临床与断层解剖学课程对医学专业硕士学位培养的作用

正教育部临床医学硕士专业学位(专硕)培养方案要求学生全部时间不脱离临床工作~([1-2]),所承担的课题应该在临床实践中完成。因此学生必须具备在临床中有发现和解决问题的能力~([3-5]),并通过临床实践完成毕业课题。如何要让专硕生既有诊断和治疗疾病的水平,而且还要能够分析疾病的发病规律和撰写原创性论文的水平。要培养具有这方面能力是由多种因素决定的,其中课程训练也是影响因素之一。目前专硕课程与科学型临床医学硕士学位(学硕)的课程设置没有明显差异性,专硕课程没有重点引导学生如何在临床实践中创新~([6-7])。为此本校设置了     

FLT3及FLT3-ITD突变体在HEK293T细胞的表达和纯化北大核心CSCD

目的构建fms相关酪氨酸激酶3(FLT3)及FLT3-内部串联重复序列(FLT3-ITD)突变体的真核表达载体,在HEK293T细胞中稳定表达并通过免疫沉淀技术对蛋白进行纯化。方法从正常人及FLT3-ITD阳性急性髓系白血病患者骨髓干细胞中提取RNA,反转录为cDNA,使用带有流感病毒血凝素(HA)标签序列的特异性引物,采用PCR扩增出人FLT3及FLT3-ITD突变体编码区全长并克隆到CD530A-T2A-GFP载体上。重组的FLT3及突变体FLT3-ITD表达质粒,通过脂质体polyJ et转染到HEK293T细胞进行表达。使用HA抗体结合微珠沉淀带HA标签的FLT3及FLT3-ITD突变体蛋白。然后,通过HA肽段将蛋白竞争洗脱下来,洗脱下来的蛋白经银染染色。结果 FLT3及FLT3-ITD突变体全长编码序列成功构建到CD530A-T2A-GFP载体上,Western blot法及聚丙烯酰胺凝胶银染法成功检测到FLT3及FLT3-ITD突变体蛋白的表达、纯化。结论在HEK293T细胞中成功表达并纯化FLT3及FLT3-ITD突变体蛋白。     

高转移肺癌细胞株95 D中特异表达的C3orf1基因分析

目的 进一步了解肺癌转移的分子机制,筛选高转移肺癌中差异表达的基因。方法 利用荧光差异显示技术（DD—PCR）获得差异片段,对这些片段进行克隆和序列分析。通过在GenBank中同源性检索,查找差异片段相对应的同源基因。利用定量PCR检测验证该基因表达的差异性,并对该基因的结构进行预测。结果 通过DD—PCR得到9个差异片段,其中一个片段对应于C3orf1基因。定量PCR验证的结果表明,C3orf1基因在高转移肺癌中的表达量显著高于其他被测试的5种肿瘤细胞。该基因的读码框长858bp,编码285个氨基酸,分子量约32200。蛋白质结构预测分析发现,该基因含有7个类似表皮生长信号区,N端有一含有24个氨基酸的信号肽,并且还可能有3个2S-2Fe铁氧化还原蛋白铁硫结合信号区,2个维持自身静态平衡的VWFC信号区和2个硫解酶活性区。结论 C3orf1基因在高转移肺癌中异常表达,可能是分泌型的生长因子类蛋白,刺激细胞的生长。     

实时定量PCR在干细胞及肿瘤研究中的应用

实时定量PCR(real-time quantitative PCR)技术实现了PCR从定性到定量的飞跃,而且与常规PCR相比具有特异性更强、有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点,已广泛用于生物医学及临床医学等多个领域。而在干细胞研究和肿瘤诊断的研究中,国内外文献报道较少,本文就其中方法原理、研究进展及其在干细胞和肿瘤研究方面的应用作一简要综述。     

血小板活化因子反相高效液相色谱法测定及其在老年性疾病中的应用

目的 建立血小板活化因子(PAF)的反相高效液相色谱(rHPLC)检测法,与生物学检测法比较,探讨其在老年脑梗死、高血压、冠心病等疾病中的意义。方法 采用rHPLC对100例健康对照者、23例脑梗死、28例高血压病、65例冠心痛患者血PAF进行分析。结果 rHPLC法与生物学法相关性较好,操作简便,重复性好,灵敏度高,干扰因素少。脑梗死、冠心痛患者血PAF值显著高于参考值（P＜0．01);高血压病组与对照组比较,无显著性差异(P＞0．05)。结论 rHPLC法测定PAF更具可靠性,更能正确地反映血中PAF水平;有助于进一步推动PAF的临床与基础研究。     

马齿苋治疗蜂螫伤

近年来我们用新鲜马齿苋治疗大黄蜂螫伤患者100例·效果显著。马齿苋为马齿苋科值物(Portulaca oleraceal),地上新鲜全草入药。人们根据它的值物形状及生长特点又称它为“马齿菜”,“马苋菜”、“长寿草”、“瓜仁莱”等,药物来源极为丰富,可就地     

腰骶部皮下肠源性囊肿1例

肠源性囊肿（enterogenous cysts）是一种少见的先天性疾患,好发于青少年。近期我科收治1例,经手术及病理检查证实,现报告如下。     

氯氮平对雄性C57BL/6小鼠胰腺β细胞凋亡的影响

目的:探讨氯氮平对雄性C57BL/6小鼠胰腺β细胞凋亡的影响。方法:实验于2004-03/09在南京医科大学第一附属医院中心实验室完成。选择清洁级雄性C57BL/6小鼠63只,体质量(20±2)g,由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供[许可证号:SCXK(沪)2003-0003]。随机分为空白组21只、氯氮平4mg/kg组21只、氯氮平20mg/kg组21只,各组小鼠的体质量和基础血糖值无显著差异(P>0.05)。所有动物每7只分笼饲养于光照12h(7Am～7Pm),相对湿度45%的普通设施中,普通全价鼠饲料喂养,自由进食及饮水。①模型制作:氯氮平充分研磨后加入蒸馏水,配成浓度为2g/L和0.4g/L的悬浊液,灌胃前充分匀。氯氮平4mg/kg组灌胃0.4g/L的悬浊液0.2mL,氯氮平20mg/kg组灌胃2g/L的悬浊液0.2mL,空白组灌胃同样剂量的蒸馏水。按发病不同时间每组再分为3组,各7只,超急性期组灌胃1次;急性期组灌胃1次/d,共7次;慢性期组灌胃1次/d,共28次。②标本的处理:禁食12h(8Pm～8Am)后,超急性期组在第1次灌胃后3h,急性期组(1周)和慢性期组(4周)灌胃1次/d,最后一次灌胃后3h,摘眼球取血后颈椎脱臼处死小鼠,立即取小鼠的胰腺置体积分数为0.1的中性甲醛液中固定24h,常规制作石蜡切片,厚4μm。采用苏木精-伊红染色,光镜下观察胰岛炎的情况。应用原位末端转移酶标记法染凋亡细胞,用链霉亲合素-生物素化过氧化物酶复合物免疫组织化学法染β细胞,进行β细胞凋亡计数。结果:纳入动物63只,均进入结果分析。①苏木精-伊红染色显微镜观察显示:空白对照组、氯氮平4mg/kg组、氯氮平20mg/kg组小鼠胰岛均位于胰腺外分泌部之中,其岛形丰满,轮廓清晰,胰岛细胞分布均匀,均未见淋巴细胞浸润。②免疫组织化学染色显微镜观察显示:空白对照组、氯氮平4mg/kg组、氯氮平20mg/kg组小鼠胰岛轮廓清晰,胰岛细胞分布均匀,内外分泌部界限清楚,大量的β细胞胞浆呈棕黄色的胰岛素阳性表达,未见β细胞凋亡,可见少量散在的胰腺腺泡细胞凋亡。结论:氯氮平对胰腺β细胞没有明显的毒害作用,不诱导β细胞的凋亡。     

农药中毒后未发生多器官功能衰竭患者血清蛋白质、尿素氮、肌酐的变化

目的探讨急性有机磷农药中毒后未发生多器官功能衰竭（NMOF）患者1周内血清蛋白质、尿素氮、肌酐的变化。方法用全自动罗氏生化分析仪检测急性有机磷农药中毒后NMOF患者血清蛋白质、尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）浓度，观察其1周内的变化。结果急性有机磷农药中毒后NMOF患者从第2天开始TP、ALB明显下降，至第5天时下降至最低，第6天开始回升；Cr第2天升高，第3、4天开始出现波动，第5、6天明显下降；BUN1周内未发生明显变化。结论急性有机磷农药中毒后NMOF患者TP、ALB的明显下降和Cr的波动性下降，主要与饮食的限制及中毒后应激反应引起的蛋白质代谢改变相关；因中毒后NMOF，故BUN未发生明显变化。     

草酸钙结晶肾损伤模型小鼠肾小管上皮细胞转分化的实验研究

目的:研究乙醛酸盐诱导所致草酸钙结晶肾损伤模型小鼠中肾小管上皮细胞转分化的发生情况。方法:选择C57BL/6J小鼠连续腹腔注射乙醛酸盐建立草酸钙结晶肾损伤模型,应用HE染色及冯库萨染色分别观察肾组织结构变化及钙盐沉积情况,并应用免疫荧光双染、Western-blot观察肾小管上皮细胞间充质转分化(epithelial mesenchymal transtion,EMT)的情况。结果:随着连续腹腔注射乙醛酸盐时间的延长,小鼠肾组织HE染色结果显示,近端肾小管管腔逐渐扩张,且肾小管上皮细胞逐渐出现肿胀及变形,基底膜逐渐裸露;冯库萨染色结果显示近端小管腔内黑色钙盐沉积逐渐增加;免疫荧光双染、Western blot结果均显示肾小管上皮标志E-cadherin及Pan-ck逐渐丢失,而间质标志α-SMA及Vimentin的表达则逐渐增加,Western blot检测结果显示随着乙醛酸盐干预的增强,Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(rho associated coiled coil forming protein kinase,ROCKI)表达也逐渐增加,且在干预第3天即达高峰。结论:乙醛酸盐诱导所致草酸钙结晶肾损伤模型早期即出现EMT,启动了肾间质纤维化的进程。