞缺失率也均低于对照组(P＜0.01,P＜0.01).结论GDNF和NT-3对噪声性聋具有较好的协同防护作用.     

逍遥散灵活新用

通过数则典型病案,介绍笔者临床中对于逍遥散的应用经验.逍遥散属于平调肝脾之方,方中各药配伍气血兼顾,考虑全面,然而由于各药力量平均,药性稍显平和,临床应用治疗慢性疾病有病重药轻、药力分散之弊.故在原方基础之上,变更方中某些药物剂量灵活应用,起到了主次分明、药精力专的功效.     

慢性应激大鼠海马组织Stk32c基因表达及逍遥散干预的表观遗传学机制初探

目的通过中药复方逍遥散干预慢性应激损伤模型大鼠,对Stk32c基因表达进行验证,并对其基因启动子区DNA甲基化修饰变化进行探索,以期从表观遗传学角度阐释慢性应激损伤机制及逍遥散对慢性应激损伤的干预机制。方法90只雄性Wistar大鼠随机分为空白对照组、慢性应激模型组、逍遥散治疗组三组,每组30只。除空白对照组外,其他两组造模采用Cart多相慢性应激大鼠模型并加以改进,逍遥散治疗组在造模同时每只每天给予逍遥散2 ml,连续造模21天。采用RT-PCR一步法及免疫组织化学染色法测定各组大鼠海马区Stk32c基因及其蛋白表达情况,采用Sequenom Mass ARRAY法检测Stk32c基因启动子区甲基化水平。结果慢性应激损伤大鼠海马Stk32c mRNA及其相应蛋白表达较空白对照组显著下调,其基因启动子区某些特定位点(特别是引物方案2的CpG_6、CpG_27.28、CpG_39位点)的甲基化程度明显高于空白对照组。逍遥散治疗能够明显逆转慢性应激引起的Stk32c mRNA及其相应蛋白的表达变化,相应位点DNA甲基化程度较慢性应激模型组显著下调。结论 Stk32c基因启动子区特定位点甲基化程度升高可能是慢性应激造成大鼠海马神经元损伤的机制之一,逍遥散可能通过干预相应区域DNA甲基化修饰发挥抗慢性应激损伤作用。     

化合物209对人结直肠癌细胞HT-29的体内和体外作用(英文)

化合物209是一个新合成的氨基二硫代甲酸酯类化合物,它在体外水平可以抑制肿瘤细胞的增殖,但是化合物209的体内抗肿瘤作用及其抗肿瘤机制并不明确。本文探究了化合物209对人结直肠癌细胞HT-29的作用并初步探讨了相关机制。体外研究表明,化合物209可以显著抑制HT-29细胞的增殖;体内研究结果表明,化合物209可以显著抑制裸鼠HT-29移植瘤的生长,但是对裸鼠体重和白细胞无影响。流式细胞分析实验结果表明,化合物209可将HT-29细胞阻滞于细胞周期的G1期。同时,化合物209能上调体外培养HT-29细胞中p27,cyclin E,CDK2,cyclin D1和CDK4的表达。在体内瘤组织中上述蛋白表达情况与体外实验结果一致。这些结果说明,化合物209具有较好的抗肿瘤活性,其抗肿瘤作用与细胞周期阻滞及其相关蛋白的表达变化有关。     

遗尿报警器治疗特定亚型儿童单一症状遗尿症疗效观察

目的：观察遗尿报警器治疗小于年龄相应膀胱容量而无夜尿增多的单一症状遗尿症(MNE)的疗效。方法15例诊断为小于年龄相应膀胱容量而无夜尿增多的MNE患儿应用遗尿报警器治疗,并辅以睡前2 h限制饮水等基础治疗,每月复诊随访。以初次持续治疗2~3个月,连续14个夜晚无遗尿为治疗成功;停止治疗后又出现2周内遗尿≥2次为复发,并再次应用遗尿报警器治疗和随访。结果患儿男9例、女6例,平均年龄(9.76±4.24)岁(6~15岁)。第1个疗程结束时,13例治疗成功,2例因家庭配合度不佳,改用去氨加压素治疗。随访期内,5例复发,再次应用遗尿报警器治疗,4例治疗成功并未再复发,另1例治疗失败。总治愈率80%。结论遗尿报警器治疗小于年龄相应膀胱容量而无夜尿增多MNE有效。     

真武汤对慢性充血性心力衰竭模型大鼠ET、CGRP水平的影响

目的:探讨真武汤抗心力衰竭的疗效及作用机制。方法:用Wistar大鼠50只,随机分正常对照组、心衰模型组、卡托普利组、真武汤组,除正常对照组外均采用盐酸阿霉素(ADR)损伤大鼠心肌致心力衰竭,各组分别给药治疗后,测定大鼠血清中内皮素(ET)、降钙素基因相关肽(CGRP)水平,并应用光镜观察心肌组织的病理变化。结果:与正常对照组比较,心衰模型组大鼠血清CGRP水平显著降低,ET水平明显升高;与心衰模型组比较,真武汤及卡托普利均能降低心衰模型大鼠ET水平,升高CGRP水平(P<0.05);光镜结果显示真武汤组心肌细胞损伤程度明显轻于心衰模型组。结论:真武汤能调节改善心衰模型大鼠的神经内分泌功能,拮抗过度激活的神经内分泌系统。