实时荧光定量PCR检测0139群霍乱弧菌研究

目的:利用荧光定量PCR技术,建立一种快速、准确、特异检测0139群霍乱弧菌的定量方法.方法:选取0139群霍乱弧菌糖基转移酶基因(LPSgt)作为检测的靶基因,设计引物和TaqMan探针,探针的两端均进行荧光标记.对PcR扩增体系进行优化,进一步评价实时荧光定量PCR方法的特异性、灵敏度、重复性后,对收集的临床样本进行鉴定.结果:本文所建立的实时荧光定量PCR方法可准确、特异的检测和鉴定0139群霍乱弧菌,其他菌株均无阳性结果产生;该方法的灵敏度可达到10 cfu/ml;定量检测的批间和批内的变异系数均小于5%;对85例临床样本进行评价,结果获得9例0139群霍乱弧菌阳性,与常规培养法结果完全一致.结论:本文建立的检测0139群霍乱弧菌实时荧光定量PCR方法快速、准确,结果可靠,实用性强,可对结果进行定量分析,为0139群霍乱弧菌的实验室诊断和现场流行病学调查提供了较好的分析手段.     

国内外艰难梭菌感染现状分析

艰难梭菌是一种革兰阳性厌氧芽孢杆菌,也是抗生素相关性腹泻的主要病原菌之一。近年来,由于高毒力菌株核糖体027型的出现,导致艰难梭菌感染在世界范围内的暴发和流行。目前,艰难梭菌分子流行病学研究进展迅速,不同地区的艰难梭菌具有不同的感染特点。北美和欧洲等发达国家的流行病学特征已经比较清楚,该菌在中国的研究起步较晚,但近几年的研究也初步呈现出中国艰难梭菌感染现状和分子特征。本文从艰难梭菌感染的临床表现、危险因素、国内外感染现状等角度进行综述,为后续进一步推进中国艰难梭菌感染防控及分子流行病学研究提供数据参考。     

多重荧光定量PCR甄别霍乱弧菌方法的建立

目的 利用多重荧光定量PCR技术,建立一种快速、准确、特异甄别霍乱弧菌的定量方法.方法 分别根据霍乱弧菌霍乱毒素A亚单位基因(ctxA)和糖基转移酶基因(LPSgt)作为检测的靶基因,设计引物和TaqMan-MGB探针,探针的5'端分别用FAM和VIC进行荧光标记,3'端标记MGB.优化PCR扩增体系,对多重实时荧光定量PCR方法的特异性、灵敏度、重复性评价,同时进行一定数量临床样本考核鉴定,与常规方法进行比较.结果 该方法可准确、特异地鉴定霍乱弧菌,同时能够甄别O139群霍乱弧菌.全部的霍乱弧菌用ctxA基因对应引物和探针检测均为阳性,其中只有O139群霍乱弧菌出现LPSgt基因阳性,其他菌株均无阳性结果.检测的灵敏度为2×102 cfu/ml.同时对收集的45例临床样本进行鉴定,结果显示10例为霍乱弧菌,其中O139群有4例,其余均为阴性结果,与常规鉴定方法一致.结论 研究建立的多重荧光定量PCR方法特异、灵敏、快速,可有效鉴定产毒霍乱弧菌及甄别O139群霍乱弧菌,可用于霍乱监测和防制工作中的实验室诊断.     

肠炎血清型沙门菌多重PCR检测方法的建立及应用

摘 要：目的 为临床确诊及基层实验室快速准确鉴定肠炎血清型沙门菌提供实验室支持,同时为沙门菌传统血清学鉴定方法提供技术补充。方法 根据沙门菌菌体抗原A/D1群基因、鞭毛抗原基因（fliC-HG）及肠炎沙门菌特异性基因片段（sdf I）设计引物,建立多重PCR体系并进行反应条件优化。对所建立的体系的特异性进行检测,并将该体系应用于浙江省2009-2010年分离的共计53株样本的检测。结果 建立并优化了肠炎沙门菌检测的多重PCR体系,该体系具有高特异性,可准确快速鉴定肠炎血清型沙门菌,也可区分A群及D群血清群的沙门菌,并能检测鞭毛抗原为HG的沙门菌,对实际样本检测符合率达100%。结论 该体系能正确鉴定肠炎血清型沙门菌,可作为沙门菌传统血清学分型的辅助方法,可弥补商品化血清质量层次不齐的缺陷。并为肠炎沙门菌的监测与实验室诊断提供了一种简单快速、重复性好的新方法。     

副溶血性弧菌引起食物中毒的病原学检测

目的对从食物中毒患者粪便标本以及可疑食物中分离到的病原菌,进行表型和毒力基因的鉴定以及同源性分析。方法参照食品卫生微生物学检验中副溶血性弧菌检验方法（GB／T4789．7—2008）,分离鉴定副溶血性弧菌。对检出的副溶血性弧菌做血清分型、耐药性、毒力基因（toxR、trh、tdh、tlh）的测定,并用脉冲场凝胶电泳（PulsedFieldGelElectrophoresis,PFGE）测定菌株的同源性。结果从3份食物标本和5份患者粪便标本中检出副溶血性弧菌8株,8株菌分属于不同的血清型。8株菌的生物学性状和药物敏感性试验一致。8株菌的toxR和tlh均阳性,trh均阴性,tdh为粪便标本均阳性,食物标本均阴性。8株菌共产生6种PFGE带型。结论此次食物中毒由副溶血性弧菌引起,但分离于粪便标本和分离于可疑食物标本的菌株之间,其PFGE带型比较分散,可能是由副溶血性弧菌多种O抗原群混合污染引起。     

氯吡格雷对人脐静脉内皮细胞全基因表达谱的影响及生物信息学分析

本研究探讨氯吡格雷对体外培养人脐静脉内皮细胞(EA.hy926)基因表达谱的影响及作用的分子机制。将10μmol/L氯吡格雷与人脐静脉内皮细胞株共培养48 h,运用Affymetrix U133 plus2.0全基因组表达芯片检测氯吡格雷对人脐静脉内皮细胞基因表达谱的影响,应用分子注释系统MAS3.0软件进行聚类分析,实时定量RT-PCR验证基因表达谱结果。结果表明:氯吡格雷作用内皮细胞48 h后,基因芯片分析筛选出差异表达大于1.5倍的基因508个,其中上调基因139个,下调基因369个,包括蛋白结合、转录因子活性、锌离子结合、DNA依赖的转录的调节、转录、RNA剪接等相关基因,RT-PCR验证结果与基因芯片结果一致。结论:氯吡格雷在基因水平通过多条通路调节内皮功能。     

电脑红外线扫描诊断乳腺疾病3262例分析

目的 探讨电脑红外线扫描诊断乳腺疾病的临床价值。方法 应用电脑红外线乳腺诊断仪检查乳腺疾病3262例。结果 红外线诊断乳腺癌经术后病理证实或细胞学检查：其中乳腺癌80例,诊断符合率90%,乳腺癌可疑5例,不符合2例,乳腺良性病变符合率88.9%。结论 红外线扫描具有无创伤、科学性强等优点,在临床上具有一定的诊断价值。     

新疆子午沙鼠尿液采集方法的建立及尿液部分生化指标的测定

目的 建立子午沙鼠尿液采集方法,测定分析野生子午沙鼠尿液部分生化和电解质指标,并与SD大鼠尿液生化指标进行比较.方法 在实验室内适应性饲养野生子午沙鼠3个月,采用自制尿液收集装置采集40只子午沙鼠和40只SD大鼠24 h尿液,用于尿液部分生化与电解质指标测定.结果 自制装置可成功收集子午沙鼠和SD大鼠24 h尿液.子午沙鼠24 h的尿液量为3 ～ 3.5 mL,1.5月龄SD大鼠为8～ 10 mL.肉眼观察,子午沙鼠和SD大鼠的尿液多为黄色、透明、有氨味.子午沙鼠尿液pH为7.80±0.40;尿比重为1.011±0.005;SD大鼠尿液相应数值为7.12±0.03和1.018±0.003.子午沙鼠和SD大鼠的生化指标大多为阴性,但有个别动物样本有不同程度的阳性.子午沙鼠尿液电解质指标在捕获地区间和性别间均未见明显差异(P＞0.05).结论 本文建立的尿液采集方法和测定结果为子午沙鼠实验动物化和相关研究提供基础资料.     

低位水囊与缩宫素引产对足月妊娠产妇分娩方式及 新生儿的影响

目的 比较低位水囊与缩宫素引产对足月妊娠产妇分娩方式及新生儿的影响.方法 选取80例足月妊娠产妇,随机分为对照组与观察组,各40例.对照组采用缩宫素引产,观察组采用低位水囊引产.比较两组引产效果、分娩方式以及新生儿评分.结果 对照组产妇总有效率(75.00%)明显低于观察组(95.00%),差异有统计学意义(P<0.05);对照组产妇阴道分娩率(70.00%)明显低于观察组(90.00%),差异有统计学意义(P<0.05);对照组新生儿Apgar评分在>7分所占比例(80.00%)明显低于观察组(95.00%),差异有统计学意义(P<0.05).结论 与缩宫素引产相比,低位水囊引产对足月妊娠产妇的引产效果确切,能显著提高引产成功率,降低剖宫产发生率,且不影响新生儿健康,易操作,具有较高的临床应用价值.