新生儿细菌性肺炎患者外周血自然杀伤细胞及CD3~-CD56~-CD16~(bright)亚群比例减少

目的探讨外周血自然杀伤(NK)细胞及其亚群在新生儿细菌性肺炎中的变化及临床意义。方法 44例细菌性肺炎新生儿根据住院天数分为两组,即住院≤10 d组,住院10 d组;根据入院时白细胞(WBC)的数量分为轻度感染组和重度感染组,轻度感染即5.0×10~9/LWBC20.0×10~9/L,重度感染即WBC5.0×109/L或20.0×10~9/L。采用流式细胞术测定44例新生儿细菌性肺炎及22例正常新生儿总NK细胞及其亚群在外周血总淋巴细胞中所占的百分率。结果细菌性肺炎患儿外周血总NK细胞及其亚群CD3~-CD56~-CD16~(bright)的百分率明显低于对照组新生儿;住院≤10 d组患儿外周血CD3~-CD56~-CD16~(bright)亚群占淋巴细胞的百分率明显低于正常对照组新生儿,而总NK细胞及CD3~-CD56~(dim)CD16~(bright)、CD3~-CD56~(bright) CD16~(-/dim)亚群无明显差异。住院10 d组患儿外周血总NK细胞及CD3~-CD56~-CD16~(bright)亚群占淋巴细胞的百分率明显低于正常对照组;住院10 d组外周血总NK细胞及CD3~-CD56~-CD16~(bright)、CD3~-CD56~(dim)CD16~(bright)、CD3~-CD56~(bright)CD16~(-/dim)各亚群占外周血总淋巴细胞的百分率显著低于住院≤10 d组患儿;重度感染的患儿总NK细胞数及其亚群CD3~-CD56~-CD16~(bright)、CD3~-CD56~(dim)CD16~(bright)、CD3~-CD56~(bright)CD16~(-/dim)占外周血淋巴细胞的百分率明显低于轻度感染组;细菌性肺炎患儿外周血中NK细胞CD3~-CD56~(bright)CD16~(-/dim)和CD3~-CD56~(dim)CD16~(bright)亚群占总NK细胞的百分率明显高于正常对照组,而外周血CD3~-CD56~-CD16~(bright)亚群占总NK细胞的百分率明显低于正常对照组。结论新生儿细菌性肺炎患儿病情越严重,住院时间越长,总的NK细胞数量及其各亚群占NK细胞的百分率越低。     

银屑病患者外周血淋巴细胞亚群的变化

目的探讨进行期、静止期和退行期的银屑病患者外周血淋巴细胞亚群的变化及免疫机制。方法本研究评估了77例寻常型银屑病患者(28例进行期、23例静止期、26例退行期)的外周血单个核细胞(PBMCs)各组中各淋巴细胞的比率。结果与退行期相比,进行期和静止期患者的CD3~+、CD4~+和CD8~+淋巴细胞的百分率均显著升高(P0.01)。同进行期比较,静止期和退行期的CD4~-CD8~-淋巴细胞的百分率降低(P0.05)。CD3~-CD16~+CD56~+比例随病情稳定而增高,CD45~+CD14~+比例逐渐下降和CD3~-CD19~+与病情呈负相关,3组的差异显著(P0.05)。结论进行期、静止期和退行期3组银屑病患者的淋巴细胞亚群存在显著的差异,进一步支持银屑病的免疫发病机制。     

α-硫辛酸对自身免疫性甲状腺炎小鼠炎性反应的抑制作用

目的探讨α-硫辛酸抑制自身免疫性甲状腺炎(AIT)小鼠炎性反应及对淋巴细胞亚群的影响。方法将80只NOD.H-2h 4雌鼠随机分为对照组,给予无菌双蒸水灌胃;AIT组给予50 mg/L碘化钠无菌双蒸水灌胃;低及高剂量α-硫辛酸干预组每天腹腔注射0.1和0.4 g/Lα-硫辛酸。每组20只,均持续干预8周。干预8周后,用HE染色观察淋巴细胞浸润;采用流式细胞仪检测Th17、Treg、CD4~+、CD8~+ T细胞及CD4~+/CD8~+水平;采用Western blot测定p38MAPK、NF-κB蛋白水平。结果 AIT组小鼠甲状腺炎性反应发生率高达85%。AIT+低/高剂量α-硫辛酸组小鼠甲状腺炎发生率、甲状腺炎性反应程度评分以及Th17细胞比例显著低于AIT组(P0.05);Treg、CD4~+、CD8~+以及CD4~+/CD8~+细胞比例显著高于AIT组(P0.05)。AIT+低/高剂量α-硫辛酸组的蛋白相对表达水平较AIT组明显降低(P0.05)。结论α-硫辛酸可以降低AIT小鼠炎性反应因子的表达,改善淋巴细胞亚群的比例,从而抑制炎性反应和改善AIT症状。     

人β-防御素2联合乙肝疫苗对小鼠免疫效应的研究

目的:探讨人β-防御素2加强乙肝疫苗对小鼠免疫应答的作用。方法:采用乙肝疫苗2μg/次/只联合HBD2基因真核表达质粒pEGF-C1/HBD2 100μg/次/只,按间隔2周、共免疫3次的左后肢股四头肌肌肉接种方案免疫BALB/c小鼠,同时设立相应的对照。免疫后用双抗原夹心ELISA法测小鼠血清HBsAb水平。采用流式细胞仪检测脾脏CD4+T和CD8+T细胞百分率及CD4+/CD8+比值。应用CCK8试剂盒检测脾淋巴细胞在不同抗原刺激下的增殖反应。结果:pEGF-C1/HBD2质粒联合乙肝疫苗免疫小鼠抗体水平明显升高,CD4+T细胞百分率比其他免疫组都高,脾淋巴细胞体外增殖实验明显。与其他各免疫组相比,pEGF-C1空质粒联合乙肝疫苗免疫组抗体水平和淋巴细胞体外增殖情况及CD4+T细胞百分率都较低。结论:人β-防御素-2对乙肝疫苗在小鼠中的免疫功能有一定增强作用。     

NOD小鼠人源化后CD4~+T和CD8~+T细胞及其分泌IFN-γ与IL-17的频率变化及意义

目的 观察分析NOD小鼠和NOD.β2mnullHHD小鼠Ⅰ型糖尿病(Type1 diabetes,T1D)发病情况以及脾T细胞亚群的频率及功能差异,揭示CD4+T和CD8+T细胞亚群在HLA-A*0201转基因NOD小鼠和NOD小鼠的T1D发病中作用的异同。方法采用测量血糖的方法观察2种小鼠的发病情况,采用流式细胞术分析小鼠脾淋巴细胞CD3+CD4+T、CD3+CD8+T细胞亚群频率以及这2群细胞分泌IL-17和IFN-γ频率的差异。结果 NOD.β2mnullHHD小鼠较NOD小鼠发病早且严重;NOD.β2mnullHHD小鼠脾淋巴细胞的CD3+CD4+T细胞亚群显著高于NOD小鼠,NOD.β2mnullHHD小鼠脾淋巴细胞的CD3+CD8+T细胞亚群显著低于NOD小鼠;2种小鼠的脾淋巴细胞中CD3+CD4+IL-17+T细胞亚群与CD3+CD8+IL17+T细胞频率无差异;NOD.β2mnullHHD小鼠脾淋巴细胞的CD3+CD4+IFN-γ+T和CD3+CD8+IFN-γ+T细胞亚群频率显著高于NOD小鼠。结论 HLA-2.1分子转入NOD小鼠后HLA-2.1分子加速了HLA-A*0201转基因NOD小鼠T1D的发病进程;NOD.β2mnullHHD小鼠相对NOD小鼠的T1D发病更早、病情更重,这与CD3+CD4+T和CD3+CD8+T细胞分泌的IFN-γ显著相关,而与IL-17无关,为T1D防治的临床转化基础研究提供实验数据。     

促性腺激素释放激素激动剂预处理对性成熟雌鼠调节性T细胞的影响

目的探讨促性腺激素释放激素激动剂(gonadotropin releasing hormone agonist,Gn RHa)预处理对性成熟雌鼠调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)的影响。方法 30只动情周期正常的7~8周未交配KM雌鼠随机分成5组,第1组连续9 d每日注射醋酸曲普瑞林1次,第2组连续9 d每日注射醋酸曲普瑞林后,在第9天注射重组人促卵泡激素1次,第10天注射绒毛膜促性腺激素1次,第3组、4组分别与第1组、2组对应,用生理盐水代替醋酸曲普瑞林,其余处理不变,第5组无药物干预。流式细胞学检测各组外周血、脾脏T淋巴细胞亚群及Treg比例;并分别从前4组中随机选取4只小鼠留取子宫内膜,用实时荧光定量PCR方法检测子宫内膜Foxp3 m RNA含量。结果流式细胞技术检测结果发现,外周血T淋巴细胞亚群及Treg比例各组比较无明显差异。比较脾脏T淋巴细胞亚群及Treg比例发现,与第5组比较,第1、2、3、4组CD3+比例下降(P0.05),第2组CD4+比例下降(P0.05);第2组CD4+CD25+Foxp3+Treg比例高于第4、5组(P0.05);CD8+比例在各组间未见明显差异。实时荧光定量PCR检测结果发现,与第3组比较,第1组子宫内膜Foxp3 m RNA升高(P0.05);与第4组比较,第2组子宫内膜Foxp3 m RNA升高(P0.05)。结论 Gn RHa预处理后促排卵,可提高脾脏Treg比例及子宫内膜Foxp3 m RNA含量,可能提高机体免疫耐受水平。     

多房棘球绦虫重组BCG-EmⅡ/3疫苗免疫小鼠后脾细胞亚群的动态观察

目的动态观察多房棘球绦虫重组BCG-EmⅡ/3疫苗免疫小鼠后脾细胞亚群的变化。方法将疫苗采用鼻腔内接种免疫Balb/c鼠,在免疫后0、2、4、6、8、10、12、14、16周和18周各剖杀4只小鼠取脾,分离脾细胞,流式细胞仪检测脾CD4+和CD8+T淋巴细胞亚群的百分比,同时设有PBS对照。结果疫苗接种组的脾CD4+和CD8+T细胞亚群分别在免疫后2～10周和2～18周升高,分别在免疫后4周和10周达最高水平。结论多房棘球绦虫重组BCG-EmⅡ/3疫苗可诱导小鼠脾CD4+和CD8+T细胞亚群的增殖。     

芪芍五味子复方制剂对病毒性心肌炎小鼠免疫调节机制的研究

目的研究黄芪、赤芍、五味子组成的芪芍五味子复方制剂调节病毒性心肌炎(viral myocarditis,VMC)小鼠外周血T淋巴细胞亚群和细胞因子表达的机制。方法 Balb/c小鼠随机分为正常对照组、病毒对照组、中药高、中、低剂量组及VitC和病毒唑联用组。小鼠接种柯萨奇病毒B3(CVB3)建立VMC模型,流式细胞仪检测外周血CD4(+Th)和CD8(+Ts)淋巴细胞亚群数目及比值,ELISA检测IFN-γ、IL-4水平,心肌作组织病理学检查。结果与正常小鼠比较,病毒对照组小鼠外周血CD4+和CD8+淋巴细胞亚群数目下降,CD4+/CD8+下降,血清IFN-γ水平升高,IL-4水平降低(P0.05),中药治疗组小鼠淋巴细胞亚群数目及CD4+/CD8+均高于病毒对照组(P0.05),IFN-γ水平高于病毒对照组及VitC和病毒唑联用组(P0.05),同时小鼠心肌炎症性病理变化明显减轻。结论芪芍五味子复方制剂能调节外周血T淋巴细胞数目及比值,诱生Th1型细胞因子IFN-γ减轻CVB3感染小鼠心肌损伤,起到保护作用。     

恶性肿瘤患者治疗前后外周血淋巴细胞亚群的变化分析

目的探讨肿瘤患者外周血淋巴细胞亚群的变化及临床意义。方法选择2016年7月至2017年11月243例血液标本,其中男性123例(平均年龄61岁),女性120例(平均年龄56岁),年龄32~82岁。其中肺癌43例,肝癌30例,胃癌31例,结直肠癌40例,乳腺癌41例,肾癌20例,妇科恶性肿瘤38例;经治疗后复查患者197例,其中肺癌31例,肝癌26例,胃癌29例,结直肠癌30例,乳腺癌33例,肾癌18例,妇科恶性肿瘤30例。另外,收集笔者所在医院体检中心正常对照组40例,其中男性21例,女性19例;年龄24~75岁,平均年龄51岁。采用流式细胞术检测外周血淋巴细胞亚群的水平。分别比较正常对照组同全部治疗前恶性肿瘤患者组、正常对照组同不同恶性肿瘤患者组及治疗前全部恶性肿瘤患者组同治疗一个周期后预后良好恶性肿瘤患者组淋巴细胞亚群的变化。结果恶性肿瘤患者组与正常对照组比较,外周血CD3~+、CD3~+CD4~+、CD3~-CD19~+三类细胞百分数均降低(P0.05);CD3~+CD8~+及CD3~-CD16~+CD56~+细胞百分比升高(P0.05);CD4/CD8比值下降(P0.05);而且不同恶性肿瘤患者组同正常对照组比较结果也存在一定的差异性。其中,197例恶性肿瘤患者同治疗前相比,治疗后外周血淋巴细胞亚群水平可接近正常对照组。结论研究发现,淋巴细胞的数量及功能的变化与肿瘤的发生、进展、扩散有一定的相关性。恶性肿瘤患者治疗前淋巴细胞亚群的变化结果提示,恶性肿瘤患者存在细胞免疫功能紊乱,应加强免疫功能监测,提高患者免疫功能。     

粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子对HBV宫内感染婴儿的免疫调节作用

目的 观察粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)对HBV宫内感染免疫失败婴儿的免疫调节作用.方法 宫内感染婴儿分为治疗组和对照组(均为20例),都给予乙肝疫苗10μg免疫用量,同一部位三角肌注射(疫苗注射时间按0、1、6方案),乙肝免疫球蛋白200IU臀部肌肉注射,20天1次,共3次.治疗组注射乙肝疫苗3天后,同一部位皮内注射GM-CSF 10μg/Kg.1岁时抽外周静脉血检测T淋巴细胞亚群的水平、血清干扰素-γ(IFN-γ)和白细胞介素4(IL-4)的水平.结果 (1)治疗组CD4+T细胞百分数及CD4 +/CD8+比值高于对照组(t=11.67,P＜0.05;t=13.06,P＜0.05),CD8+百分数低于对照组(t=6.25,P＜0.05),两组比较差异均有显著意义.(2)患者外周血IFN-γ水平治疗组高于对照组(t=13.92,P＜0.05);IL-4水平与对照组相比,差异无统计学意义(t=1.30,P＞0.05).结论 GM-CSF可提高HBV宫内HBV感染免疫失败婴儿CD4 +/CD8+比值,并且调节Th1/Th2细胞因子比例平衡.     

人CD4+ CD25- CD45RA+ T 细胞和CD4+ CD25- T 细胞诱导获得iTreg 细胞的方法学研究

目的:分析比较CD4~+CD25~-CD45RA~+T细胞和CD4~+CD25~-T细胞在普通/炎性(加入IL-1β和IL-6)条件下,由TGF-β、IL-2和CD3/CD28磁珠共刺激诱导生成i Treg细胞的效率,并对比各组i Treg细胞相关蛋白和细胞因子表达水平变化及其免疫抑制能力的差异。方法:通过Ficoll细胞分离液分离出淋巴细胞,利用MACS分选机,结合CD4阴选磁珠筛出CD4阳性的T细胞,最后再提取其中CD45RA~+和CD25~-T细胞。体外实验中,在普通/炎性条件下诱导i Treg生成,3、6 d通过流式观察各组i Treg细胞的诱导情况及相关分子的表达变化趋势。体内实验分为:CD4~+CD25~-CD45RA~+T细胞诱导的i Treg组、CD4~+CD25~-T细胞诱导的i Treg组和空白对照组,通过观察i Treg对GVHD小鼠模型的免疫调节,分析其免疫抑制能力的差异。结果:CD4~+CD25~-CD45RA~+T细胞组和CD4~+CD25~-T细胞组普通条件下i Treg产率分别为(96. 00±0. 21)%和(60. 23±0. 50)%,炎性环境下为(81. 97±1. 29)%和(56. 80±0. 43)%,前者都显著高于后者(P0. 001)。各组i Treg细胞中CTLA-4、TGF-β和IL-10的表达未见明显差异,而炎性因子IL-2、IL-17前者均低于后者(P0. 001),前者IFN-γ也低于后者(P0. 05)。体内实验表明i Treg均具有免疫调节能力,但CD4~+CD25~-CD45RA~+T细胞组诱导的i Treg能力强于后者。结论:CD4~+CD25~-CD45RA~+T细胞组和CD4~+CD25~-T细胞组都可以成功诱导i Treg细胞,但是前者在普通和炎性微环境下诱导效率高于后者,免疫调节能力也优于后者。     

重组白细胞介素2促进小鼠胸腺细胞发育及辐射损伤小鼠免疫功能的恢复

经亚致死量照射的BALB/c小鼠胸腺内残留的胸腺干细胞经历与胚胎胸腺发育十分相似的过程,体内给予IL-2(6×10~5u/kg)可明显促进胸腺细胞由CD4~-CD8~-向CD4~+CD8~+再向CD4~+CD8~-/CD4~-CD8~-分化并明显促进胸腺细胞增殖和亚致死量照射小鼠脾细胞对ConA、LPS 的增殖能力,促进同种异型细胞的混合淋巴细胞反应(MLR)和绵羊红细胞(SRBC)的抗体形成细胞数(PFC)等多项免疫功能的恢复。     

乙肝疫苗增强细胞因子诱导的杀伤细胞对于转乙型肝炎病毒基因小鼠的治疗作用

目的 观察乙肝疫苗是否增强细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer cell,CIK)对于乙型肝炎病毒转基因小鼠(hepatitis B virus transgenic mice,HBV-Tg)的抗病毒作用.方法 给予HBV-Tg腹腔注射CIK细胞,皮下注射乙肝疫苗,用荧光定量PCR检测外周血中HBV DNA水平变化,流式细胞仪检测外周血中T淋巴细胞亚群,并用HE染色观察肝脏的组织病理改变.结果 CIK细胞降低了HBV-Tg鼠外周血中病毒载量,血中CD3~+、CD4~+及CD8~+细胞增多,乙肝疫苗和CIK细胞联合应用后,这种作用增强.结论 乙肝疫苗增强了CIK对于HBV-Tg小鼠的治疗作用,这种增强作用是否通过增加体内CD3~+、CD4~+及CD8~+细胞,尤其是CD8~+细胞而实现,有待进一步研究.     

JAK2-STAT3 / STAT5 信号通路与儿童食物过敏CD4+ T 淋巴细胞亚群变化的相关性研究

目的:探讨JAK2-STAT3/ STAT5 信号通路与儿童食物过敏CD4+ T 淋巴细胞亚群变化的相关性。方法:收集2015 年1 月至2017 年3 月来我院就诊的食物过敏患儿78 例,为过敏组;同期收集来我院体检的健康儿童78 例,为对照组。并根据儿童年龄将过敏组和对照组分为A、B、C、D 四组,其中A 组臆1 岁,B 组1 ~3 岁(不包括1 岁),C 组3 ~6 岁(不包括3 岁),D 组6 ~11 岁(不包括6 岁)。采用流式细胞仪检测CD4+ T 淋巴细胞亚群Th1、Th2、Th17 和调节性T 淋巴细胞(Treg)百分比,同时采用qPCR 检测外周血单核细胞JAK2、STAT3、STAT5 的mRNA 水平,分析两组儿童上述CD4+ T 淋巴细胞亚群和JAK2、STAT3、STAT5 表达水平的差异,并进一步分析JAK2-STAT3/ STAT5 信号通路和CD4+ T 淋巴细胞亚群的相关性。结果:对照组A 组、B 组、C 组儿童Th1、Treg 淋巴细胞百分比及Th1/ Th2、Treg/ Th17 比值均明显高于过敏组患儿A 组、B 组、C 组,而Th2、Th17 淋巴细胞百分比均小于过敏组所对应的同年龄段患儿,随儿童年龄增大,两组间差异均明显减小,但差异均有统计学意义(P<0.05)。对照组D 组儿童和过敏组D 组儿童上述指标差异均无统计学意义(P>0.05)。分别针对A、B、C 三组患儿JAK2、STAT3、STAT5 和CD4+ T 淋巴细胞亚群水平进行相关性比较,Th1、Treg、Th1/ Th2、Treg/ Th17 的相关性系数均<0(P<0.05),而Th2、Th17 的相关性系数均>0(P<0.05),且上述三组的相关系数绝对值逐次减小。上述信号通路分子与CD4+ T 淋巴细胞亚群水平在D 组均无明显相关性。结论:低龄食物过敏儿童的JAK2-STAT3/ STAT5 信号通路存在明显活化和CD4+ T淋巴细胞亚群改变现象,JAK2-STAT3/ STAT5 信号通路可有效调控CD4+ T 淋巴细胞亚群的分布,并伴随患儿年龄增大,上述作用相关性减弱并消失。     

肥胖对非致死性肺炎模型小鼠脾脏、外周血T淋巴细胞亚群的影响

目的探讨肥胖在感染肺炎时对机体免疫功能的调节是否与脾脏和外周血中T淋巴细胞亚群的变化有关。方法将常规非肥胖小鼠分为Ⅰ、Ⅱ组,将高脂诱导小鼠分为Ⅲ、Ⅳ组,Ⅰ、Ⅲ组滴鼻40μl PBS溶液,Ⅱ、Ⅳ组滴鼻40μl含5.9×10~(10)CFU大肠杆菌的菌液,于感染前(0 h)和感染后12 h、24 h、72 h检测各小组脾脏和外周血中的T淋巴细胞亚群。结果在感染后12 h、72 h,Ⅳ组脾脏的CD3~+细胞比例较Ⅲ组显著下降(P0.05),Ⅱ组CD4+细胞比例较Ⅰ组显著升高(P0.05);在感染后24 h、72 h,Ⅳ组CD4~+细胞比例较Ⅲ组显著下降(P0.05)。在感染后24 h、72 h,Ⅱ组CD8~+细胞比例组较Ⅰ组显著下降(P0.05);在感染后12 h、24 h、72 h,Ⅳ组CD8~+细胞比例较Ⅲ组显著下降(P0.05)。在感染后12 h、24 h、72 h,Ⅱ组CD4~+/CD8~+比值较Ⅰ组显著升高(P0.05)。各组外周血中的CD3~+细胞比例,在感染后12 h、72 h,Ⅳ组显著高于Ⅱ组(P0.05);各组外周血中的CD4+细胞比例,在感染前(0 h),Ⅲ组显著高于Ⅰ组,Ⅳ组显著高于Ⅱ组(P0.05)。结论感染非致死性肺炎后,肥胖机体能动员脾脏更多的T淋巴细胞释放入血,加强了机体的细胞免疫功能,有利于抵抗外来病原体的入侵。     

过敏性鼻炎患儿淋巴细胞亚群、血清IgE水平的变化及其相关性分析

目的研究过敏性鼻炎患儿淋巴细胞亚群、血清IgE水平的变化及其相关性分析。方法选取2018年4月～2019年2月我院收治的68例过敏性鼻炎患儿(鼻炎组)和68例过敏性哮喘患儿(哮喘组)作为研究对象,同时选取我院68例体检无过敏性鼻炎和过敏性哮喘患儿作为正常组。对比淋巴细胞亚群各指标水平和血清IgE水平,并分析其相关性。结果哮喘组和鼻炎组细胞亚群指标水平和IgE水平比较,差异无统计学意义(P0.05);鼻炎组CD3~+、CD4~+、CD8~+、CD4~+CD25~+水平显著低于正常组,而CD19~+水平和IgE水平显著高于正常组,差异有统计学意义(P0.05);CD19~+淋巴细胞和血清IgE水平呈正相关。结论淋巴细胞亚群失衡、血清IgE水平升高和过敏性鼻炎密切相关,且淋巴细胞亚群中CD19~+与血清IgE水平呈正相关。     

慢性HIV/AIDS患者T淋巴细胞凋亡与疾病进展关系的研究

目的 探讨慢性未经抗病毒治疗的HIV/AIDS患者T淋巴细胞及各亚群凋亡与疾病进展的相关性.方法 以36例慢性未经抗病毒治疗的HIV/AIDS患者为研究对象,根据CD4细胞计数分为3组:<200个/μl组,200～350个/μl组,>350个/μl组,同时选取16例健康志愿者作对照,分离外周血单核细胞(PBMC)后,采用CD45RO及CD27标记T细胞亚群,Annexin V标记细胞凋亡,用流式细胞仪检测各项指标.其中4例患者及4例健康志愿者的PBMC在体外培养,比较分析体外培养0、3、6、12、24 h不同时间点T细胞凋亡的变化情况.结果 (1)HIV/AIDS患者CD4~+、CD8~+T细胞及各亚群上Annexin V表达百分比均显著高于健康人(P<0.05),但3组患者之间比较差异无统计学意义(P>0.05);(2)HIV/AIDS患者CD4~+、CD8~+T细胞及各业群上Annexin V表达百分比与CD4~+T细胞计数及病毒载显均无显著相关性(P>0.05);(3)随着体外细胞培养时间的延长,HIV/AIDS患者CD4~+T细胞的凋亡及死亡细胞百分比均显著高于健康人(P<0.05),并且HIV/AIDS患者CD4~+T细胞较CD8~+T细胞更易发生凋亡和死亡.结论 HIV/AIDS患者的T细胞凋亡水平显著高于健康人,并且CD4~+T细胞较CD8~+T细胞更易发生凋亡和死亡,但是T细胞凋亡水平与HIV的疾病进展程度并没有相关性.     

CD11b与CD27定义的T细胞亚群与HIV疾病进展的相关性研究

目的探究CD11b与CD27定义的T细胞亚群与HIV疾病进展的相关性,为研究HIV感染者T细胞免疫缺陷提供新的思路。方法外周血荧光抗体染色,用流式细胞仪检测CD11b、CD27及各亚群的表达;破膜胞内染色检测各亚群分泌IFN-γ的功能;细胞因子与PBMC共培养,检测CD11b、CD27的变化。结果在HIV-1感染者,CD27~+CD11b~-、CD27~+CD11b~+和CD27~-CD11b~+的T细胞亚群明显降低(P0.05),而CD27~-CD11b~-T细胞亚群明显增多(P0.05),该亚群与CD4~+T细胞呈显著的负相关(r=-0.545,P0.001);CD27~+CD11b~-、CD27~+CD11b~+和CD11b~+CD27~-亚群分泌IFN-γ功能均强于CD27~-CD11b~-亚群;细胞因子TGF-β随着质量浓度的增加对CD11b表达的抑制也逐渐增强,而IL-12和IL-15能够刺激CD11b的增多,IL-2与IL-7能够刺激CD27增多。结论 HIV感染导致人体T细胞亚群发生紊乱。     

匹多莫德增强弓形虫新基因wx2b4a表位疫苗免疫小鼠的保护研究

目的 探讨匹多莫德增强弓形虫新基因wx2b4a表位疫苗刺激机体产生免疫应答和保护免疫的效果.方法 将昆明小鼠分成4组,分别用pcDNA3-W2b4a质粒、pcDNA3-W2b4a+匹多莫德、pcDNA3及生理盐水肌注3次.ELISA法检测血清IgG抗体水平,取脾细胞用流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群,末次免疫后第4周,小鼠经腹腔注射弓形虫速殖子500个,观察小鼠生存时间.结果 pcDNA3-W2b4a+匹多莫德组、pcDNA3-W2b4a组小鼠血清IgG抗体水平显著高于pcDNA3组和生理盐水对照组(P＜0.05);各免疫组小鼠CD4+、CD8+T淋巴细胞数量显著高于对照组(P＜0.05);pcDNA3-W2b4a+匹多莫德组CD4+T细胞数量、CD4+/CD8+比值高于pcDNA3-W2b4a组(P＜0.05).小鼠攻击试验表明,pcDNA3-W2b4a+匹多莫德组小鼠存活时间明显长于对照组和pcDNA3-W2b4a组(P＜0.05).结论 匹多莫德可增强弓形虫新基因wx2b4a表位疫苗诱导小鼠产生抗弓形虫感染保护性免疫.     

细粒棘球绦虫转Eg95-EgA31融合基因苜蓿疫苗诱导Balb/c小鼠免疫应答的动态观察

目的动态观察细粒棘球绦虫转Eg95-EgA31融合基因苜蓿疫苗免疫Balb/c小鼠后诱导的免疫应答。方法热絮凝法提取转基因苜蓿的叶蛋白,再用无菌双蒸水将叶蛋白提取液的浓度配制成20μg/μl。88只Balb/c小鼠随机分为2组,分别用100μl灌胃和10μl滴鼻免疫小鼠,每3天1次,连续免疫2个月。在末次免疫后0、2、4、6、8、10、12、14、16、18和20周各组随机剖杀4只小鼠,眼球取血,常规酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测血清中IgG及其亚类和IgE水平;取脾,分离脾细胞,流式细胞仪(flow cytometr,FCM)检测脾CD4+和CD8+T淋巴细胞亚群的百分比,体外经脾细胞悬液或加入Eg粗抗原(EgAg)、伴刀豆球蛋白A(ConA)或脂多糖(LPS)刺激培养,四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测免疫鼠脾T淋巴细胞增殖情况,ELISA法检测脾细胞培养上清液中IL-12、IL-10、IFN-γ和TNF-α水平。结果在末次免疫后4～6周,2组免疫小鼠的血清IgG及其亚类和IgE水平升高,脾T淋巴细胞增殖水平升高,CD4+和CD8+T细胞亚群百分比分别升高,脾细胞培养上清液中IL-12、IFN-γ、TNF-α和IL-10水平分别升高。结论细粒棘球绦虫转Eg95-EgA31融合基因苜蓿疫苗在免疫早期(4～6周)可诱导免疫鼠脾T淋巴细胞增殖,产生Th1和Th2混合型免疫应答,CD4+和CD8+T细胞亚群在细粒棘球绦虫转Eg95-EgA31融合基因苜蓿疫苗诱导的保护性免疫机制中起重要作用。