地龙提取物对实验性血栓的溶解作用及有效成分的研究

地龙组织水溶性提取物中含有能够溶解家兔实验性血栓和人全血凝块、多血小板血浆凝块及人纯纤维蛋白凝块的“纤溶酶样”物质(称地龙溶栓酶)。体外实验,地龙组织粗提取液的溶栓时间为5.55±0.08小时,蛋白提取液的溶栓时间为5.67±0.12小时。DEAE纤维素及Sephadex G-50柱层析分别显示5个蛋白峰和4个蛋白峰,各峰洗脱液的溶栓实验结果表明溶栓有效成分存在于DEAE纤维素柱层析的第5蛋白峰和Sephadex G-50拄层析的第2蛋白峰。Sephadex G-50柱层析第2蛋白峰洗脱液的聚丙烯酰胺凝胶电泳显示7条区带,其中有3条区带具有明显的溶栓作用。     

谓葆对小鼠肠蠕动和排便影响实验研究

目的观察谓葆对小鼠肠蠕动和排便功能的影响。方法以昆明种小鼠为研究对象,测定谓葆对正常小鼠小肠蠕动和排便指标。结果谓葆对正常小鼠的肠蠕动有促进作用,实验组与对照组差异有显著性。谓葆可缩短便秘小鼠的首次排便时间,增加便秘小鼠的排便次数和排便重量。结论谓葆对小鼠的肠道运动功能有正向的调节作用。     

缺血再灌注大鼠肝组织细胞核NF-κB提取

应用液氮快速冷冻组织破碎技术,将缺血再灌注大鼠肝组织破碎,去除组织细胞碎片。应用高盐溶液提取法、高速离心法分离纯化大鼠肝细胞核蛋白。提取物经凝胶滞留电池分析其ＮＦ－κＢ成分,结果满意。该方法的建立,为进一步研究核转录因子活性及其调控基因的表达提供了基础。     

重组γ干扰素的表达与纯化

目的 探讨γ干扰素在大肠杆菌中的表达及纯化方法,为下一步批量生产提供实验依据。方法 应用ＤＮＡ重组技术把中国人淋巴细胞ｍＲＮＡ反转录产物ＩＦＮ－γｃＤＮＡ克隆到析核表达质料ｐＢＶ２２０上,构建出ｐＢＶＩＦＮ高效表达载体,转化大肠杆菌ｐｌｙｓｓ。通过温度诱导,高效表达ＩＦＮ－γ ｃＤＮＡ。然后,经过包涵体溶解、复性、浓缩及ＤＥＡＥ离子交换层析,使γ干扰素纯化。结果 ＩＦＮ－γ ｃＤＮＡ表达水平占菌体     

重组人肝细胞生长因子重链在大肠杆菌中的表达研究

目的 观察经过转录前加工、修饰后克隆至表达载体pBV220中的人肝细胞生长因子α链cDNA在肠杆菌的表达情况,优化表达条件,以建立hHGFα原核高效表达体系,并进一步研究hHGF-α蛋白的生物学功能。方法与结果 将重组表达质粒pBV220-hHGF-α转化大肠杆菌DH5a、Plyss,通过升温诱导法,即将温度由30℃升高到42℃,诱导外源基因表达。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测hHGF-α蛋白表达,电泳图谱显示一特异的分子量与单体hHGF-α链吻合的蛋白带。SDS-PAGE光密度扫描对外源基因表达产物进行初步产量,表达产物分别占细菌可溶性蛋白总量的25%、30%。进一步行West-ern-blot对表达产物进行定性,外源基因表达蛋白与特异的hHGF-α抗体呈阳性反应。结论 成功地建立了hHGF-α链原核高效表达工程菌系。     

重组人肝细胞生长因子α的纯化与活性测定

目的纯化重组人肝细胞生长因子α(rhHGFα)包涵体,复性并测定其活性。方法大肠杆菌中表达的rhHGF琢以包涵体形式存在,表达量约占菌体总蛋白的25%。离心分离包涵体,用8mol/L尿素溶解,梯度稀释复性。经SephadexG75凝胶过滤和POROSHQ阴离子交换纯化,噻唑蓝法(MTT)测定活性。结果rhHGF琢纯度达到90%以上,其刺激肝细胞生长的活性达到rhHGF标准品的80%。结论建立了纯化rhHGF琢的技术路线,rhHGF琢具有刺激原代培养大鼠肝细胞生长的作用。     

人脐静脉内皮细胞的原代培养

目的建立一种能大量分离人脐静脉内皮细胞(HUVEC)且操作方便的体外培养方法。方法采用不同浓度的Ⅱ型胶原酶(0.05%,0.1%和0.2%)对HUVEC进行灌注,并分别孵育不同的时间(10min,13min,15min和18min)进行消化,观察细胞的形态、数量以及生长融合情况。结果采用0.1%的胶原酶消化10-13min为最佳条件,经光学显微镜观察培养的细胞数量较多,生长、繁殖状态良好,培养3d左右细胞可达到融合状态。结论本实验建立的胶原酶法消化HUVEC培养方法简便,细胞获得量较多且生长状态良好。     

两种RGD模拟肽抗兔血小板聚集活性研究

目的研究两种RGD模拟肽(NB05和NB06)的抗兔血小板聚集活性.方法体外检测RGD肽抑制家兔ADP诱导血小板聚集率,计算RGD肽对血小板聚集的抑制率.体内颈动静脉旁路血栓模型检测两种RGD肽对形成血栓湿重的影响.结果NB05和NB06体外抗家兔血小板聚集的IC50值分别为(33.34±3.58)和(8.69±1.34)μmol·L-1;NB05和NB06均使血栓湿重显著减小(P＜0.01),NB06的抗血栓活性较NB05高(P＜0.05).结论NB05和NB06均具有较强的抗血小板聚集和抗血栓形成活性.     

一种新型蚯蚓脱氧核糖核酸酶相对分子质量的测定

目的测定从蚯蚓组织中提取纯化的一种新型脱氧核糖核酸酶的相对分子质量。方法采用凝胶过滤层析法、十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)法和基质辅助激光解吸附电离飞行时间质谱法三种方法测定一种新型蚯蚓脱氧核糖核酸酶(EWD1)的相对分子质量。结果凝胶过滤层析法、SDS-PAGE法和质谱法测定其相对分子质量分别为126440、136320和157190。结论EWD1由两个亚基组成,其相对分子质量最终确定为157190。     

赤子爱胜蚓脱氧核糖核酸酶酶动力学研究

目的对赤子爱胜蚓中一组新型脱氧核糖核酸酶(EWDs)进行酶动力学研究。方法运用单相酶扩散法(SRED)、紫外分光光度法和林-贝氏(Lineweaver-Burk)作图法。结果EWDs的最适温度均为37℃。EWD1的最适pH为5.2,Km为1.58mg/ml,Vmax为5.36mg·ml-1·min-1;EWD2的最适pH为4.4,Km值是3.95mg/ml,Vmax值为2.87mg·ml-1·min-1;EWD3的最适pH为4.8,Km值是1.52mg/ml,Vmax值为4.89mg·ml-1·min-1。Mn2+和Ca2+是EWDs的抑制剂,Mg2+仅抑制EWD3的活性。结论蚯蚓组织中发现的此组脱氧核糖核酸酶具有特殊的酶学性质,区别于已知的脱氧核糖核酸酶类。