人p53四聚功能域对提高抗人CD3单链抗体亲和力的作用

目的探讨人p53四聚功能域在提高抗人CD3单链抗体（scFv）亲和力方面的作用。方法利用递归PCR法扩增人IgG3上游铰链区与人p53四聚功能域融合基因，克隆入pUC19载体中构建pUCl9／IgG3／p53克隆载体。将抗人CD3 scFv克隆入pUC19／IgG3／p53载体中，构建抗人CD3scFv／人p53四聚功能域融合基因。经酶切鉴定及序列测定证实后。将融合基因克隆入真核表达载体pSecTag2-B中，转染HeLa细胞进行表达，表达产物纯化后利用流式细胞仪进行活性测定。结果获得了抗人CD3scFv／人p53四聚功能域融合基因，基因全长882bp，可编码294个氨基酸，与已发表的抗人CD3scFv、人IgG3上游铰链区和人p53四聚功能域基因cDNA序列一致。表达产物经SDS-PAGE和Western印迹实验证实为约35kD的特异蛋白条带，纯化后经流式细胞仪检测可以特异性地结合人外周血单个核细胞（PBMC）细胞，亲和力高于scFv。结论人lgG3上游铰链区／p53四聚功能域基因与抗人CD3scFv基因融合后表达产物的功能性亲和力大大提高，为提高抗体的功能性亲和力开辟了新的思路。     

人IgG3上游铰链区／p53四价功能域融合基因的构建及空间构象分析

目的 构建人IgG3上游铰链区/p53四价功能域融合基因,并进行空间构象的分析,方法 利用递归PCR法,扩增人IgG3上游铰链区/p53四价功能域融合基因,并在融合基因5′端和3′端引入SalI与HindⅢ酶切位点,将融合基因克隆人puC19载体中,经酶切鉴定及序列测定证实后,利用计算机软件进行空间构象分析,结果 人IgG3上游铰链区/p53四价功能域融合基因,经酶切鉴定及测序证实,其大小及核苷酸序列正确,与设计完全一致。计算机软件分析显示,融合基因表达产物可自动装配成四聚体,并具有4条柔性好的长多肽,可确保与其融合的其他基因片段空间构象的独立性。结论 人IgG3上游铰链区/p53四价功能域融合基因的成功构建,为进一步研制多价抗体奠定了基础。     

浙江大学医学院唐修文教授研究组和王秀君教授研究组发现调控NRF2信号通路的新机制

NRF2是一转录激活因子,在氧化和亲电应激下其能诱导系列细胞保护基因的表达。唐修文教授研究组和王秀君教授研究组的研究人员发现,核受体RXRa在新的功能域通过与NRF2靶基因启动子结合而抑制NRF2的转录活性。近十多年来,一直认为NRF2只有6个功能域,而该研究     

人多梳蛋白2不同功能片段真核表达载体的构建及表达

目的:构建HPC2不同截短功能片段的真核表达载体,并检测各片段在骨肉瘤U2OS细胞中的表达。方法:以质粒pcDNA3.2-V5/HPC2为模板,分别设计各片段PCR引物进行扩增,EcoR I酶切鉴定PCR产物,正确的PCR产物进行连接后转化到DH5α感受态细胞中并涂板筛选,从而得到带有V5标签的不同截短动能片段的表达载体,提取质粒并转染U2OS细胞,Western blot法鉴定目标蛋白的表达。结果:测序及酶切的结果均表明HPC2不同功能片段的真核表达载体构建成功,并能够在U2OS细胞中表达。结论:成功构建了HPC2不同功能域片段的真核表达载体。     

抗前列腺特异抗原航CD3双特异性单链抗体四聚体的制备

本实验旨在构建人IgG3上游铰链区／p53四价功能域融合基因和抗前列腺特异抗原／抗CD3双特异性单链抗体的基础之上，进一步制备该双特异性单链抗体的四聚体。     

组织因子途径抑制物研究进展

组织因子途径抑制物(TPI)以前称作抗转化素、脂蛋白相关凝血抑制剂(LACI)、外源性途径抑制剂(EPA)或组织因子抑制剂(TFI),为内源性血浆抗凝蛋白和目前惟一已知的组织因子(TF)依赖性凝血途径调节剂.人类TFPI有两种形式:TFPI-I和TFPI-2,通常说的TFPI是指TFPI-1.TFPI曾使用过多个不同的名字,直到1991年国际血栓止血协会科学和标准化委员会达成共识命名为TFPI.本文将从TFPI的结构、理化特性、抗凝作用等几个方面对TFPI进行综述.     

内皮细胞类表皮生长因子域7对血管平滑肌细胞凋亡的影响

目的 探讨人脐静脉内皮细胞株（HUVEC）中类表皮生长因子功能域7（EGFL7）对共培养的人主动脉平滑肌细胞（AoSMC）凋亡的影响以及可能的信号转导通路。方法 利用细胞共培养池行HUVEC与AoSMC共培养,将EGFL7的特异siRNA转染HUVEC细胞,利用MTS法检测HUVEC中EGFL7基因的有效沉默对共培养的AoSMC细胞存活率的影响;并合成无关siRNA作为阴性对照组（neg组）,以未转染siRNA的细胞为空白对照组（con组）。同时利用分光光度法检测其对AoSMC细胞乳酸脱氢酶（LDH）、三磷酸腺苷（ATP）以及细胞凋亡蛋白酶（Caspase-3 ）表达的影响;应用RT-PCR检测共培养AoSMC 的bcl-2及bax mRNA表达水平的改变。结果 与neg组及con组相比,干扰HUVEC细胞EGFL7表达12h后,AoSMC存活率无明显变化（P>0.05）,而干扰24、36、48h后,存活率显著降低（P<0.05）;干扰12、24、36、48h后,AoSMC细胞线粒体ATP释放量减少、培养基中LDH含量及Caspase-3表达量均增加（P<0.05）。RT-PCR检测结果显示,与neg组及con组相比,干扰siRNA转染HUVEC细胞24、36、48h,共培养的AoSMC凋亡基因bcl 2表达水平轻度降低（P<0.05）;但Bax表达水平在相应干预时间点均无明显改变（P>0.05）。结论 内皮细胞株EGFL7基因沉默时,可导致平滑肌细胞凋亡;EGFL7通过bcl-2相关信号通路调节SMC凋亡,而与Bax基因表达无关。     

纤连蛋白HepII功能域peptideV片段对角膜的渗透性、角膜内皮的影响与大鼠眼压和大鼠小梁网组织的作用研究

目的：探讨纤连蛋白 Hep II功能域peptideV片段对大鼠角膜的渗透性及角膜内皮细胞的影响,以及对大鼠眼压和大鼠小梁网组织的作用。 方法：通过点眼、结膜下注射及前房穿刺给予大鼠纤连蛋白 Hep II功能域peptideV片段后, 观察第3、5、7、8小时大鼠眼压的变化;通过激光共焦显微镜观察前房穿刺给药后第8小时、3天、14天角膜内皮细胞的形态并计数。点眼与结膜下注射后抽取大鼠前房水通过高效液相色谱分析检测前房水中短肽的浓度;透射电镜观察给予短肽后大鼠小梁组织超微结构的改变。 结果：通过点眼、结膜下注射给予大鼠纤连蛋白 Hep II功能域peptideV片段后,大鼠眼压无明显变化;高压液相色谱分析未检测出前房水中有效的短肽浓度;前房穿刺给予大鼠纤连蛋白 Hep II功能域Peptide V片段后可以显著降低大鼠眼压达5.71+2.10mmHg,Hep II功能域peptideV片段对角膜内皮细胞的形态与计数无明显影响。超微结构见小梁网细胞间区域增宽,细胞外基质减少。 结论：纤连蛋白 Hep II功能域peptideV片段通过点眼、结膜下注射不能渗透角膜进入前房;前房穿刺给予大鼠的纤连蛋白 Hep II功能域peptideV片段, 对于角膜内皮细胞是安全的,有可能通过重组肌动蛋白与小梁网间的细胞连接来降低大鼠眼压,     

树突状细胞DC-SIGN在免疫介导实验性肾炎肾小管间质损伤中的作用及抗P选择素功能域单抗的干预调节

目的 探讨树突状细胞（DC）表面特异的胞间黏附分子3捕获非整合素 （DC-SIGN）在免疫介导肾毒血清性肾炎（NTN）肾小管间质损伤中的作用,以及抗P选择素功能域单抗（PsL-EGFmAb）的干预调节。 方法 WKY大鼠随机分为正常对照组、模型组及 PsL-EGFmAb干预组。模型组注射预制的兔抗大鼠肾毒血清1 ml/kg;PsL-EGFmAb组在注射肾毒血清同时及注射后2 h,注入PsL-EGFmAb 2 mg/kg;正常对照组则注射等量生理盐水。随后于实验第4、7、14 天,分别观察大鼠肾功能及肾组织病理变化,并采用免疫荧光法检测肾组织DC-SIGN+DC分布;实时定量 PCR 检测P选择素、T细胞表达和分泌因子（RANTES）、肿瘤坏死因子?琢（TNF-?琢）、白细胞介素（IL）-10、干扰素（IFN）-?酌、IL-4的mRNA 表达;流式细胞仪检测肾脏分离DC表面主要组织相容性复合体Ⅱ（MHCⅡ）、DC-SIGN、CD80表达;细胞迁移试验及混合淋巴细胞反应（MLR）检测DC迁移与刺激 T 细胞的能力;ELISA法测定MLR上清中IFN-γ、IL-4含量。 结果 NTN大鼠第4 天起,未成熟DC-SIGN+ DC即以肾间质为主浸润并于14 d成熟,且迁移及刺激 T 细胞增殖能力增强,其肾内分布与新月体形成、肾小管间质损伤程度及肾功能改变呈正相关。此外,大鼠第4 天起肾内趋化因子及促炎因子RANTES、 TNF-?琢 mRNA表达持续上调,而抗炎因子IL-10 mRNA于第4 天明显增强随后呈下调趋势;至14 d时IFN-γ/IL-4 mRNA比值增高,与DC成熟状况呈正相关。经PsL-EGFmAb干预,伴随DC 表面 DC-SIGN 及相应共刺激分子CD80表达下降,DC成熟、迁移及刺激 T 细胞增殖能力受抑,肾内促炎因子下降而抗炎因子上调,Th1/Th2 偏移受到抑制。同时大鼠肾内新月体形成减少,肾小管间质损伤程度减轻,且肾功能改善。 结论 DC-SIGN介导了DC 肾间质浸润,并可能是局部免疫反应失衡以及肾小管间质病变的重要调控因素。PsL-EGFmAb在抑制DC 迁移的同时可通过靶向DC-SIGN调抑 DC成熟及功能,进而发挥防治效应。     

糖尿病患者总体认知功能和认知功能域的研究

目的：探讨糖尿病患者与正常对照组认知功能及认知域功能的差别，并对糖尿病患者认知功能评分与血糖之间的关系进行了相关分析研究。方法：选用痴呆扩充量表(dementia expansive scale，ESD)作为认知功能的评价工具，分别对糖尿病患者和正常对照组人群进行认知功能检测。并用独立样本t检验的方法，就两者认知功能评分进行显著性检验。同时，对糖尿病患者的认知功能评分与血糖的关系进行相关回归分析。结果：糖尿病患者的总体认知功能评分为(209．59&;#177;20．77)分，明显低于正常对照组(224．28&;#177;10．56)分，差异有非常显著性意义(t=4．208．P&;lt;0．001)。同时，糖尿病组记忆、抽象和结构等认知域的评分也低于正常对照组。相关回归分析结果提示，糖尿病患者总体认知功能评分、记忆功能与糖化血红蛋白有明显的相关关系，Pearson相关系数分别为-0．40(P&;lt;0．05)和-0．329(P&;lt;0．05)。结论：糖尿病认知功能障碍与血糖有明显的相关关系。