鼠疫病原体的快速诊断

提要:本文从鼠疫病原学的快速诊断方面入手,重要介绍了一种鼠疫特异性显色培养基和S iO2纯化DNA技术在鼠疫PCR扩增中具体应用以及φA1122噬菌体的研究动向和血清学诊断技术所面临的问题等。     

旋毛虫成虫抗原基因的原核表达及表达产物的特性分析

目的　获得旋毛虫成虫抗原基因的原核表达产物并对其进行纯化及免疫特性分析。　方法　旋毛虫成虫Ts87基因片段亚克隆入PET-28a(+)表达载体,异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达。亲和层析和电洗脱法纯化表达产物,SDS-PAGE、ELISA和Westernblotting对表达产物进行分析鉴定,并将纯化的表达产物人工免疫兔。结果　SDS-PAGE结果显示,表达产物为分子量约为40kDa的重组蛋白。纯化后免疫兔获得高滴度的抗血清。该基因重组蛋白可被感染旋毛虫的猪、兔血清及人工免疫兔血清所识别,与感染囊尾蚴、棘球蚴的患者血清或感染日本血吸虫的兔血清不发生交叉免疫反应。　结论　获得一个新的旋毛虫成虫Ts87基因重组蛋白,该蛋白具有特异的抗原性。     

连续性血液净化治疗热射病并发多脏器功能不全综合征的临床分析

目的分析连续性血液净化（CBP）技术在热射病并发多脏器功能不全综合征（MODS）患者救治中的作用。方法对2例热射病合并MODS患者采用BaxterBM25机器行CBP治疗24次，在每次CBP治疗前及治疗后2h、4h、8h分别取血样，采用ELISA法检测肿瘤坏死因子（TNF—α）、白细胞介素-1（IL-1）、白细胞介素-8（IL-8）的含量，并分别于治疗前与治疗后即时取血化验肌酐（SCr）、尿素氮（BUN）、总胆红素（TBIL）、血肌红蛋白（bMb）浓度。结果2例患者24次CBP后血浆TNF—α、IL-1、IL-8水平均明显下降（P〈0．05），血清BUN、SCr、bMb、TBIL均有不同程度降低（P〈0．05或〈0．01）。结论CBP能清除热射病并发MODS患者血浆中的细胞因子，并可以改善肝、肾功能指标，有效阻止MODS的进展。     

甲磺酸加贝酯联合CBP治疗SAP的效果及对炎症“瀑布效应”相关因子的影响

［摘要］ 目的探讨甲磺酸加贝酯联合连续性血液净化（continuous blood purification,CBP）治疗重症急性胰腺炎（severe acute pancreatitis,SAP）的效果及其对炎症“瀑布效应”相关因子的影响。 方法将60例SAP患者按完全随机法分为观察组与对照组各30例。对照组给予CBP治疗,观察组在对照组基础上联合甲磺酸加贝酯,比较2组疗效、临床治疗情况、炎症“瀑布效应”相关因子［肿瘤坏死因子(tumour necrosis factor α,TNF-α）、可溶性肿瘤坏死因子受体（soluble tumor necrosis factor receptor,sTNFR）、核转录因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)、白细胞介素6（interleukin 6,IL-6）、白细胞介素8（interleukin 8,IL-8）］及并发症发生率。 结果观察组临床疗效优于对照组（P＜0.05）,2组总有效率差异无统计学意义（P＞0.05）。观察组腹痛缓解时间、胃肠减压时间、住院时间均短于对照组（P＜0.05）,2组28 d病死率差异无统计学意义（P＞0.05）。2组TNF-α、sTNFR、NF-κB、IL-6、IL-8均呈降低趋势,观察组TNF-α、sTNFR、NF-κB、IL-6、IL-8降低幅度大于对照组,组间、时点间、组间·时点间交互作用差异均有统计学意义（P＜0.01）。2组总并发症发生率差异无统计学意义（P＞0.05）。 结论SAP患者在CBP治疗基础上联合甲磺酸加贝酯或可取得更佳症状缓解获益,对炎症“瀑布效应”相关因子的改善更显著,且未显著增加并发症风险,值得临床推广。     

Automated production of [68Ga]Ga‐DOTANOC and [68Ga]Ga‐PSMA‐11 using a TRACERlab FXFN synthesis module

The interest in gallium‐68 labelled positron‐emission tomography probes continues to increase around the world. However, one of the barriers for routine clinical use is the cost of the automated synthesis units for relatively simple labelling procedures. Herein, we describe the adaptation of a TRACERlab FX_FN synthesis module for the automated production of gallium‐68 radiopharmaceuticals using a cation‐exchange cartridge for postprocessing of the ⁶⁸Ge/⁶⁸Ga generator eluate. The recovery of activity from the cartridge was 95.6% to 98.9% using solutions of acidified sodium chloride (5 M with pH = 1‐3). The radiosyntheses of [⁶⁸Ga]Ga‐DOTANOC and [⁶⁸Ga]Ga‐PSMA‐11 were performed using acetate sodium buffer or 4‐(2‐hydroxyethyl)piperazine‐1‐ethanesulfonic acid, with a total duration of 21 and 23 minutes, respectively, including generator elution and radiopharmaceutical dispensing. Activity yields were 77% ± 2% for [⁶⁸Ga]Ga‐PSMA‐11 and 68% ± 3% for [⁶⁸Ga]Ga‐DOTANOC (n > 100). The labelled peptides had a radiochemical purity exceeding 97%, and all quality control parameters were in conformity with the limits prescribed by the European Pharmacopoeia.     

人源瞬时受体电位M2型通道Nudix水解酶9同源结构域的提取和纯化

目的摸索人源瞬时受体电位M2型通道（TRPM2）羧基端Nudix水解酶9（NUDT9）同源结构域（NUDT9-H）的蛋白提取和纯化方法。方法异丙基硫代半乳糖苷诱导表达的Rosetta（DE3）大肠埃希菌菌株经超声破碎和离心后，将收集到的上清液与GST磁珠结合并用还原型谷胱甘肽洗脱以抽提GST-NUDT9-H融合蛋白，浓缩离心后再经分子排阻色谱层析纯化，最后经凝血酶酶切并与GST磁珠结合即得NUDT9-H蛋白。结果含有0.5%的十二烷基-β-D-麦芽糖苷（DDM）裂解溶液体系和0.025%的DDM分子排阻层析色谱溶液体系能够提高GST-NUDT9-H融合蛋白的稳定性，再按每2 mg融合蛋白加入1 U凝血酶切割24 h，即获得高纯度NUDT9-H蛋白。结论NUDT9-H蛋白稳定性较差，提取和纯化体系中需添加DDM以稳定其构象从而提高目的蛋白的产量和纯度。     

巴斯德毕赤酵母表达人微小纤溶酶原的放大研究

目的:研究巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)表达重组人微小纤溶酶原(rh-mPlg)的放大工艺。方法:分别采用1 L摇瓶、7.5 L发酵罐对Pichia pastoris工程菌rh-MPLG/GS115进行高密度培养、甲醇诱导表达。摇瓶培液经2步纯化:SP-Seph-arose FF、Superdex 75;发酵罐培液经3步纯化:超滤、Sephacryl S-100、Q-Sepharose FF,活性组分透析后冷冻干燥。以组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)激活rh-mPlg,纤维蛋白平板测定其纤维蛋白溶解活性,计算并比较2种制备方法所获rh-mPlg比活性及得率。结果:采用1 L摇瓶和7.5 L发酵罐发酵可分别获得34 mg.L-1培液、210 mg.L-1培液的得率,经纯化后rh-mPlg纯度分别为95%和97%,比活性分别为20.6和23.0 U.mg-1。结论:以发酵罐生产rh-mPlg,可显著提高其产量,且比活性与摇瓶表达相近,验证了放大生产的可行性。     

弯孢马利亚霉SIIA-F12361产生的新代谢产物研究

目的:对海洋生境来源菌株SIIA-F12361进行分类学鉴定以及次级代谢产物的化学研究.方法:采用形态学与18S rDNA序列分析对菌株进行分类学鉴定.通过硅胶柱层析、LH-20分子筛层析和反相制备HPLC诸方法,对新化合物进行分离纯化,并根据高分辨质谱、紫外、红外光谱和核磁共振数据对化合物SIIA-C12361进行结构鉴定.结果:鉴定菌株SIIA-F12361为弯孢马利亚霉,其产生的新次级代谢产物属于倍半萜烯内酯类化合物.结论:弯孢马利亚霉SIIA-F12361产生一新倍半萜烯内酯化合物.     

可口革囊星虫(Phascolosoma esculenta)纤溶酶PFE的分离纯化

目的从可口革囊星虫中分离纯化纤溶酶,并初步研究其酶学性质。方法实验以纤维蛋白平板法检测纤溶活性,采用匀浆、抽提离心、G-25脱盐、DEAE梯度洗脱等方法从可口革囊星虫中分离纯化出纤溶酶PFE,并进一步研究pH、温度、金属离子及抑制剂对该酶活性的影响。结果分离纯化得到纤溶酶PFE,SDS-PAGE法测得相对分子质量为35kDa左右。此外,其酶学性质研究结果表明:PFE的最适反应pH为7.4,酶活力在pH6.6～9.0时相对稳定;PFE在20～40℃条件下,酶活力保持相对稳定。Fe3+对酶活性有强烈的抑制作用,Ca2+、Mg2+、Fe2+、K+、EDTA和β-巯基乙醇对酶活性均具有一定的抑制作用。结论可口革囊星虫中存在纤溶酶PFE,此酶可直接降解纤维蛋白,具有重要的临床开发价值。     

红茶菌的研究概况

红茶菌是一种历史悠久的功能性饮料,检索国内外相关文献,主要从红茶菌的菌体组成、营养成分、培养方法、红茶菌中微生物的分离纯化、发酵机理、保健功能以及作用机理等方面进行了综述,展望了红茶菌开发利用的前景并提出了亟待解决的问题。