槟榔碱抗动脉粥样硬化分子机制的研究

目的　研究槟榔碱抗高血脂诱发大鼠动脉粥样硬化作用的分子机制。方法　采用高血脂诱发大鼠动脉粥样硬化模型 ,通过检测血液及血管组织中重要的动脉粥样硬化相关因子的表达 ,分析槟榔碱抗动脉粥样硬化的分子机制。结果　槟榔碱可促进NO释放 ,提高eNOS蛋白和mRNA的表达 ,降低血浆IL 8水平 ,抑制粘附分子ICAM 1及趋化因子IL 8的受体CXCR 2和MCP 1mRNA的过度表达。结论　槟榔碱上述作用特点可能与其抗动脉粥样硬化作用相关。     

从噬菌体抗体库中筛选血管内皮细胞新型嘌呤受体功能抗体的研究

目的筛选鉴定血管内皮细胞新型嘌呤受体功能性抗体,为进一步研究新型嘌呤受体提供标志物。方法大鼠血管内皮细胞蛋白质免疫BALB/c小鼠,采用噬菌体抗体库技术构建小鼠抗大鼠血管内皮细胞的单链噬菌体抗体库。利用新型嘌呤受体在主动脉内皮细胞表达而在血管平滑肌细胞不表达的特点,先用主动脉内皮细胞进行阳性筛选,再用血管平滑肌细胞进行阴性筛选,从噬菌体抗体库中富集主动脉内皮细胞特异抗体。对筛选到的抗体经可溶性表达后,采用离体血管环功能试验,筛选新型嘌呤受体特异单链抗体。采用免疫组化实验对筛选到的抗体进行鉴定。结果经过4次免疫后,小鼠血清抗内皮细胞蛋白的IgG效价为1∶16000,通过噬菌体表面呈现,得到小鼠抗大鼠内皮细胞免疫噬菌体抗体库容量为8×106。4轮主动脉内皮细胞阳性筛选及大鼠血管平滑肌细胞阴性筛选富集到约2500株主动脉内皮细胞特异抗体,可溶性表达后,在离体血管环上,经过4轮的逐级淘筛得到一株影响腺苷诱发NO依赖性血管收缩反应的功能性抗体ScFv-B,其抑制率为83.4%±21.6%。免疫组化鉴定此抗体与内皮细胞特异结合,功能性鉴定此抗体对腺苷诱发的肠肌收缩反应无影响,初步认为此抗体是新型嘌呤受体特异性功能抗体。结论本研究通过噬菌体抗体库的构建及抗体筛选和鉴定,得到了新型嘌呤受体特异性功能抗体ScFv-B,为进一步采用表达文库筛选的方法克隆新型嘌呤受体基因提供了良好的工具。     

两种制备方法的桃花止泻冲剂的生物热动力学比较研究

目的:对两种制备方法的桃花止泻冲剂进行生物热动力学比较研究,以评价其生物活性差异.方法:制备桃花止泻冲剂的粗粉制剂和微粉制剂,采用微量热法测定大肠杆菌在桃花止泻冲剂粗粉制剂和微粉制剂的水溶液作用下的生物热谱曲线,获得相应的生物热动力学参数,评价桃花止泻冲剂粗粉制剂和微粉制剂的生物活性差异.结果:随着桃花止泻冲剂的粗粉制剂和微粉制剂水溶液浓度的增大,大肠杆菌生长代谢的生长速率常数和最大产热功率值均减小,最高峰的出峰时间和生长抑制率均增大,表明细菌的生长受到抑制,且抑菌作用随着药物浓度的增大而增强.粗粉制剂的半抑制浓度值为35.9 mg/ml,而微粉制剂的半抑制浓度值为31.4 mg/ml.综合分析二者水溶液作用下大肠杆菌的生长代谢曲线和生物热动力学参数可知,桃花止泻冲剂微粉制剂的抑菌作用强于粗粉制剂.结论:微量热法可用于分析桃花止泻冲剂粗粉制剂和微粉制剂的生物活性差异,超微粉碎能增强桃花止泻冲剂的抑菌作用.     

高效液相色谱法测定板蓝根不同总酸部位中水杨酸的含量

目的建立高效液相色谱法测定不同pH值的板蓝根总酸部位中水杨酸的含量。方法采用pH梯度萃取法制备不同pH值的板蓝根总酸样品;并用高效液相色谱法,ODS-C18色谱柱（250mm×4.6mm,5μm）,流动相为乙腈-0.2%磷酸水溶液系统,流速为1.0mL·min^-1,检测波长：236nm,线性梯度洗脱,测定不同总酸部位中水杨酸的含量。结果水杨酸浓度在2.13～42.5μg·mL^-1与峰面积线性关系良好,r=0.9993。不同pH值的总酸部位中水杨酸含量分别为：0.00014%、0.000169%、0.00014%、0.00090%、0.00035%、0.00046%,RSD分别为1.3%、1.1%、1.2%、1.3%、1.1%、1.4%,平均加样回收率（n=9）为100.05%,RSD为1.0%,以pH2～3总酸中水杨酸含量为最高。结论该分析方法简便、准确、重现性好,可用于板蓝根不同pH值的总酸部位中水杨酸含量的测定。     

高效液相色谱法测定桃花止泻冲剂中6-姜酚的含量

目的采用高效液相色谱法测定桃花止泻冲剂中6-姜酚的含量。方法色谱柱为Kromasil ODS-C18柱（250mm×4．6mm，5μm），流动相为乙腈0．1mol·L^-1磷酸水溶液（25：75），检测波长为225nm。结果6-姜酚在浓度（C）0．3185～2．548μg·mL^-1与峰面积（Y）线性关系良好，回归方程为Y=127．9C-3．429，r=0．9993。平均加样回收率为99．7％，RSD为1．24％（n=6），桃花止泻冲剂中6-姜酚的平均含量为0．282mg·g^-1.结论该方法简便、快速、准确，可用于测定桃花止泻冲剂中6-姜酚的含量。     

HPLC法测定南北五味子中子甲素和五味子酯甲的含量

目的 建立HPLC法同时测定南北五味子中五味子甲素和五味子酯甲的含量.方法 十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,甲醇-水(77∶23)为流动相,流速1.0 mL/min,检测波长230 nm.结果 五味子甲素和五味子酯甲的线性范围分别为0.125～1.25μg和0.08～0.8μg,r分别为0.999 0和0.998 6,平均加样回收率分别为100.1%、100.0%(RSD为0.15%、0.28%.南五味子)和99.7%、101.2%(RSD为0.32%、0.67%.北五味子)(n=5).结论 该方法简便、专属、重现性好,可用于测定五味子中五味子甲素和五味子酯甲的含量.     

左金丸的研究进展

左金丸是朱丹溪的名方,由黄连和吴茱萸组成,对消化系统具有较广泛的药理作用,还能抑菌、镇痛、抗炎.现代应用非常广泛,尤多用于脾胃功能失调有关的疾病,还用于梅核气、不寐和小儿口腔炎等,均有较好疗效.对左金丸进行方义解析,并根据国内近20年左金丸的研究和应用情况,归纳和分析了其在药理作用、临床应用方面的文献.     

传代培养后主动脉内皮细胞差异表达基因cDNA序列的动脉粥样硬化相关性分析

目的筛选并分析传代培养后血管内皮细胞上表达下调基因。方法通过菌落原位杂交技术筛选用抑制消减杂交法构建的传代培养前后主动脉内皮细胞差异表达基因消减cDNA文库,用聚合酶链反应(PCR)方法进一步筛选出有插入片段的阳性克隆,将阳性克隆进行DNA测序和同源性比较分析,用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法对部分cDNA序列进行初步鉴定。建立兔动脉粥样硬化模型,采用RNA点杂交技术鉴定部分筛选到的cDNA序列的动脉粥样硬化相关性。结果从消减文库中随机挑取的750个白色克隆中筛选出88个阳性克隆,DNA测序获得61个cDNA序列,其中26个为已知牛基因序列,19个与已知人基因具有高度同源性,其他16个是未知基因片段,选择4个已知基因采用RT-PCR验证了基因筛选的可靠性。5个新基因具有动脉粥样硬化相关性。结论用抑制消减杂交法构建的传代培养前后主动脉内皮细胞差异表达基因消减cDNA文库富含动脉粥样硬化相关基因。     

高胆固醇饲养兔鹌鹑和大鼠诱发高血脂和动脉粥样硬化的特征

目的：比较高胆固醇饲养兔,鹌鹑和大鼠诱发高血脂和动脉粥样硬化的特点,方法：长时期以不同含量的高胆固醇饲料喂养兔,鹌鹑和大鼠,采用生化检验技术测定血浆总胆固醇和甘油三脂等血脂变化;采用病理组织学方法观察主动脉粥样斑块形成的特点,采用扫描和透射电镜技术观察血管内皮细胞的形态学变化。结果与结论：兔每天饲喂胆固醇0．4g,1个月后,血浆总胆固醇比基础饲料喂养时升高11．8倍,喂养2－3个月后,血浆总胆固醇仍稳定在此水平上;喂养3个月后,形成典型的动脉粥样硬化病理学改变;此规律在3批慢性实验中得到证实,若每天饲喂胆固醇量增至1．2g,血浆总胆固醇升高55．2倍,喂养1个月可形成主动脉粥样硬化的斑块,在相同条件下,鹌鹑每天饲喂胆固醇0．05g,血浆总胆固醇升高7．2倍,3个月后形成典型的动脉粥样硬化病理学改变,大鼠每天每公斤体重饲喂胆固醇0．4g,血脂升高1．3倍,1个月后,主动脉内皮细胞有单核细胞粘附,IL－8等细胞因子表达增高,发生动脉粥样硬化早期的变化。     

微量热法研究黄连与吴茱萸分煎后配伍时的药性差异

目的 从生物物理和生物化学的角度,探讨黄连与吴茱萸分煎后配伍时的药性差异。方法 黄连和吴茱萸药材用水分别煎煮,分煎液按相应的比例配伍,在100 ℃下水浴加热1 h,得单味药分煎后配伍所得的左金丸、甘露散、茱萸丸和反左金丸药液。采用微量热法,测定了痢疾杆菌在类方水提液作用下的生长代谢热谱曲线,获得相应的生物热动力学参数,结合文献报道,综合分析黄连与吴茱萸分煎后配伍时的药性差异。结果 黄连与吴茱萸分煎后配伍的药液之间存在稳定的药性差异。左金丸及类方均能不同程度地抑制痢疾杆菌的生长代谢过程,左金丸的抑制作用最强,反左金丸的抑制作用最弱,4方抑菌作用强弱顺序为：左金丸>甘露散>茱萸丸>反左金丸。结论 微量热法可用于刻画黄连与吴茱萸分煎后配伍时的差异。