清脂胃舒佐餐茶HPLC法指纹图谱的研究及4个成分的含量测定

目的 建立清脂胃舒佐餐茶水溶性成分的高效液相色谱（HPLC）法指纹图谱,并测定没食子酸、绿原酸、柚皮苷、橙皮苷的含量。方法 采用HPLC法,色谱条件：Kromasil C₁₈柱（250 mm×4.6 mm, 5 μm）;流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液,梯度洗脱;流速为0.8 ml/min;检测波长为300 nm;柱温为35℃。结果 通过中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2004A）,确定了清脂胃舒佐餐水溶性成分的HPLC指纹图谱共有模式,标定了26个共有峰,整体相识度为0.934~0.995;并测定了10批制剂中绿原酸、柚皮苷、橙皮苷的含量分别为0.672、0.194、1.247和0.532 mg/g,RSD分别为1.35%、1.89%、0.69%和0.79%。结论 清脂胃舒佐餐水溶性成分的HPLC指纹图谱及其中没食子酸、绿原酸、柚皮苷、橙皮苷的含量检测方法简便、稳定、科学,为本品的质量控制提供了科学依据。     

桂皮醛对抗血小板聚集和血栓形成的特点

目的:观察桂皮醛对血小板聚集和血栓形成的影响。方法:实验于2005-07/11在第四军医大学药学系药物研究所实验室完成。①体外血小板聚集实验:制备大鼠洗涤血小板,观察0.15,0.30和0.60mmol/L桂皮醛对胶原蛋白(100mg/L)和凝血酶(3U/mL)诱导的大鼠体外血小板聚集的抑制作用。桂皮醛购自中国医药集团上海化学试剂公司,纯度>98%。②出、凝血时间测定及胶原蛋白-肾上腺素诱发体内血栓形成实验:取BALB/c小鼠60只,随机分成6组(n=10),生理盐水组灌胃生理盐水;阿司匹林组灌胃阿司匹林100mg/kg为阳性对照;还设置桂皮醛灌胃(250,500mg/kg)和腹腔注射(50,100mg/kg)4个剂量组。所有动物每天给药1次,10μL/g,连续11d。第10天给药后1h采用断尾法和玻片法测定小鼠出血、凝血时间;第11天给药后1h观察小鼠尾静脉注射胶原蛋白(3.57mg/kg)-肾上腺素(0.143mg/kg)混合血栓诱导剂后5min内的存活率。③动-静脉旁路血栓形成实验:SD大鼠48只,随机分为6组(n=8),生理盐水组灌胃生理盐水;阿司匹林组灌胃阿司匹林80mg/kg为阳性对照;桂皮醛分为灌胃200,400mg/kg组和腹腔注射40,80mg/kg4个剂量组。所有动物每天给药1次,10μL/g,连续10d。末次给药后1h测定动-静脉旁路丝线上的血栓湿质量。结果:小鼠60只和大鼠48只全部进入结果分析。①桂皮醛能够明显抑制胶原蛋白和凝血酶诱导的大鼠体外血小板聚集,并呈剂量依赖性,与对照组比较差异显著(P<0.05,0.01)。②桂皮醛显著延长小鼠出、凝血时间,与对照组比较差异非常显著(P<0.01)。③胶原蛋白-肾上腺素诱发性小鼠肺动脉栓塞存活率:生理盐水组为10%,阿司匹林组为80%,桂皮醛各剂量组为70%～100%。④动-静脉旁路丝线上的血栓湿质量:阿司匹林组和桂皮醛各剂量组均低于生理盐水组(P<0.01);桂皮醛各剂量组对大鼠血栓的抑制率范围为30%～43.4%。结论:桂皮醛体外能够明显抑制胶原蛋白和凝血酶诱导的大鼠血浆中血小板的聚集;体内能够显著延长小鼠断尾后的出、凝血时间,减轻大鼠动-静脉旁路丝线上血栓的质量。提示桂皮醛具有明显抗血小板聚集和体内抗血栓作用。     

葛根素预防压力过载性心脏肥大的保护作用及机制

目的研究葛根素对心脏肥大大鼠的保护作用,并探讨其相关机制。方法将主动脉缩窄术(降主动脉结扎,aortic banding,AB)所致心脏肥大的40只雄性Spraguee Dawley大鼠(体质量80~100g),分为阳性对照组(control组)、假手术组(shamoperated,SO组)、葛根素组(Pue组)和雷帕霉素组(RAPa组)。检测各组经相应药物治疗后,腺苷酸活化蛋白激酶(5′-adenosine monophosphate kinase,AMPK)的活性及自噬功能。同时,体外检测异丙肾上腺素和3-甲基腺嘌呤所致的心肌影响。结果葛根素组治疗3周后,大鼠明显恢复自噬;葛根素治疗6周后,有效地限制大鼠心脏细胞肥大和细胞凋亡。雷帕霉素组具有相似作用。体外研究,葛根素对异丙肾上腺素所致的H9c2细胞也具有类似的抗肥大和抗细胞凋亡作用。用3-甲基腺嘌呤预处理H9c2细胞,抑制自噬功能后,葛根素的保护作用被阻断。结论葛根素通过AMPK/mTOR信号途径,部分恢复细胞自噬功能,发挥抗心脏细胞肥大和抗细胞凋亡作用。     

HPLC法测定大鼠血浆中色胺酮的浓度及药代动力学参数

目的建立测定血浆中色胺酮含量的HPLC法,并用于色胺酮在大鼠体内的药代动力学研究。方法采用ODSC18色谱柱(4.6 mm×250 mm),流动相为乙腈∶水(47∶53),流速为1.0 ml.min-1,检测波长为251 nm,柱温30℃,进样量20μl,内标物为桂皮醛。按56 mg.kg-1剂量给大鼠灌胃后,用HPLC法测定给药后不同时刻大鼠血浆中色胺酮的浓度。采用DAS 2.1.1软件分析,计算药动学参数。结果色胺酮在0.0183～1.1712 mg.L-1范围内线性关系良好(r2=0.999),最低定量限为0.02 mg.L-1。回收率大于95.0%,其日内、日间RSD均小于8%。大鼠灌胃色胺酮56mg.kg-1后,♀和♂T12分别为4.314和5.597 h,Tmax分别为5.2和4.6 h,Cmax分别为1.887和2.620 mg.L-1,AUC0→t分别为12.1和14.70 mg.h.L-1。结论本方法操作简便,准确,灵敏度高、重复性好,可用于色胺酮血药浓度检测及药代动力学研究。     

科学合理使用中药资源,大力推进中药产业化发展——对中药产业发展的思考

如何加快中药材资源的科学合理使用及产业化是我国政府和广大科技人员十分关注的重大课题。分析我国中药资源和开发使用现状,找出问题和不足,探讨新形势下中药新药研究和开发策略,对于促进我国中药产业化发展具有重要意义。     

丹参素促大鼠心肌细胞及心脏干细胞增殖的作用

目的：大鼠原代心肌细胞及心脏干细胞（CSCs）培养条件的筛选及丹参素（DS-182）对两种细胞体外增殖的影响。方法：对比组织块培养法及差速培养法,选取适宜培养基、消化液浓度、消化时间、差速贴壁时间及心脏成纤维细胞（CFs）抑制剂等因素。分别用MTT比色法、ELISA法及流式细胞术（FCM）检测丹参素对大鼠心肌细胞及CSCs体外增殖的影响。结果：确定DMEM/F12 1∶1培养基、100 ml/L胎牛血清（FBS）、2.5 g/L胰蛋白酶、5 min/次×5次的消化时间及120 min的差速贴壁时间为最适分离纯化条件。MTT比色法检测显示,与空白对照组相比,经浓度为7.8×10-4~1×10-1 mol/L的DS-182处理12、24、48和72 h后,细胞的吸光度（A）值明显增加（P〈0.05）。ELISA法检测显示,与空白对照组相比,经浓度为3.9×10-4~1×10-1 mol/L的DS 182处理24 h后,细胞的A值明显增加（P〈0.05）。FCM检测显示,经浓度为0.1 mol/L的DS-182处理24 h后,c-kit＋的细胞数占细胞总数的比例增加了27.0%。结论：改良了一套较为完整的大鼠心肌细胞及CSCs的分离纯化方法。DS-182在一定浓度下（7.8×10-4~1×10-1 mol/L）对大鼠心肌细胞及CSCs的增殖具有明显的促进作用。     

元胡止痛片及其主要成分对大鼠实验性痛经的影响

目的:评价元胡止痛片及其主成分对痛经模型大鼠的镇痛作用并初步探究其镇痛机制。方法:苯甲酸雌二醇与缩宫素联用引起大鼠扭体反应,然后观察元胡止痛片及其主成分对其影响,并测定子宫组织和血清中SOD活性及MDA含量,藉此评价试药的药效及其可能的作用机制。结果:元胡止痛片(0.698g/kg/d)及其主成分延胡索乙素(0.07g/kg/d)和欧前胡素(0.025g/kg/d)具有显著延长痛经模型大鼠的潜伏期及减少扭体次数的作用,主成分配伍的镇痛效果优于单用,元胡止痛片及其主成分欧前胡素能明显提高子宫组织和血清SOD活性,降低MDA含量。结论:元胡止痛片对痛经模型大鼠有显著镇痛效果,可能为延胡索乙素与欧前胡素协同作用。欧前胡素镇痛机制可能与提高SOD活性,降低MDA含量有关,但延胡索乙素通过何种途径与欧前胡素产生协同作用有待进一步研究。     

染料木素和17β-雌二醇对卵巢切除大鼠学习与记忆的影响

目的: 探讨染料木素(genistein, GST)和17β-雌二醇(17-βestradiol, E2)对卵巢切除大鼠认知功能的影响及可能的机制. 方法: 选用成年雌性SD大鼠40只,随机分为假去势组(Sham)、去势组(卵巢切除术,ovariectomy, OVX)、雌二醇组(OVX E2)、GST高剂量组(GST-h)及GST低剂量组(GST-L),每组8只. 采用Morris水迷宫方法观察去卵巢大鼠学习记忆的改变及GST和E2对其改善作用,用比色法测定了大鼠前脑皮层和海马中乙酰胆碱脂酶(acetylcholinesterase, Ache)的活性,观察了药物对此酶活性的影响. 结果: OVX后7 wk大鼠出现学习记忆障碍,表现为OVX组逃避潜伏期较Sham组明显延长(88.9±35.1) s vs (51.7±36.9) s, P<0.05,记忆频度下降(18.7±2.7) vs (24.9±4.5), P<0.05;前脑皮层、海马的Ache活性升高(286.7±27.8) μkat/L vs (245.6±36.1) μkat/L, (363.9±46.1) μkat/L vs (275.8±52.8) μkat/L, P<0.05, P<0.01. 用药后,E2组逃避潜伏期及记忆频度较OVX组有明显改变(57.3±21.7) s vs (88.9±35.1) s, (25.5±5.4) vs (18.7±2.7), P<0.05, P<0.01; GST-L组记忆频度也较OVX组增加(22.7±2.0) vs (18.7±2.7), P<0.05;GST及E2能降低因OVX造成的大鼠前脑皮层和海马中Ache的活性的升高(P<0.01). 结论: GST和E2有改善因OVX造成的大鼠学习记忆减退作用,其可能的机制是抑制了脑内Ache的活性,使乙酰胆碱的降解减少.     

染料木素7,4’-硝氧基丁酸酯的合成及其对MC3T3-E1细胞的增殖作用

目的为改善染料木素的治疗效果,对其进行结构修饰。方法通过成酯、硝基化反应,在染料木素的7-位,4’-位进行修饰,得到一个硝基酯类化合物;并考察得到的化合物对MC3T3-E1细胞的促增殖作用。结果得到的化合物经核磁、质谱等结构鉴定与设计目标一致。该化合物能够显著促进MC3T3-E1细胞的增殖,且呈一定的时间、剂量依赖关系。结论染料木素7,4’-硝氧基丁酸酯较母体药物更好地促进成骨细胞的增殖,为骨质疏松症治疗药物的开发提供新的参考。     

安迪粉针剂诱导慢性粒细胞白血病K562细胞凋亡的细胞学研究

目的:探讨安迪注射剂(Andi injection,Adi)对慢性粒细胞白血病K562细胞株凋亡的影响。方法:流式细胞仪技术检测细胞凋亡变化;使用荧光显微镜和透射电镜观察细胞形态学改变;评价Adi对K562细胞株凋亡的影响。结果:流式细胞仪检测结果显示10、20μg/ml Adi处理组K562细胞的凋亡率分别为50%和39%,明显高于对照组的10%(P<0.05);荧光显微镜和电镜下可见K562细胞呈典型凋亡样改变。结论:Adi能明显抑制K562细胞增殖,促进细胞凋亡。