脑胶质瘤干细胞衍生的外泌体lncRNA HOXA-AS2促进脑胶质瘤的增殖、迁移、侵袭和干细胞特性

背景与目的：外泌体是介导肿瘤微环境中肿瘤细胞与受体细胞间相互作用的重要信使。然而，细胞外泌体长链非编码RNA（long non-coding RNA，lncRNA）在脑胶质瘤干细胞（glioma stem cell，GSC）和脑胶质瘤细胞的细胞间通信中的作用尚不清楚。本研究探究外泌体衍生的lncRNA对脑胶质瘤增殖、迁移、侵袭和干细胞特性的影响。方法：从中国脑胶质瘤基因组图谱（the Chinese Glioma Genome Atlas，CGGA）和癌症基因组图谱（the Cancer Genome Atlas，TCGA）数据库下载包含低级别脑胶质瘤（low-grade glioma，LGG）和高级别脑胶质瘤（high-grade glioma，HGG）lncRNA表达数据的数据集，识别LGG和HGG组织之间的差异表达lncRNA（differentially expressed lncRNA，DelncRNA），并分析HOXA-AS2水平与胶质瘤患者总生存期（overall survival，OS）之间的关系。从人胶质瘤细胞系SHG44中分离GSC，用流式细胞术检测CD133⁺富集的细胞，再用蛋白质印迹法（Western blot）检测干细胞相关蛋白（CD133、SOX2和OCT4）的表达水平。提取和识别SHG44-GSC衍生的外泌体，并用PKH26细胞膜染料进行荧光标记；再将转染了Cy3标记HOXA-AS2的SHG44-GSC与SHG44细胞进行间接共培养；后用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction，RTFQ-PCR）检测SHG44-GSC和SHG44-GSC衍生外泌体中HOXA-AS2的水平。使用pLVX-IRES-PURO HOXA-AS2慢病毒质粒和含靶向HOXA-AS2质粒的慢病毒shRNA进行慢病毒转染。采用细胞计数试剂盒-8（cell counting kit-8，CCK-8）和transwell实验检测SHG44-GSC衍生的外泌体HOXA-AS2对SHG44细胞增殖和侵袭能力的影响。结果：HOXA-AS2在胶质瘤中呈现高表达，且与患者较差的OS相关（P<0.01）。SHG44-GSC中CD133⁺细胞比例明显高于SHG44细胞（P<0.000 1），SHG44-GSC中干细胞相关蛋白（CD133、SOX2和OCT4）的表达水平明显高于亲代SHG44细胞（P<0.000 1），并且SHG44-GSC中HOXA-AS2水平显著升高（P<0.000 1）。PKH26标记的外泌体被SHG44细胞吸收，且SHG44细胞中可观察到Cy3标记的HOXA-AS2；HOXA-AS2 OE转染的SHG44-GSC细胞（SHG44-GSC/HOXA-AS2 OE）和SHG44-GSC/HOXA-AS2 OE衍生的外泌体（SHG44-GSC/HOXA-AS2 OE-Exo）中HOXA-AS2水平显著升高（P<0.01），在与SHG44-GSC/HOXA-AS2 OE细胞共培养的SHG44细胞中HOXA-AS2水平显著升高（P<0.01）。SHG44-GSC/HOXA-AS2 OE-Exo可显著促进SHG44细胞增殖、迁移和侵袭。结论：来自SHG44-GSC的外泌体HOXA-AS2能显著促进胶质瘤细胞增殖、迁移、侵袭和干细胞特性，提示HOXA-AS2可能是脑胶质瘤潜在的治疗靶点。     

综合护理干预在颅脑损伤腰大池持续外引流中的应用效果分析

目的:分析综合护理干预在颅脑损伤腰大池持续外引流中的应用效果。方法:选择2015年6月—2017年9月在我院行腰大池持续外引流术的颅脑损伤患者80例,将2015年6月—2016年7月接受常规护理干预设为对照组,2016年8月—2017年9月接受综合护理干预设为观察组,各40例,对比两组患者的置管时间、治疗效果及护理满意度。结果:与对照组相比,观察组患者的置管时间较短,差异有统计学意义(P <0. 05);与对照组相比,观察组患者的治疗总有效率及护理满意度均较高,差异有统计学意义(P <0. 05)。结论:在颅脑损伤腰大池持续外引流中应用综合护理干预,能明显缩短置管时间,有效改善治疗效果,提高护理满意度。     

间歇性循环张力对人间充质干细胞成软骨分化的影响

目的:研究间歇性循环张力(ICMT)对人间充质干细胞(h MSCs)成软骨分化的影响。方法:取人间充质干细胞建立体外软骨分化的模型,将人间充质干细胞以8×10~4/cm~2的密度接种于被Ⅰ型胶原覆盖处理过的Bio Flex TM六孔加力板中,置于37℃、5%CO_2培养箱中培养,待细胞贴壁后加入成软骨诱导液培养。根据间歇性循环张力的影响分为加力组和对照组,加力组:细胞通过Flexcell FX-5000TM应变加载系统在培养箱中(37℃、5%CO_2)给予力学刺激(10%伸长率、0. 5 Hz、8 h/d)处理;对照组:不加以力学刺激放在相同环境下一起培养。两组细胞分别在加成软骨诱导液后1、3、6、8、10 d用CCK-8法检测细胞增殖。第14天用番红O染色观察细胞成软骨变化,用流式细胞术检测细胞凋亡情况,用Real-time PCR的方法检测细胞成软骨基因ACAN、COLⅡ、SOX9的表达变化。结果:间歇性循环张力可以抑制间充质干细胞的增殖。第14天的加力组细胞明显凋亡,番红O染色比对照组浅,软骨基因的表达被抑制。结论:间歇性循环张力抑制人间充质干细胞成软骨分化。     

荔枝核总黄酮对大鼠肝星状细胞增殖抑制作用及对PPARγ、C-ski表达的影响

目的:研究荔枝核总黄酮(total flavone from litchi,TFL)对大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)增殖的抑制作用及对过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome prolif-erator-activated receptor-γ,PPAR-γ)、C-ski表达的影响,探究荔枝核总黄酮抗肝纤维化的可能作用机制。方法:体外培养HSC,分为空白对照组、荔枝核总黄酮浓度20 mg·L~(-1)组、40 mg·L~(-1)组、80 mg·L~(-1)组、160 mg·L~(-1)组、200 mg·L~(-1)组,分别干预48 h后,通过CCK-8法检测每组细胞的增殖情况。再设置为空白组、PPARγ天然配体前列腺素J2(15-d-PGJ2)对照组(5μmol·L~(-1))、15-d-PGJ(2 5μmol·L~(-1))+TFL(100μmol·L~(-1))对照组、TFL组(100μmol·L~(-1)),ELISA法检测每组细胞中Smad3/4的含量;qPCR法检测每组细胞中PPAR-γ、C-ski mRNA的表达。结果:CCK-8结果显示,在作用时间相同的情况下,随着TFL作用剂量的增加,药物对细胞增殖的抑制率增高(P0.05);ELISA结果显示,TFL实验组中的Smad3/4含量明显降低(P0.05);qPCR结果显示,TFL实验组中PPARγ、C-ski mRNA的表达量均明显增加(P0.05)。结论:荔枝核总黄酮能够抑制HSC-T6细胞增殖,降低细胞外基质分泌,该机制可能与抑制HSC-T6细胞中的Smad3/4含量,上调PPAR-γ及C-ski mRNA表达相关。     

外泌体在骨肉瘤侵袭转移及耐药性中的研究进展

骨肉瘤(osteosarcoma)是一种具有高度侵袭性的恶性肿瘤，已成为青少年人群中导致癌相关死亡的首要疾病。但由于其早期高发的肺转移率以及广泛的对化疗药物耐药性问题，骨肉瘤在临床上的治疗仍存在巨大挑战。目前，骨肉瘤的早期诊断及基因治疗已经在国内外的基础研究和临床应用中取得了一定的进展，其中外泌体(exosomes)在骨肉瘤中的诊断治疗具有极大的应用前景。外泌体是一种可由多种活细胞分泌的纳米级(40~100 nm)微囊泡，它具有传递mRNA、miRNA、DNA和蛋白质等各种信息和功能性物质的功能。它可由多种活性细胞产生和分泌，存在于多种体液和细胞间液中。由于其特殊的存在和传递形式以及所搭载的信息和物质，因此，骨肉瘤来源的外泌体可通过多种途径和方式促进骨肉瘤的发生、侵袭转移、耐药性及免疫逃逸。利用这些特点，外泌体可被人为搭载靶向药物或治疗性基因等物质，或通过多种方式对其分泌和释放进行调控来治疗多种肿瘤。近年来，关于外泌体在骨肉瘤方面作用和应用的研究成为热点，但仍停留在基础研究且尚未在临床的诊断及治疗中进行应用。本文旨在对外泌体在骨肉瘤侵袭转移及耐药性上的作用机理、临床诊断、治疗方面的研究进展进行总结，望有助于为利用外泌体诊断、治疗和改善骨肉瘤预后提供参考。      

轴向载荷分担比指导外固定器动力化的临床应用

目的:探讨轴向载荷分担比用于胫腓骨骨干骨折术后指导外固定器轴向动力化促进骨折愈合的有效性。方法:选取外固定器治疗的胫腓骨骨干骨折患者100例,随机分为观察组50例,对照组50例。观察组在轴向载荷分担比指导下行外固定器轴向动力化治疗,对照组未行动力化,随访比较两组的治疗效果。结果:所有患者均获随访,随访时间4～12个月,平均6.5个月,治疗期间所有患者均未出现外固定针断裂、松动及再骨折等并发症,观察组1例骨搬移患者轴向载荷分担比5%,X线片显示骨折断端有连续性骨痂通过,拆除外固定器连接杆后发生移位,恢复原数值行轴向加压再动力化,现已愈合。观察组除外1例骨搬移患者,其余49例患者外固定器固定时间为[(24.4±4.7)周],骨折临床愈合时间为[(22.4±4.7)周],与对照组50例患者外固定器固定时间[(29.3±5.6)周],骨折临床愈合时间[(27.3±5.6)周]比较,显著减少(P0.05)。结论:外固定器轴向载荷分担比指导胫腓骨骨干骨折外固定术后轴向动力化可以加速骨折愈合,但不适合骨搬移截骨端已硬化患者。     

miR-335-5p对人关节软骨细胞的影响

目的探究miR-335-5p对人关节软骨细胞蛋白多糖(ACAN)、Ⅱ型胶原蛋白(CollagenⅡ)、Ⅹ型胶原蛋白(CollagenⅩ)、基质金属蛋白酶(MMP)13的调节作用。方法通过取人创伤后截肢的膝关节软骨,分离并提取软骨细胞。miR-335-5p模拟物(mimics)、抑制剂(inhibitor)、mimicsNC、inhibitorNC分别转染至软骨细胞,利用qRT-PCR和Western印迹分别检测各组ACAN、CollagenⅡ、CollagenⅩ、MMP13的表达情况。结果与mimicsNC组相比,mimics组显著下调ACAN、CollagenⅡmRNA和蛋白表达水平,显著上调MMP13、Collagen X mRNA和蛋白表达水平(P0.05);与inhibitorNC组比较,inhibitor组显著上调ACAN、CollagenⅡmRNA和蛋白表达水平,显著下调MMP13、Collagen X mRNA和蛋白表达水平(P0.05)。结论 miR-335-5p能够抑制ACAN、CollagenⅡ并促进MMP13、Collagen X mRNA转录及蛋白合成,对OA的发病起到潜在的推进作用。     

转换Taylor空间支架治疗胫腓骨骨折单臂外固定术后对位不良

[目的]介绍应用Taylor空间支架(TSF)调整胫腓骨骨折单臂外固定架术后对位不良的手术经验。[方法]回顾性分析2016年8月～2017年8月本科收治的胫腓骨骨折单臂外固定架术后对位不良患者11例。转换TSF前所有患者复查X线片,发现不同程度的移位、成角、旋转畸形,其中2例为向前成角,5例为向后成角,内翻畸形2例,外翻畸形1例,内旋畸形1例。转换后拍摄小腿正侧位X线片,获取安装和畸形参数。将数据输入计算机配套软件获取调整数据。调整后再次摄片,如合并软组织损伤则转换后二期处理。[结果]经TSF调整所有病例均获得解剖复位。11例患者均获得12～16个月随访,骨折均愈合,无骨外露及软组织问题,固定针无松动,针道无感染。术后参照Johner-Wruhs评分表评价:优9例,良1例,可1例,优良率90.91%。[结论]采取转换TSF治疗胫腓骨骨折单臂外固定架术后对位不良是一种微创、经济、有效的治疗方式。