长爪沙鼠载脂蛋白E4外显子的克隆初报

目的 克隆并获得长爪沙鼠载脂蛋白ApoE基因E4外显子的序列.方法 根据Genbank中的相关序列,用自行设计的引物,通过常规的RT-PCR方法,从长爪沙鼠肝脏中克隆及测序得到所需要的基因序列.结果 长爪沙鼠载脂蛋白ApoE基因E4外显子长约987 bp,经比较发现最终测序的结果与大小鼠ApoE基因的同源性达到了73%～74%,与人ApoE基因的同源性达到了62%,与猪、牛ApoE基因的同源性达到了60%以上,与非人灵长类ApoE基因的同源性达到了57%,用DNAstar进行编码氨基酸预测,基因共编码263个氨基酸,已向genbank提交,登录号码EU780067.结论 利用基因进化的保守性通过PCR方法可以得到长爪沙鼠载脂蛋白E4基因的序列,本实验为筛选长爪沙鼠高脂血症模型的遗传多样性标记,为培育长爪沙鼠的血脂代谢新品系打下基础.     

长爪沙鼠肝脏基因组DNA甲基化水平检测

目的用间接ELISA法检测长爪沙鼠肝脏基因组DNA整体甲基化的水平。方法选取新生仔鼠6只(仔鼠组),3月龄鼠12只[其中青年对照组6只,高脂饮食诱发非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)青年模型组6只],8月龄中老龄鼠6只(中老龄),各组均为雄性,按组采集血清(新生鼠除外)用于总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)、低密度脂蛋白(LDL)检测,同时采集肝脏标本二份,一份作常规HE染色的形态学观察,一份提基因组DNA,用ELISA法试剂盒检测肝脏基因组DNA整体甲基化的水平[即5-甲基胞嘧啶(5-mc)含量]。结果青年模型组鼠及中老龄鼠均出现高脂血症,血清TC及TG均不同程度显著上升,青年对照组鼠血脂正常。病理学检查显示,青年模型组与中老龄组鼠肝脏出现较为明显的脂肪变性,而青年对照组肝脏无异常,新生仔鼠肝血窦中可见大量成堆分布有单核细胞和红细胞。肝脏基因组DNA整体甲基化水平,青年模型组沙鼠新生仔鼠老龄鼠5对照组鼠。结论长爪沙鼠NAFLD及年龄增加引起的脂肪性变程度与其基因组DNA甲基化水平相关,间接ELISA法检测肝脏基因组DNA整体甲基化水平简便、迅速,成本低,或可以作为评价其表观遗传学的一种方法。     

日本大耳白黑眼兔在不同生长阶段蛋白质营养与肝脏相关基因表达的关系

目的为研究两种呋塞米制剂的血浆呋塞米浓度变化情况。方法日本大耳兔分别用呋塞米制剂Ⅰ、Ⅱ灌胃,在灌胃后15、20、60、90、120、180、240min分别采集兔血浆样品,采用高效液相色谱法分析兔血浆样品中呋塞米含量。结果血浆呋塞米含量在0．2～5mg／L范围内线性关系良好（r=0．9996）。呋塞米制剂Ⅰ在服用后15min内血浆呋塞米浓度即达到峰值,其后迅速下降。而服用呋塞米制剂Ⅱ后兔血浆中呋塞米含量基本保持稳定,维持在1．2mg／L左右的水平。结论高效液相色谱法能够用以检测动物血浆中呋塞米含量;相比于呋塞米制剂Ⅰ,呋塞米制剂Ⅱ是缓释制剂。     

非酒精性脂肪肝大鼠PPARα基因表达及脂代谢和胰岛素水平的变化

目的 观察非酒精性脂肪肝(NAFLD)大鼠肝组织中PPARα基因的表达,并用PPARα激动剂进行干预,探讨其与胰岛素抵抗、脂代谢紊乱的关系.方法 大鼠随机分为①正常对照组、②高脂模型组、③PPARα激动剂干预组,利用高脂饮食建立大鼠非酒精性脂肪肝模型.12周后,检测大鼠血脂、肝功能、血糖、胰岛素水平及胰岛素抵抗指数;RT-PCR法分析PPARα基因的表达;观察肝脏的形态学改变.结果 PPARα激动剂可降低NAFLD大鼠转氨酶、血脂水平及胰岛素抵抗指数,可促进NAFLD大鼠中PPARα基因的表达;肝脏形态学明显改善.结论 PPARα激动剂能改善NAFLD大鼠脂质代谢紊乱, 有明显的保肝降酶作用, 具有适度的胰岛素增敏作用.PPARα及其配体在NAFLD发病机制及治疗中的进一步深入研究,将为临床防治NAFLD提供新的思路.     

WHBE兔与日本大耳白兔不同生长阶段肠道免疫功能的比较研究

目的 比较WHBE兔与日本大耳白(JW)兔不同生长阶段肠道免疫功能的差异.方法 分别选取离乳和2月龄WHBE兔,日本大耳白兔各8只,采用ELISA法,分别测定其血清及小肠匀浆液中分泌型IgA(SIgA)、P物质(SP)、IL-4、IFN-γ、生长抑素(SS)和血管活性肠肽(VIP)的含量水平.结果 成年WHBE兔血清及小肠组织sIgA分泌水平,SS、SP含量较离乳WHBE兔明显降低,IFN-γ/IL-4比值明显升高,特别是与成年JW兔在小肠组织IgA分泌水平,SS、IFN-γ和IL-4含量方面具有显著性差异.结论 WHBE兔的肠道免疫功能明显低于JW兔,可作为肠易激综合症研究的实验动物.     

灵芝三萜酸经Pnpla3基因的降脂效果体外试验——基于长爪沙鼠肝原代细胞的脂变模型

目的建立长爪沙鼠Pnpla3基因敲减的肝原代细胞的脂变模型,并用于评价灵芝三萜酸的降脂效果。方法分离培养长爪沙鼠肝原代实质细胞,以棕榈酸(PA)诱导成肝脂变模型,根据Pnpla3三个外显子序列设计、合成三对Pnpla3基因的干扰RNA载体,并通过q PCR及Western blot法检测Pnpla3的表达量及干扰效率筛选出一对稳转肝实质的干扰载体。以高(1μmol/L)、中(0.1μmol/L)、低(0.01μmol/L)三个剂量的灵芝三萜酸培养细胞,并以阳性药物蛋氨酸(7μmol/L)为对照,检测干扰Pnpla3基因后的细胞甘油三酯(TG)的含量以进行降脂效果观察。结果诱导24 h内,长爪沙鼠肝脂变细胞脂滴增加的较多且大多数细胞形状正常的PA 400μmol/L为造模的合适浓度,以Pnpla3的第二外显子为靶点设计的si RNA2组敲低效果最好,干扰效率高于70%。干扰Pnpla3基因可以起到降低细胞内TG的作用,单独加入中高剂量的灵芝三萜酸有明显的降脂效果(P <0.01),干扰Pnpla3基因与加入灵芝三萜酸的降脂效应具有累积作用(P <0.01)。结论建立了长爪沙鼠肝实质原代细胞的脂变模型,灵芝三萜酸对干扰Pnpla3基因后的长爪沙鼠肝实质细胞中TG的含量有明显的抑制或减轻作用,灵芝三萜酸降脂效应与磷脂代谢相关2个通路(ko00561,ko00564)中Pnpla3基因的表达相关。     

利用双重PCR.技术研究长爪沙鼠的微卫星结构

目的 为了建立快速检测长爪沙鼠群体遗传多样性的方法及获得Z:ZCLA长爪沙鼠封闭群现用微卫星位点的结构.方法 利用17个微卫星位点(9个来自长爪沙鼠,8个来自大小鼠)进行了PCR反应体系及反应条件的优化,组合了6组双重PCR及两个复合式点样,用上述8个组合对普通级z:ZCLA长爪沙鼠封闭群43、44、45三个世代核心群各.100只种鼠进行遗传检测.结果 三个世代的300只种鼠的检测结果表明,9个长爪沙鼠位点均为微卫星,其中7个位点为完全型的微卫星,1个为复合型,1个为不完全型,多态性主要表现在核心序列的重复;来自大小鼠的8个微卫星位点,有7个在z:ZCLA长爪沙鼠核心群中得到有效扩增,只有3个位点在三个世代中均有出现,对测序结果分析后发现,其核心序列均为小卫星.结论 来自长爪沙鼠的位点,无论结构还是遗传方式均符合微卫星遗传标记的特点,可用作检测长爪沙鼠的群体遗传多样性.     

用DNA指纹技术分析Z:ZCLA长爪沙鼠的遗传质量

目的探讨清洁级Z：ZCLA长爪沙鼠遗传组成和遗传质量。方法用重组33．6小卫星探针对清洁级Z：ZCLA长爪沙鼠核心群的20个个体进行Southern blotting检测。结果在7～15kb的分子范围内，该品系所有个体产生5～6务分子杂交条带；其中在8～9kb位置上，某些个体的分子标记呈多态性变化，其余位置的标记无多态性，经统计，该品系核心群的个体间相似系数约为0．95。结论该群体的多态性不够高，可能与因群体样本含量较小有关。     

基于我国临床中药师教育的几点思考

1培养临床中药师的必要性自古以来,我国医药不分家,医师根据临床治疗的需要进行处方筛选、剂型设计,甚至亲自制备。但是随着中医药事业的发展,学科分工越来越精细,中医临床和中药生产逐渐脱节,医生只负责诊断疾病和立法处方,中药师只是在医院制剂室中负责药品调配,对于处方用药、剂量是否合理,药物间     

对《中国药典》2010年版丁香药材中丁香酚含量测定方法的探讨

目的 改进丁香药材中丁香酚的含量测定方法.方法 HPLC法测定丁香酚的含量,流动相为甲醇-1％醋酸水(55∶45),检测波长为280 nm,并与《中国药典》2010年版一部的测定方法进行比较.结果 新建方法测定丁香中丁香酚的含量高于《中国药典》方法,新方法灵敏、准确、重现性好.丁香酚在0.1605～9.6504 μg范围内线性关系良好,r=0.9999,平均加样回收率为100.27％,RSD=0.82％.结论 HPLC测定法可用于丁香药材的质量控制,为改进丁香的含量测定方法提供依据.