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121.
氨甲酰胆碱对人子宫平滑肌细胞内钙的影响 总被引:3,自引:0,他引:3
目的检测氨甲酰胆碱(CCh)对人未妊娠峡部子宫平滑肌细胞(CMC)内游离钙离子浓度([Ca2+]i)及生物合成1,4,5 三磷酸肌醇(IP3)的影响,探讨M受体激动剂升高人子宫平滑肌[Ca2+]i作用与影响膜肌醇磷酯代谢的关系。方法应用荧光分光光度计检测[Ca2+]i水平;应用同位素放射免疫分析法检测IP3水平。结果基础状态下CMC[Ca2+]i为(178±21)nmol·L-1,1、10和100μmol·L-1CCh使[Ca2+]i升高分别为(244±31)、(326±39)和(437±61)nmol·L-1,呈剂量依赖性;细胞外无钙时CCh升高[Ca2+]i作用被减弱;10μmol·L-1阿托品(Atr)可阻断CCh升高[Ca2+]i的作用。基础状态下CMC内IP3水平为(815±86)nmol·g-1Pro。1,10和100μmol·L-1的CCh可诱导IP3水平升高,其峰值是在CCh孵育5min时,此时升高的IP3水平分别为(107±15),(135±31)和(148±29)nmol·g-1Pro。10μmol·L-1Atr可显著抑制CCh促IP3生成作用。结论CCh通过激动M受体使CMC的[C? 相似文献
122.
目的 观察老年大鼠脑细胞内钙浓度 (〔Ca2 〕i)的变化及βAP对〔Ca2 〕i的影响。方法 以Fura 2 /AM为荧光指示剂 ,采用荧光分光光度计测定急性分离的大鼠脑〔Ca2 〕i。结果 静息状态下老年大鼠脑〔Ca2 〕i及对高钾除极化的反应均明显低于青年对照组 (P <0 0 1 ) ,βAP对高钾除极化下脑〔Ca2 〕i的增加有明显增强作用 (P <0 0 1 ) ,但其增强作用在老年大鼠与青年大鼠间无明显差异 (P >0 0 5)。结论 老年大鼠脑〔Ca2 〕降低 ,βAP能使老年动物脑细胞内钙更明显超载 ,且在相同情况下老年神经元的受损更加严重。 相似文献
123.
目的 构建编码弓形虫RH株表面抗原P30、P22复合基因的真核表达重组质粒, 为进一步表达融合蛋白及研制核酸疫苗做准备。 方法 用弓形虫RH株腹腔接种小鼠,收集腹水,酚/氯仿法抽提弓形虫基因组 DNA;用 PCR技术从基因组DNA中扩增编码表面抗原 P30、P22 的基因片段,分别重组入 pMD18 T载体中。将 pMD18 T载体中的P30、P22基因片段分别酶切,定向克隆入 pUC18克隆载体中, pUC18 P30 P22 中的 P30 P22 片段经酶切、纯化后,亚克隆入 pcDNA3.1( )真核表达载体,用酶切、PCR及测序的方法对重组子进行鉴定。 结果 从弓形虫 RH株基因组DNA中扩增出特异的P30及P22片段;大小均与预测值相符;克隆 pUC18 P30 P22 重组质粒的酶切片段分别与 P30、P22基因大小一致;经亚克隆、筛选鉴定获得了 pcDNA3.1 P30 P22重组质粒,所测P30、P22基因序列与文献报道一致。结论 成功构建弓形虫 pUC18 P30 P22重组质粒和 pcDNA3.1 P30 P22 重组质粒,为研制弓形虫 DNA疫苗奠定了基础。 相似文献
124.
125.
目的 构建弓形虫棒状体蛋白18(ROP18)和微线体蛋白2(MIC2)的基因融合的重组真核表达质粒,并在转录和翻译水平进行鉴定。方法 利用分子克隆技术构建重组真核表达质粒pBudCE4.1-ROP18-MIC2,经PCR、酶切及测序鉴定正确后,体外转染人包皮成纤维细胞(HFF),采用RT-PCR在48h时检测转录水平, SDS-PAGE在72h时检测蛋白表达。结果 重组真核表达质粒pBudCE4.1-ROP18-MIC2构建正确,经RT-PCR、SDS-PAGE鉴定,弓形虫ROP18、MIC2可在HFF细胞中瞬时表达。结论 成功获得重组真核表达质粒pBudCE4.1-ROP18-MIC2,为进一步研究弓形虫疫苗的免疫保护性奠定基础。 相似文献
126.
弓形虫SAG1单基因疫苗与SAG1-ROP2复合基因疫苗的免疫效果观察 总被引:11,自引:0,他引:11
目的构建弓形虫主要表面抗原SAG1单价基因疫苗及其与棒状体蛋白ROP2的复合基因疫苗,接种BALB/c小鼠,观察疫苗的免疫保护性。方法构建重组质粒pcDNA3.1SAG1及pcDNA3.1SAG1ROP2。将两核酸疫苗分别免疫小鼠,ELISA法检测血清IgG抗体、IFNγ、IL4;流式细胞仪测定T细胞亚群;弓形虫速殖子腹腔攻击感染观察小鼠生存时间。结果获得pcDNA3.1SAG1、pcDNA3.1SAG1ROP2重组质粒;pcDNA3.1SAG1ROP2组小鼠IgG抗体(P<0.05)、IFNγ(P<0.01)及CD8+细胞比例(P<0.05)均高于pcDNA3.1SAG1组;实验组组均未测到IL4;复合基因组感染弓形虫后生存时间较单基因组延长(P<0.01)。结论弓形虫不同生活阶段的抗原基因复合疫苗较单基因疫苗具有更好的免疫保护性。 相似文献