斑点免疫结合法测定卵黄抗体的活性

背景:哺乳动物产生的抗体和鸡产生的卵黄抗体在物理、生物活性方面存在差异。卵黄抗体能耐酸耐热,可口服用来防治动物和人类的肠内感染疾病,且对发展常规的诊断免疫实验有益。传统的ELISA法检测卵黄抗体比斑点免疫结合法费时。目的:应用斑点免疫结合法检测卵黄抗体的稳定性。设计:开放性实验。单位:解放军成都军区昆明总医院输血科。材料:实验于2006-01/06在解放军成都军区昆明总医院完成。选取30周龄的白色莱杭母鸡2只,以HLA-A*0201α链作为抗原,纯化抗原的总蛋白浓度0.04g/L,相对分子质量为32000(自行制备);硝酸纤维素膜(进口分装);脱脂奶粉(安怡产品,批号20051220);DAB(博士德公司);辛酸(上海星火化工厂生产);硫酸铵(汕头市光华化学厂生产)。方法:①抗原HLA-A*0201α链以总蛋白浓度0.04g/L纯化后,进行鸡卵黄抗体的纯化,采用SDS-PAGE电泳检测卵黄抗体的纯化结果。②1μL抗原被点样在硝酸纤维素膜的中心,于37℃孵箱中烤干,浸于1mL的PBST中,37℃孵箱90r/min封闭振荡15min,重新更换1mL的PBST,加入一抗卵黄抗体,终浓度为10mg/L。在37℃孵箱振荡30min后,硝酸纤维素膜用PBST洗3次。加入二抗标记HRP的鼠抗鸡卵黄抗体,孵育30min后,硝酸纤维素膜用PBST洗3次,通过用DAB试剂孵育来显色。阳性反应产生一个深棕色的斑点,表明卵黄抗体具有较好的活性;斑点变浅表明失去部分活性;斑点消失表明失去全部活性。根据斑点的灰度值变化对照标准样品,可计算卵黄抗体剩余的百分活性。③卵黄抗体用磷酸盐缓冲液调整为1,0.1,0.01g/L3种蛋白浓度,室温下放置4个月,每个月分别从各种浓度的样品中取10μg,采用斑点免疫结合法检测卵黄抗体室温稳定性。④卵黄抗体分别置于7个EP管,100μL/管,编号1～7。1～3号管用1mol/L的HCL分别调整pH值为5,3,2;4～6号管用1mol/L的NaOH分别调整pH值为9,11,12;7号管的pH值为7(中性),不加酸或碱。1～7号管均放在37℃孵箱中3h,每隔1h各管分别取10μg样品,采用斑点免疫结合法检测卵黄抗体不同pH值条件下的稳定性。⑤卵黄抗体分别置于6个EP管,10μL/管,编号1～6。按顺序编号各管分别于30,40,50,60,70,80℃水浴15min,然后4℃冰箱冷却,每管取样10μg,以未经过加热处理的样品作为标准对照,采用斑点免疫结合法检测卵黄抗体热稳定性。主要观察指标:①卵黄抗体SDS-PAGE电泳检测。②卵黄抗体室温稳定性检测。③卵黄抗体不同pH值稳定性检测结果。④卵黄抗体热稳定性检测。结果:①纯化的卵黄抗体经SDS-PAGE电泳后有两条主带,重链相对分子质量约66000,轻链相对分子质量约25000。②1,0.1,0.01g/L的卵黄抗体,室温下放置4个月后仍然保留部分活性。③pH5～9时37℃孵育3h后,卵黄抗体仍有部分活性;在pH低于5或高于9的条件下37℃孵育3h后,卵黄抗体失去全部活性。④纯化的卵黄抗体分别置于6个EP管中,1～4号管的卵黄抗体仍有活性,第5管和第6管出现白色沉淀,可能是较高温度下蛋白变性引起的。结论:卵黄抗体稳定性较好,斑点免疫结合法能够快速简单的证明和描述卵黄抗体的功能活性,且只需要微量抗原和抗体,斑点特异,能同时处理大量样品。     

鼻腔鼻窦IgG4相关性疾病10例临床病理学分析

目的探讨鼻腔鼻窦IgG4相关性疾病(IgG4-RD)的临床病理特征、诊断及鉴别诊断。方法回顾性分析2016年3月至2021年3月, 以鼻炎或鼻肿物为主诉, 在首都医科大学附属北京同仁医院就诊并行鼻黏膜活检的患者。依据2019年美国风湿病学会(ACR)/欧洲抗风湿病联盟(EULAR)制定的IgG4-RD国际分类诊断标准筛选出鼻腔鼻窦IgG4-RD患者10例, 观察分析临床特征、组织病理学形态及IgG和IgG4免疫组织化学表达情况。结果 10例患者中男性5例, 女性5例, 年龄范围30～71岁, 中位年龄52.7岁。6例患者可见鼻息肉/鼻肿物, 4例伴泪腺肿胀。4例血清IgG和IgG4浓度升高。镜下10例均表现为鼻腔或鼻窦黏膜大量淋巴细胞和浆细胞浸润以及不同程度的纤维化, 4例可见闭塞性血管炎。鼻黏膜IgG4+浆细胞计数均>10个/HPF, 平均数为67个/HPF, 严重纤维化病例IgG4计数明显减少, 6例IgG4+/IgG+浆细胞>40%。结论鼻腔鼻窦IgG4-RD是系统性疾病的局部表现, 是IgG4-RD很少累及的部位, 确诊需结合临床症状、影像学、血清学及组织病理学评分...     

实时定量聚合酶链反应检测石蜡包埋B细胞淋巴瘤组织克隆性IgH基因重排

我们利用SYBR Green Ⅰ荧光染料，应用实时定量PCR（RQ-PCR）检测了15例B细胞非霍奇金淋巴瘤（B-NHL）患者免疫球蛋白重链（IgH）基因重排情况，以探讨克隆性IgH基因重排在B-NHL诊断和鉴别诊断上的价值。     

按不同时间方案注射的乙肝免疫球蛋白与乙肝疫苗对小鼠脾脏淋巴细胞 亚群的影响

目的：观察按不同时间方案注射的乙肝免疫球蛋白(HBIG)与乙肝疫苗对小鼠脾脏淋巴细胞亚群的影响。方法：饲养BALB/c小鼠120只(雌雄各60只),将小鼠按HBIG与第1针乙肝疫苗接种时间间隔分为三组(0周组、2周组、4周组),每组小鼠按接种的乙肝疫苗剂量分为2个亚组(1μg组、2μg组)。每只小鼠于第0周注射50 IU HBIG。所有小鼠于第3针乙肝疫苗接种后4周分离脾脏淋巴细胞,使用流式细胞仪检测淋巴细胞亚群(CD3~+、CD3~+CD4~+、CD3~+CD8~+、CD3~-CD19~+)比例。结果：0、2、4周组比较,两亚组(1μg、2μg)显示,与体液免疫相关的CD3~-CD19~+B淋巴细胞所占比例在雄、雌鼠4周组中均分别高于0、2周组,差异有统计学意义;与细胞免疫相关的T淋巴细胞及其亚群(CD3~+、CD3~+CD4~+、CD3~+CD8~+)均未显示4周组高于其他两组。乙肝疫苗1μg组、2μg组比较,在雄、雌鼠中均显示4周组中2μg组CD3~-CD19~+B淋巴细胞所占比例高于1μg组(P<0.05)。与细胞免疫相关的T淋巴细胞亚群未显示出2μg组高于1μg组的趋势...     

免疫固定电泳在脑脊液蛋白检测中的应用

[目的] 探讨免疫固定电泳法在检测脑脊液中免疫球蛋白的临床应用。[方法] 采集患者同一天血清和脑脊液标本，经琼脂糖凝胶电泳分离蛋白后，采用免疫固定技术，进行显色后使样本呈现寡克隆条带。[结果] 经免疫固定电泳后在脑脊液中呈现寡克隆带或较弱的单克隆带，而在其血清中不存在，则提示为内源性合成免疫球蛋白。[结论] 采用酶标记抗血清的免疫固定电泳，检测脑脊液标本无需浓缩，灵敏度提高；脑脊液免疫固定电泳可用于检出内源性合成免疫球蛋白，为中枢神经系统疾病诊断提供辅助作用。     

小肠结肠炎耶尔森菌O∶3血清型特异性单克隆抗体制备

目的　制备出小肠结肠炎耶尔森菌血清O∶3型特异的单克隆抗体。方法　用常规的骨髓杂交瘤融合技术。结果　筛选到了一株针对于小肠结肠炎耶尔森菌O∶3血清型特异性的克隆株 (编号 :Y6H8) ,且证实分泌的抗体属于针对于脂多糖免疫球蛋白IgG ,可用于玻片凝集法鉴定 0∶3血清型小肠结肠炎耶尔森菌。 结论　通过本实验证实小肠结肠炎耶尔森菌血清O∶3型菌株脂多糖存在其特异性成分 ,可用于该菌株的分型鉴定     

抚触与不同喂养方式对婴儿体液免疫物质IgG的影响

目的研究0~6个月婴儿外周血血清免疫球蛋白IgG的变化规律,并探讨抚触及不同喂养方式对婴儿免疫功能的影响。方法将120例婴儿分为抚触母乳喂养、抚触人工喂养、抚触混合喂养和纯母乳喂养4组,每组30例,纯母乳喂养组为对照组。分别于出生后3,14,42d,3,6个月采外周血,进行放射免疫分析测定血清中IgG的含量。结果随着婴儿出生后天数的增加,其体液免疫物质IgG含量均呈下降趋势,并以母乳喂养抚触组下降速度最慢。在3d时各组间婴儿体液免疫物质IgG含量无显著差异;于婴儿14d后,母乳喂养抚触组婴儿的IgG含量显著的高于其他各组,混合喂养抚触组和人工喂养抚触组婴儿的IgG含量也显著的高于母乳喂养组。结论通过母乳喂养与抚触的干预,可使婴儿自身合成IgG的能力增强,或其消耗速度减慢,从而提高其免疫能力,促进婴儿健康水平。     

SIGIRR在机体炎症与免疫反应中负性调控作用的研究进展北大核心CSCD

单免疫球蛋白白介素-1受体相关蛋白(SIGIRR)是TIR超家族(TIR)成员,在机体大部分组织和器官上广泛表达。由于其结构的特殊性,SIGIRR在炎症与免疫反应中具有负性调控作用。近年来,该作用在炎症免疫相关性疾病中取得了重要进展。SIGIRR在炎症免疫性疾病中表现出的炎症抑制作用,对控制炎症进展、维持机体内炎症反应的平衡至关重要。本文就SIGIRR在感染性疾病、自身免疫病、超敏反应、无菌性炎症及肿瘤等相关疾病中的作用研究进行综述。     

免疫透射比浊法测定尿免疫球蛋白G的建立与评价

免疫球蛋白G（IgG）是血清中含量较多的一种大分子免疫球蛋白（分子量为16KD），主要由脾及周围淋巴浆细胞合成，通常不易通过肾小球滤过膜，尿中排量极少。一般在肾小球病变较重时免疫球蛋白G才排出显著增加。尿中免疫球蛋白G增多与肾小球病变严重程度有关．大都是非选择性蛋白尿。     

多发性骨髓瘤单克隆免疫球蛋白型别的检测及分析

【目的】研究多发性骨髓瘤（MM）患者血清单克隆免疫球蛋白（M蛋白）的分型，以提高认识和诊断水平。【方法】对2006年1月至2007年12月间本院确诊为MM患者、并通过免疫固定电泳发现有M蛋白者共55例患者的血清固定电泳结果和血清免疫球蛋白定量结果进行分析总结。【结果】55例中，IgG型29例（52．73％），IgA型10例（18．18％），轻链型11例（20％），IgD型3例（5．45％），双克隆型2例（3．64％）。IgG和1gA型MM患者血清球蛋白水平升高明显，而IgD型和轻链型血清球蛋白水平升高不明显甚至降低。【结论】血清免疫固定电泳检测M蛋白对MM诊断有重要意义。