IL-10和TNF-α在人外周血单个核细胞体外感染卡介苗中的表达及相关性研究

目的探讨白细胞介素-10（IL-10）、肿瘤坏死因子（TNF-α）在人外周血单个核细胞（PBMCs）体外感染卡介苗（BCG）中的表达及相互作用。方法 PBMCs体外感染BCG后,分别于3、6、8、24h收集细胞应用荧光定量PCR法检测细胞内IL-10和TNF-α的mRNA含量;此外,分别于8、20、32、48h加入anti-IL-10的抗体孵育,收集细胞培养上清,用ELISA法检测上清中IL-10和TNF-α的蛋白含量。结果 PBMCs体外感染BCG后,相对于空白对照组,IL-10和TNF-α在mRNA和蛋白水平的表达量均增高,差异具有统计学意义（P〈0.05）,两者表达量呈现负相关趋势;当加入anti-IL-10的抗体后,TNF-α的蛋白表达量要高于未加抗体组,差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论 IL-10和TNF-α在人PBMCs体外感染卡介苗中的表达量增加,IL-10对TNF-α的表达可能具有抑制作用。     

放射性核素显像在糖尿病足诊治中的应用

早期、准确地诊断糖尿病的微血管、血流改变以及感染是取得治疗成功的关键。放射性核素显像可以为糖尿病足的发生、发展提供重要信息，在对糖尿病足的早期改变、糖尿病足部骨髓炎的诊断以及对溃疡的预后估计具有重要作用。     

老人突然变“静”了 当心痴呆来了

一位女儿的自述 “我的母亲曾经是一名聪明、开朗、独立、健康的知识女性,父亲去世后,她接管了一个小型贸易公司。退休后,母亲一个人住,她有自己的朋友圈,还经常参加社区活动和一些志愿者活动,生活很充实。然而,到了68岁左右,母亲忽然变得不太出门,也不出去看望她的朋友,每天只是在家看电视或看书读报。     

小鼠骨髓树突状细胞的培养扩增及生物学特性分析

背景：树突状细胞是目前已知功能最强的专职性抗原递呈细胞，但树突状细胞在体内分布广泛且数量较少，获得大量的树突状细胞是研究树突状细胞特性和功能的前提。 目的：建立小鼠骨髓源树突状细胞体外培养和扩增方法，观察其形态和相关特征。 设计、时间及地点：树突状细胞形态学观察实验，于2006-08/2007-05在中山大学中山眼科中心实验室完成。 材料：健康雌性C57BL/6小鼠。 方法：在无菌条件下提取C57BL/6鼠骨髓细胞，分离单个核细胞，以小鼠重组粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和白细胞介素4协同诱导下培养，加用磷酸脂多糖刺激，分成磷酸酯多糖-树突状细胞和单纯树突状细胞组，前者在培养加入磷酸酯多糖，后者不加。 主要观察指标：应用光镜和电镜下观察树突状细胞的形态，流色细胞仪检测鉴定其生物学特征。 结果：体外培养2 周后具有典型的树突状细胞形态，光镜下显示细胞表面不规则，呈树突状突起，电镜下可见培养的细胞具有典型树突状细胞的形态特征，流式细胞鉴定为髓系树突状细胞，高表达MHC II类分子及共刺激分子(MHC II，CD80，CD83，CD11 c)。单纯树突状细胞组的细胞中度表达MHCⅡ类分子，低水平表达共刺激分子，刺激T细胞增殖的能力较弱；磷酸酯多糖-树突状细胞组细胞高水平表达MHCII类分子和共刺激分子。 结论：实验所采用的树突状细胞体外原代培养的方法能在体外培养出大量的未成熟树突状细胞，具有典型树突状细胞的形态特征及较高的纯度。     

99 Tcm-HL91脑缺血半暗带显像的实验研究

目的 观察^99Tc^m－4，9－二氮－3，3，10，10－四甲基十二烷－2，11－二酮肟（HL91）在局部脑缺血模型脑组织中分布特点。方法 建立31只大鼠避部脑缺血模型，对^99Tc^m－HL91在正常大鼠体内以及在动物模型脑组织中的分布进行研究，同时对动物模型脑组织行放射自显影研究。结果 ^99Tc^m－HL91静脉注射后主要分布于肝、肾、小肠，正常脑组织放射性较低。患／健侧大脑中动脉主要供血区（靶区）单位质量放射性比值与对照组相比差异均有显著性，且随时间的延长而逐渐增高。动物模型脑组织自显像图像均可见靶区放射性明显高于对侧镜像部位，经计算机图像分析系统进行图像分析和数据处理后，同一时相靶与非靶区单位面积净吸光度值差异有显著性，各时相靶／非靶比值与对照组比较差异均有显著性，且随注射药物时间的延长而增高。结论 ^99Tc^m－HL91能够选择性地浓集于缺血缺氧的脑组织中，清除延缓，可用于急性脑卒中缺血半暗带的探测。     

可溶性TAT PTD-Ngb融合蛋白的原核表达、鉴定与纯化及其对皮质神经元的跨膜转导

 【目的】构建含蛋白转导域（protein transduction domain,PTD）与脑红蛋白（neuroglobin,Ngb）融合基因的表达质粒,原核表达可溶性TATPTD-Ngb,并鉴定、纯化,检测TATPTD-Ngb对皮质神经元的跨膜转导功能。【方法】提取SD大鼠脑组织总RNA,通过RT-PCR法构建编码TATPTD-Ngb的融合基因,克隆入pET28b原核表达载体,转化入大肠杆菌BL21（DE3）pLysS,诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE、Western-blot分析及可溶性鉴定,利用所表达的目的蛋白上的6个组蛋白用Ni-NTA琼脂进行亲和层析纯化,将不同浓度纯化的融合蛋白与原代培养皮质神经元共孵育2h,用Western-blot分析融合蛋白的跨膜转导。【结果】成功构建了含有TATPTD-Ngb的原核表达载体,插入片段500bp,成功表达并纯化了可溶性TATPTD-Ngb融合蛋白,相对分子质量约为20k,Westernblot鉴定显示表达蛋白具有抗原性,并具有转导入原代培养皮质神经元的功能,随给予蛋白浓度的增高进入神经元内的融合蛋白量增高。【结论】可溶性融合蛋白TATPTD-Ngb可转导入皮 质神经元，对进一步研究Ngb的功能及蛋白转导技术的应用奠定了基础。     

MIBG的拟交感神经效应:与酪胺比较

目的:为确定125　I-间碘代苄基胍(125　I-MIBG)是否有类胺作用,于离体的兔心中探测125　I-MIBG的拟交感神经效应,并与14C-酪胺比较。方法:静脉给予家兔肝素(500U)和过量的戊巴比妥钠(80mg/kg),处死后迅速取出心脏。在剂量为0.03～10μmol/L的125　I-MIBG或14C-酪胺弹丸式注入主动脉插管前后分别测出心率和溢入灌注液的去甲肾上腺素和多巴胺。从人神经母细胞瘤(SK-N-SH)细胞中获得神经元摄取125　I-MIBG和14C-酪胺的半数最大清除率时血浆中浓度(Km)和最大清除率(Vmax)值。通过密度梯度离心法从牛肾上腺髓质组织内嗜铬颗粒中获…     

日本血吸虫可溶性虫卵抗原对实验性自身免疫性脑脊髓炎的预防保护研究

血吸虫虫卵诱发的肝脏虫卵肉芽肿的免疫病理机制是以Th2为主的免疫反应，这种免疫环境给宿主和寄主提供了一种共生的条件。而实验性自身免疫性脑脊髓炎（豇虹）是多发性硬化（MS）的经典动物模型，是以Th1为主的细胞免疫介导的自身免疫性疾病。纠正体内的这种Th1／Th2反应之间的平衡是多年来治疗者们致力的目标，尽管临床上有新的药物不断问世，MS的治疗仍不令人乐观。曼氏血吸虫虫卵已成功用于Th1为主的自身免疫性疾病，其机制探讨仍在进一步的研究中。我们利用日本血吸虫的可溶性虫卵抗原（SEA）探讨其对EAE的预防保护价值，并从临床行为学和组织病理学探讨其对EAE的保护作用。     

不同抗原诱导不同动物多发性硬化模型的比较

【目的】研究不同抗原和不同动物的多发性硬化动物模型的神经功能损害和病理特点。【方法】分别用MOG35—55免疫C57BL／6小鼠建立小鼠EAE模型，以豚鼠脊髓匀浆为抗原致敏DA大鼠建立大鼠EAE模型，用同源猴脑白质匀浆免疫食蟹猴建立非人灵长类EAE模型：分别用不同的神经功能评分标准评价EAE的神经功能缺失，用HE染色观察炎症细胞浸润，砂罗铬花青法（solochrome cyanin）或LBF染色观察髓鞘脱失情况，用改良的Bielscbowsky法染色观察轴突损伤；用透射电镜观察超微结构改变。【结果】用不同的抗原如MOG35-55乳化液、豚鼠脊髓匀浆和同源猴脑白质匀浆均能成功制作EAE模型。发病率为100％，其中豚鼠脊髓匀浆诱导的DA大鼠EAE动物模型为急性模型，病情恢复快，炎症反应重，脱髓鞘轻微；用MOG35—55乳化液制作C57BL／6小鼠EAE模型为慢性进展模型，炎症反应轻，脱髓鞘和轴突损伤明显，是MS的优秀模型。用同源猴脑白质匀浆致敏的EAE食蟹猴有急性病程的，有复发的，有慢性进展型的，脱髓鞘和轴突变性明显。【结论】不同抗原和不同动物的EAE模型无论从病程、神经功能评分和病理改变方面均有自己的特点。用MOG35-55乳化液制作C57BL／6小鼠EAE模型是MS的优秀模型。     

乳腺肿物~(99m)Tc-MIBI显像、钼靶X线诊断对照分析

目的 :分析比较99mTc -MIBI(甲氧基异丁基异腈)乳腺显像与钼靶X线摄影法对乳腺肿块的临床诊断价值。方法 :40例单侧乳腺肿块患者 ,包括良性病变29例 ,恶性病变11例 ,在1周内同时接受99mTc -MIBI乳腺显像和钼靶X线摄影检查。钼靶X线片结合放大镜观察钙化点的情况分析 ,99mTc -MIBI显像取感兴趣区(ROI) ,求出肿块与正常组织中放射性比值(T/NT)。结果 :99mTc-MIBI显像T/NT放射性比值 ,恶性为1 98±0 22(n=12) ;良性为1 16±0 10(n=28) ;两者有显著性差异(P<0 01)。99mTc-MIBI显像与钼靶X线摄影法诊断乳腺癌的灵敏度和特异性分别为83 3%、92 8%和90 9 %、24 1%。结论 :钼靶X线摄影发现乳腺恶性病变敏感性高而特异性低 ;99mTc-MIBI显像对乳腺肿块诊断特异性和准确性明显优于钼靶X线摄影 ,两种影像方法各有所长 ,如果结合应用 ,可提高诊断的准确性