乙型肝炎病毒感染模型应用新进展

乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）感染具有明显的种属特异性，是目前知道的最小的嗜肝DNA病毒，在易感宿主细胞内易于附着、侵入和复制，并可长期持续感染。然而，HBV的易感宿主范围很狭窄，仅限于人、黑猩猩等灵长类动物，故很难在普通实验动物中建立疾病模型。因此，建立适合于HBV研究、简单易得的实验模型一直是研究者们追求的目标。在过去的20多年间，国内外学者陆续建立了多种相应的嗜肝DNA病毒模型，但尚无一个理想的模型可准确地代表人HBV感染的所有特征。自转基因技术出现以后，HBV转基因小鼠的研制使HBV研究取得了很大的发展。近年来，人-鼠嵌合模型的研究成为热点。本文将从细胞模型和动物模型两方面对模型在HBV研究中的应用作系统综述。     

慢性乙型肝炎基因治疗策略研究进展

慢性乙型肝炎是由乙型肝炎病毒（Hepatitis Bvims，GNV）感染引起的、病死率较高的一种慢性传染性疾病，易发展为肝硬化、肝癌。据资料显示，全球约有3．5亿慢性乙肝患者，我国是慢性乙肝高发区，约有1．3亿患者。目前，基因治疗作为一种全新的治疗理念越来越受到人们的关注。基因治疗是指将外源性的有特定功能的目的基因（DNA或RNA片段），     

阳离子脂质体介导双靶区反义锁核酸抗病毒疗效研究

目的 探讨HBV S、C双靶区反义锁核酸(LNA)的抗病毒疗效.方法 设计合成互补于HBV S、C基因翻译起始区的反义LNA与脂质体混合,经尾静脉注入小鼠体内,用时间分辨免疫荧光分析法定量检测小鼠血清HBsAg;荧光PCR定量检测血清HBV DNA含量;RT-PCR检测肝组织HBV C-mRNA的表达;免疫组化法检测肝细胞HBsAg、HBcAg的表达;自动生化分析仪检测血清白蛋白(Alb)、ALT、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)等指标;小鼠肝脏、肾脏进行常规病理切片并HE染色,观察反义LNA对小鼠脏器的影响.结果 血清HBsAg的表达,注射后第1、3、5天,单靶区S组的抑制率分别为23.3%、37.9%和48.7%;单靶区C组分别为21.2%、32.6%和40.7%;双靶区SC组分别为30.6%、61.2%和72.8%.血清HBV DNA,注射后第1天开始下降,双靶区SC组的DNA下降最明显,其第1、3、5天分别下降了18.5%、36.1%和52.9%.5 d后,单靶区S组、单靶区C组和双靶区SC组小鼠肝细胞HBsAg、HBcAg的表达显著低于对照组.小鼠肝肾功能及组织学未见异常.结论 HBV S、C双靶区反义LNA对HBV转基因鼠抗病毒有显著作用,且抑制作用优于单靶区反义LNA.     

肺癌组织中miRNA-449a的表达及其临床意义

目的探讨miRNA-449a在肺癌细胞中的表达及其临床应用价值。方法收集右江民族医学院附属医院2011年1月1日至2013年6月30日收治的58例肺癌患者作为研究对象,采用逆转录荧光定量聚合酶链反应检测miRNA-449a在肺癌组织和癌旁正常组织中的表达量,分析miRNA-449a与临床病理特征的关系,并采用荧光电子显微镜观察miRNA-449a模拟物对体外培养肺癌细胞株95D细胞凋亡的影响。结果鳞癌组和腺癌组miRNA-449a平均表达量均明显低于癌旁正常对照组(t=6.712,P0.05;t=4.572,P0.05),其相对表达量与瘤体大小(U=78.412,P=0.012)有关,与患者年龄(U=920.000,P=0.615)、性别(U=800.000,P=0.215)、病理类型(χ2=4.221,P=0.155)和临床分期(U=754.000,P=0.009)无关。与阴性对照组比较,miRNA-449a模拟物可明显促进肺癌细胞的凋亡,且呈剂量依赖性。结论 miRNA-449a在肺癌组织中呈低表达,可诱导肺癌细胞凋亡,发挥抑癌基因的作用,可能成为肺癌早期诊断与治疗的新分子靶标。     

锁核酸核酶抑制丙型肝炎病毒5'非编码区内部核糖体进入位点的基因表达

锁核酸核酶(LNAzyme)是在脱氧核酶(DNAzyme)的两个结合臂上引入1个或多个锁核酸单体构建而成的新型核酸酶[1].锁核酸(LNA)是一种新型的带双环状结构的寡核苷酸衍生物,具有稳定性好、分子杂交能力强、抗核酸酶降解能力强和无毒性等优势[2-3].LNA的引入极大增加了LNAzyme与底物RNA的杂交亲和力,增强了切割反应的酶促活力,使LNAzyme较相应的DNAzyme切割效率明显提高.针对HBV S基因的反义LNA能有效抑制病毒的表达[4].本研究针对HCV 5'非编码区(NCR)内部核糖体进入位点(IPES)设计合成LNAzyme,以HepG2.9706为对象,观察LNAzyme对病毒复制与表达的抑制作用,旨在为丙型肝炎治疗寻找专一性强、高效的新型分子药物.     

655例儿童肺炎支原体感染情况分析

目的分析肺炎支原体(MP)在儿童呼吸道疾病中的感染状况以及与患儿性别、年龄、季节和临床特征等的相关性。方法回顾性分析2013年1~12月因呼吸道感染住院的655例儿童的临床资料。结果 MP抗体检测阳性率为48.09%;女童多于男童,3岁以上儿童易感染,冬春季为MP感染高发季节;年龄越大,MP抗体阳性率越高,肺炎支原体肺炎(MPP)及大叶性肺炎的比例也越高,差异有统计学意义(P0.05);年龄越小,白细胞计数越高,C反应蛋白(CRP)及中性粒细胞升高的比例也越高,差异有统计学意义(P0.05)。结论 MP是3岁以上儿童呼吸道感染中的常见病原菌,冬春季高发。感染MP后,年龄越大MP抗体阳性率越高,且易罹患肺炎;年龄越小,白细胞计数越高,CRP及中性粒细胞升高的比例也越高。     

反义锁核酸封闭c-myc第二外显子翻译起始区对肝癌细胞凋亡的影响

目的:探讨针对c-myc第二外显子翻译起始区的反义锁核酸对肝癌细胞活力和凋亡的影响。方法:设计合成能特异性封闭c-myc基因第二外显子翻译起始区的反义寡核苷酸、硫代寡核苷酸和锁核酸,分别以阳离子脂质体介导转染HepG2细胞,采用RT-PCR检测细胞内c-Myc的mRNA表达变化;Western blot检测细胞内cMyc的蛋白表达变化;流式细胞技术检测细胞凋亡情况;MTT法检测反义锁核酸的细胞毒性作用。结果:转染第5天后,反义锁核酸组c-Myc的mRNA相对表达量为0.335±0.016,明显低于对照组(P0.05);c-Myc蛋白相对表达量为0.448±0.037,也明显低于对照组(P0.01);凋亡细胞比例为32%±6%,显著高于对照组(P0.05)。结论:针对c-myc第二外显子翻译起始区的反义锁核酸能有效促进肝癌细胞的凋亡。     

毛细支气管炎后早期干预的疗效分析

目的探讨布地奈德和孟鲁司特在干预毛细支气管炎（简称毛支炎）后反复喘息的疗效。方法在我科住院并确诊为毛支炎的婴幼儿,在其治愈出院后随机抽签分为对照组23例和治疗组27例,对照组出院后仅随访,不做任何干预治疗;治疗组则予布地奈德每次0.5 mg,2次/d,4周后改为1次/d,高频雾化吸入;孟鲁司特口服,4 mg/d,共治疗8周,两组共随访1年。结果 1年内对照组发生喘息16例（69.6%）,喘息≥3次的有8例（34.8%）;治疗组发生喘息11例（40.7%）,≥3次的3例（11.1%）,经比较（Х^2=4.154,P〈0.01）,差异有统计学意义。结论布地奈德和孟鲁司特能减少毛支炎后的反复喘息,疗效确切,值得临床推广。     

尿沉渣细菌定量计数与尿液细菌培养比较及其在筛查泌尿系统感染中的临床应用

尿液细菌培养检查对于泌尿系统感染的诊断有非常重要的临床价值,但是常规细菌培养需要3d才出检测结果,且80％以上为阴性,故不能及时、准确的为临床提供诊疗依据。为了探讨尿沉渣细菌定量计数能否作为尿路感染的一项快速筛查指标,我们利用UF-1000i型全自动尿沉渣定量分析仪对尿路感染患者的中段尿液标本进行细菌定量计数,并与尿液细菌培养的结果比较。