复合Ι型胶原海绵创伤止血的动物实验研究

目的 探讨猪脚肌腱提取的I型胶原与壳聚糖混合，交联冻干后形成的复合I型胶原海绵对创伤创面出血的止血效果。方法 用新西兰大白兔作实验动物，对其皮下出血、体表浅动静脉断裂损伤、肝损伤进行止血试验，同时与明胶海绵、纱布等止血效果作比较，观察其止血时间、敷料与创面的粘合等情况，并定期观察创面愈合和体内吸收情况。结果 本试验表明：复合I型胶原海绵的止血时间约2分钟，明胶海绵为3．5分钟，纱布压敷为10分钟以上；复合I型胶原海绵和明胶海绵均能在体内降解吸收。结论 复合I型胶原海绵止血效果最好，无论是止血时间、止血效果、与伤口的粘附能力都优于其他2种材料，并能在体内降解吸收，因此，是一种较理想的创伤止血材料。     

烧伤创面愈合过程中胶原代谢与针刺作用的影响

背景：针刺可促进烧伤创面愈合，但对创面组织胶原代谢的影响尚不清楚。 目的：观察针刺对烧伤创面愈合过程中胶原代谢的影响。 设计、时间及地点：随机对照动物实验，于1997-01/2005-12在广州市创伤外科研究所完成。 材料：雌性新西兰大白兔27只，体质量2.0~2.5 kg，用于制备深Ⅱ度烧伤模型。 方法：每个兔背部脊柱两旁造成10个创面。实验分为3组，正常组(n=3)：只背部剃毛备用；常规治疗组：伤后自由进食，创面外用25 g/L的碘伏暴露；针刺组：在常规治疗的基础上，伤后24 h内开始针刺治疗，取双侧“足三里 (ST36)”穴，针刺后接电针仪，频率20 Hz，时间30 min，1次/d。伤后3，7，13，21 d常规治疗组和针刺组各取3只动物处死，取组织待测。 主要观察指标：各组动物不同时间点创面组织中羟脯氨酸水平。 结果：27只大白兔均进入结果分析。烧伤后13 d常规治疗组和针刺组创面组织中羟脯氨酸水平均低于正常皮肤组织(P < 0.05)。伤后21 d 常规治疗组创面组织中羟脯氨酸达到正常皮肤组织水平，两组相比差异无显著性意义(P > 0.05)。而针刺组创面组织中羟脯氨酸水平高于常规治疗组和正常皮肤组织 (P < 0.05)。 结论：针刺可促进烧伤创面胶原的合成。     

三种阳离子脂质体介导血管内皮细胞基因转染效率的比较

目的:评价不同阳离子脂质体介导基因转染血管内皮细胞的转染效率。方法:实验于2006-12/2007-02在中山大学生化实验室及广州市创伤外科研究所完成。采用增强型绿色荧光蛋白基因为报告基因,分别采用Lipofectin、Lipofectamine、Dosper3种不同的阳离子脂质体为载体,转染人脐静脉血管内皮细胞。在24孔板中,每孔加入人脐静脉血管内皮细胞悬液(1×106个细胞),各孔分别加入3种不同阳离子脂质体增强型绿色荧光蛋白质粒复合物,分别于培养24,48h后用荧光显微镜及流式细胞仪测定增强型绿色荧光蛋白在细胞内的表达及转染效率。结果:3种不同阳离子介导的增强型绿色荧光蛋白基因转染的人脐静脉血管内皮细胞内均有绿色荧光蛋白表达,24h后明显,48h后达高峰。Dosper介导组绿色荧光细胞百分比明显高于Lipofectin介导组及Lipofectamine介导组,差异有非常显著意义(P<0.01)。结论:Dosper介导的血管内皮细胞基因转染效率较高,较适合作为血管内皮细胞的基因转染载体。     

Ⅱ型胶原海绵的材料特性及对软骨缺损的影响

[目的]研究Ⅱ型胶原海绵的材料特性与其在修复软骨缺损中的作用.[方法]对比Ⅱ型胶原海绵与Ⅱ型胶原膜的力学、孔径方面等材料特性的差异,并建立兔膝关节软骨缺损模型,A组接受Ⅱ型胶原海绵移植,B组接受Ⅱ型胶原膜移植,而C组为空白对照组,术后不予治疗,分别于2、6和12周取材,通过组织学染色观察软骨缺损处修复的效果.[结果]Ⅱ型胶原海绵与Ⅱ型胶原膜在材料特性上有显著差异,胶原自发荧光分层扫描通过图像分析得出A组平均孔径为(93.26±38.41) μm,弹性模量(0.098±0.0 017) MP/m2,均较B组更为理想.组织学显示A组6周时生成大量新生软骨,12周时新生软骨形态与成熟度已经接近正常,较B、C两组更为优越.[结论]Ⅱ型胶原海绵有理想的孔径和合理的生物力学结构性质,有利于软骨缺损的修复,是一种具有良好材料特性的组织工程基质.     

成纤维细胞生长因子和表皮生长因子及复合因子对兔ACL、MCL体外增殖作用

目的观察酸性成纤维细胞生长因子(acid fibroblast growth factor，aFGF)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)和表皮生长因子(epidermal growth factor，EGF)以及复合因子对兔前交叉韧带(anterior cruciate ligament，ACL)和内侧副韧带(medial collateral ligament，MCL)的促增殖作用。方法分离传代培养10周龄新西兰大白兔骨关节韧带的ACL和MCL的成纤维细胞，接种96孔板，并加入浓度为0(对照组)、1、5、10、50、100ng／ml的aFGF或bFGF，浓度为0(对照组)、1．56、3．13、6．25、12．50、25、50ng／ml的EGF，单独或aFGF EGF两种因子联用与细胞(n=4)共同培养48h，以XTT方法测定其促细胞增殖作用。结果3种生长因子单独应用对ACL和MCL都有促进作用，aFGF对两种细胞均存在量效关系；bFGF 1ng／ml，EGF 5ng／ml对ACL作用最好，而对MCL则是bFGF和EGF均存在量效关系。浓度为5ng／ml的aFGF与50ng／ml的EGF联合1ng／ml aFGF与3．13ng／mlEGF作用于ACL或MCL均有协同作用。结论3种生长因子对ACL和MCL均有促进作用，单独应用aFGF或联用EGF优于单一因子促进兔ACL和MCL细胞的增殖，并且提示低浓度的aFGF联用EGF优于单一生长因子。     

几丁糖-胶原止血海绵的研制及其生物相容性评价

目的以几丁糖、胶原为主要原料,研制一种新型的创伤止血材料,并对其止血性能及生物相容性进行评价。方法首先制备高纯度的胶原蛋白溶液,使之与几丁糖溶液键合,冷冻干燥成为海绵体。然后进行毒理学检测,包括急性毒性试验、刺激性试验、过敏性试验和溶血性试验。再进行止血及埋植实验:在兔耳部制造1cm×1cm大小的出血创面,包括切断兔耳动脉,在兔肝脏切除1cm×1cm的组织形成渗血创面,分别用几丁糖—胶原海绵、明胶海绵压敷止血,记录止血时间,并把在肝脏止血的海绵缝合进行体内埋植实验。结果几丁糖-胶原海绵在兔耳动脉的平均止血时间为(120±6)s,而明胶海绵为(600±10)s;在兔肝脏的平均止血时间为(45±2)s,而明胶海绵为(75±3)s;体内肝埋植实验的实验组与对照组的结果一样,有轻微的炎性反应,5个月内能在体内完全降解。其余毒理学试验均呈阴性结果。结论几丁糖—胶原海绵具有优良的止血性能及良好的生物相容性。     

Ⅱ型胶原介导的细胞毒免疫学实验

目的 检测用猪Ⅱ型胶原免疫新西兰大白兔的细胞免疫状态。方法 用Ⅱ型胶原免疫新西兰大白兔60天，定期抽取血浆检测抗Ⅱ型胶原抗体；第60天取兔的外周血淋巴细胞，取兔脾细胞、淋巴结分离淋巴细胞，进行体外二次Ⅱ型胶原刺激，检测由此引起的反应性的细胞增殖规津。实验分为二组，第一组加入不同浓度PHA作阳性对照，并测定非特异性免疫；第二组加入不同浓度Ⅱ型胶原，检测特异性免疫。结果 正常兔的淋巴细胞在PHA刺激下发生增殖，但对Ⅱ型胶原的第一次刺激不发生增殖，而免疫兔对PHA和Ⅱ型胶原的刺激均能发生显著的增殖。结论 表明异种Ⅱ型胶原在一定浓度下，可以引起免疫兔的抗Ⅱ型胶原抗体的升高，并可引起兔脾、外周血淋巴细胞增殖，异种Ⅱ型胶原能在体内引起细胞免疫。     

酸性成纤维细胞生长因子及表皮生长因子对兔韧带细胞增殖的影响

目的：观察酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)和表皮生长因子(EGF)对内侧副韧带(MCL)和前十字韧带(ACL)细胞增殖行为的影响。方法：培养10周龄新西兰白兔内侧副韧带和前十字韧带细胞，在培养液中分别加入aFGF和EGF，以XTT方法测定细胞的增殖行为。结果：aFGF在1ng／ml时即对两种细胞具有显著的促进增殖作用，其浓度达50ng／ml时，对MCL细胞的促进作用最大，达100ng／ml时对ACL细胞的促进作用最大。EGF在0．78ng／ml时即对MCL细胞有显著的促增殖作用，在1．56ng／ml时始对ACL细胞有显著的促增殖作用，其浓度达3．125ng／ml时对2种细胞的促进作用最大。aFGF和EGF在超过其最佳浓度后，随浓度升高促进作用均下降。结论：aFGF和EGF可以促进韧带成纤维细胞增殖。     

Ⅱ型胶原海绵修复关节软骨缺损的动物实验

目的探讨Ⅱ型胶原海绵修复关节软骨缺损的效果。方法采用成年纯种新西兰兔24只,48侧膝关节,在股骨滑车面钻孔为直径5mm、深3mm的全层关节软骨缺损,左侧为A组,在缺损区内完全填充Ⅱ型胶原海绵,右侧为B组,缺损区空白对照。术后12周内,每双数周对缺损修复情况行大体形态和组织学观察。结果Ⅱ型胶原对关节软骨缺损的修复有明显的促进作用,修复结果接近正常软骨。结论自行研制的高纯度Ⅱ型胶原海绵组织相容性好,无明显毒副作用,对关节软骨缺损具有良好的修复作用。