补肾活血法中药（糖络通）防治糖尿病大鼠早期视网膜病变的实验研究

目的：研究补肾活血法中药（糖络通）对糖尿病大鼠早期视网膜病变的防治作用及其作用机制。方法：随机将33只正常雄性Wistar大鼠分为正常对照组（N）11只,糖尿病对照组（D）11只,糖络通治疗组（DT）11只,连续给药8周后观察大鼠体重、空腹血糖、FPG、糖化血红蛋白（HbA1c）及大鼠视网膜RAGE mRNA的表达水平。并通过光镜电镜观察大鼠视网膜组织病理形态学的变化。结果：实验研究表明,糖络通可降低糖尿病大鼠视网膜RAGE mRNA的表达水平,组间比较有差异性（P＜0.01）;ALT, AST,Cr,BUN等安全性指标未出现异常,组间比较无统计学差异（P＞0.05）。结论：光镜、电镜观察表明糖络通对糖尿病大鼠的视网膜具有保护作用,能抑制神经节细胞及内外核层细胞的减少,减轻毛细血管扩张及视网膜组织的水肿。说明糖络通能够在一定程度上减缓DM大鼠视网膜的病理变化,对早期DR具有良好防治作用。为中医临床防治糖尿病微血管病变的研究提供理论依据。     

罗格列酮抑制糖基化终产物诱导心肌成纤维细胞增殖和结缔组织生长因子及Smad的表达

Objective To investigate the effects of rosiglitazone on the proliferation,connective tissue growth factor and Smad expression in cultured cardiac fibroblasts induced by advanced glycosylation end-products (AGEs).Methods After being treated with various amounts of rosiglitazone,the cultured neonatal rat cardiac fibroblasts were incubated with AGEs.The status of cardiac fibroblasts proliferation and cell cycle were detected by 3-(4,5-dimethyhhiazol-2-yl) -2,5-diphenyl tetrazolium bromide (MTI) assay and flow cytometry.Furthermore,ELISA technique was applied to identify the level of TGF-β1.The protein expressions of CTGF and Smad in cardiac fibroblasts of neonatal SD rats were detected with Western blotting.Results The exposure of cardiac fibroblasts to AGEs at doses of 0-200 mg/L induced a dose-dependent increase in cell proliferation.At the concentration of rosiglitazooe (0.1,1,and 10 μmol/L),the cell proliferation was reduced compared with 200 mg/L AGEs group by O.823±0.072,0.785±0.060,0.601±0.081 vs 0.981±0.049,respectively (P < 0.05).The increased levels of TGF-β1 in supematants of cultured cardiac fibroblasts stimulated by AGEs were inhibited by rosiglitazone at the concentrations of 0.1,1,10μmol/L by 257.77±9.09,230.29±6.56,200.84±10.26 vs 300.68±8.56,respectively (vs 200 mg/L AGEs,P<0.01).Western blot indicated that pretreatment with rosiglitazone (0.1,1,and 10 μmol/L) inhibited CTGF protein production in a dose-dependent by 0.769±0.108,0.590±0.095,0.534±0.115 vs 1.021±0.113,respectively (vs 200 mg/L AGEs,P<0.01).It was also demonstrated that pretreatment with rosiglitazone (1 and 10 μmol/L) inhibited Smad2 protein production by 0.424±0.059,0.396±O.080 vs 0.572±0.073,respectively (vs 200 mg/L AGEs,P < 0.05 or P < 0.01).Meanwhile pretreatment with rosiglitazone (1 and 10 μmol/L) inhibited Smad4 protein production by 0.580±0.063,0.556±0.051 vs 0.672±0.059,respectively (vs 200 mg/L AGEs,P < 0.05 or P < 0.01).Conclusions The findings suggest that AGEs promote the proliferation of cardiac fibroblasts and stimulate the protein production of Smad and CTGF of cardiac fibroblasts.Rosiglitazone inhibits the above reaction.These results indicate that CTGF/Smad pathway may play an important role in the protective effect of rosiglitazone on myocardial fibrosis.     

糖基化终末产物促进大鼠血管平滑肌细胞钙化

目的 观察糖基化终末产物对体外培养的血管平滑肌细胞钙化的影响.方法 在含10 mmol/Lβ-甘油磷酸钠培养液中加入不同浓度(0、50、100、200 mg/L和400 mg/L)的糖基化终末产物与大鼠血管平滑肌细胞孵育不同时间.采用磷酸苯二钠法检测碱性磷酸酶活性,甲-酚酞络合酮方法测定钙含量,实时定量逆转录聚合酶链反应检测成骨细胞特异性核心结合因子、碱性磷酸酶以及骨桥蛋白基因表达,蛋白免疫印迹检测成骨细胞特异性核心结合因子及骨桥蛋白蛋白表达.结果 与对照组相比,糖基化终末产物随作用时间延长和浓度增加,细胞钙含量增加(P<0.05),升高碱性磷酸酶活性和基因表达(P<0.05),促进成骨细胞特异性核心结合因子及骨桥蛋白基因及蛋白表达(P<0.01).结论 糖基化终末产物可促进体外培养的大鼠血管平滑肌细胞钙化.     

罗格列酮抑制糖基化终产物诱导心肌成纤维细胞增殖和结缔组织生长因子及Smad的表达

目的 探讨糖基化终产物(AGE)对培养乳鼠心肌成纤维细胞增殖、结缔组织生长因子(CTGF)和Smad2、Smad4蛋白表达的影响及罗格列酮的干预作用.方法 采用胰酶消化法和差速贴壁分离法获取心肌成纤维细胞,应用MTT法、流式细胞仪法分别观察不同浓度AGE及罗格列酮对心肌成纤维细胞的细胞增殖、细胞周期的影响,ELISA方法 检测细胞培养上清中TGF-β1水平,Westem印迹技术检测CTGF及Smad2、Smad4蛋白质表达.结果 在一定浓度范围内,AGE干预心肌成纤维细胞,随浓度的增加,细胞增殖更加显著,TGF-β1分泌增加,CTGF蛋白表达增加.罗格列酮(0.1、1、10μmoVL)干预后,随浓度的增加,抑制心肌成纤维细胞增殖(分别为0.823±0.072、0.785±0.060、0.601±0.081对0.981±0.049,P<0.05)、抑制心肌成纤维细胞分泌TGF-β1(分别为257.77±9.09、230.29±6.56、200.84±10.26对300,68±8.56,P<0.01)、抑制CTGF蛋白表达的作用都更加显著(分别为0.769±O.108、0.590±0.095、0.534±0.115对1.021±0.113,P<0.01).罗格列酮(1和10μmol/L)干预后可显著减少AGE诱导的Smad2的蛋白表达(分别为0.424±0.059对0.572±0.073,P<0.05;0.396±0.080对0.572±0.073,P<0.01),同时可显著减少AGE诱导的Smad4的蛋白表达(分别为0.580±0.063对0.672±0.059,P<0.05;0.556±0.051对0.672±0.059,P<0.01).结论 AGE刺激心肌成纤维细胞增殖及分泌TGF-β1,同时诱导CTGF、Smad2及Smad4蛋白表达,罗格列酮在一定程度上抑制AGE上述作用,表明罗格列酮抑制心肌成纤维细胞增殖的效应与CTGF/Smad通路密切相关.     

通心络对自发性糖尿病大鼠心肌组织胶原网络重构的影响

目的:观察通心络对自发性糖尿病(GK)大鼠心肌Ⅰ型和Ⅲ型胶原阳性表达及含量、细胞转化生长因子(TGF-β1)含量的影响。方法:4月龄GK大鼠30只,随机分为GK对照组、通心络大、小剂量组,另取4月龄Wistar大鼠10只作正常对照,分别灌胃12周。灌胃结束后,制备心肌切片,免疫组化染色,计算胶原I、胶原Ⅲ阳性面密度比值以代表表达程度;取心肌匀浆,酶联免疫方法测定心肌Ⅰ、Ⅲ型胶原及TGF-β1含量。结果:与同月龄正常大鼠相比较,GK大鼠血糖明显增高(P0.01),通心络药物组有降低趋势,但无差异(P0.05)。与正常大鼠比较,GK大鼠心肌胶原Ⅰ阳性面密度比值明显增高(P0.01),胶原Ⅲ阳性面密度比值明显降低(P0.01),心肌匀浆胶原Ⅰ含量明显增高(P0.01),胶原Ⅲ含量降低(P0.05),心肌胶原Ⅰ/Ⅲ比值明显增高(P0.01),TGF-β1含量降低(P0.01);与7月龄GK大鼠比较,通心络组胶原Ⅰ阳性面密度明显降低(P0.01),高、低剂量组之间有差异(P0.05),胶原Ⅲ阳性面密度明显升高(P0.01);胶原Ⅰ含量明显降低(P0.01),胶原Ⅲ含量明显提高(P0.01),胶原Ⅰ/Ⅲ比值降低(P0.01),TGF-β1含量明显提高(P0.01),高、低剂量组之间无差异(P0.05)。结论:通心络可降低GK大鼠心肌胶原Ⅰ阳性表达,Ⅰ型胶原含量,升高胶原Ⅲ阳性表达,Ⅲ型胶原含量,降低胶原Ⅰ/Ⅲ比值,升高TGF-β1含量,具有改善心肌间质网络重构作用。     

糖基化终产物对大鼠血管平滑肌细胞骨保护素mRNA表达的影响

目的:研究糖基化终产物(AGEs)对大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)骨保护素(OPG)mRNA表达的影响。方法:体外培养VSMCs,在含10 mmol.L-1β-甘油磷酸(β-GP)的培养液中加入不同浓度(0、50、100、200、400 mg.L-1)的AGE-牛血清白蛋白(BSA)与VSMCs孵育不同时间(0、12、24、36、48、72 h)。采用RT-PCR检测OPG的mRNA表达水平。结果:AGE-BSA呈时间和剂量依赖性地增加VSMCsOPG mRNA的表达;200 mg.L-1的AGE-BSA与VSMCs孵育24 h,OPG mRNA表达水平达到高峰。结论:AGE-BSA能够促进大鼠VSMCsOPG mRNA的表达。     

脂蛋白a和同型半胱氨酸对冠状动脉支架内再狭窄影响的临床分析

【摘要】 目的 探讨脂蛋白a[Lp（a）]和同型半胱氨酸（Hcy）对经皮冠状动脉介入治疗（PCI）后支架内再狭窄（ISR）的影响。方法 回顾性分析2016年6月至2021年6月在宁波市医疗中心李惠利医院接受PCI术并随访冠状动脉造影患者临床资料。根据ISR诊断标准随机选取ISR患者102例（ISR组）,未发生ISR患者101例（无ISR组）。采用单因素和多因素logistic回归分析Lp（a）和Hcy是否为PCI术后ISR的危险因素。 结果 ISR组、无ISR组术后随访时Lp（a）分别为（0.28±0.23） g/L、（0.15±0.08） g/L,差异有统计学意义（t=5.62,P＜0.01）;Hcy分别为（16.35±11.12） μmol/L、（10.37±3.33） μmol/L,差异有统计学意义（t=5.20,P＜0.01）,表明Lp（a）和Hcy水平与PCI术后ISR呈正相关。多因素logistic回归分析结果显示,血浆Lp（a）（OR=842.679,95%CI=31.117～22 820.459,P＜0.01）和Hcy（OR=1.248,95%CI=1.130～1.379,P＜0.01）是PCI术后ISR的危险因素。结论 Lp（a）和Hcy是PCI术后ISR的危险因素。     

血糖变异对老年T2DM合并ACS患者内皮功能和MACE的影响

目的探讨血糖变异对老年2型糖尿病(T2DM)合并急性冠状动脉综合征(ACS)患者内皮功能和主要不良心血管事件(MACE)的影响。方法选择109例老年ACS患者,按是否合并T2DM分为T2DM组与非T2DM组,按有无MACE分为MACE组与无MACE组。记录空腹血糖(FBG)、糖化血红蛋白(HbA1c)和入院后MACE。辅理善瞬感扫描式血糖监测系统检测最大血糖波动幅度(LAGE)、日内血糖波动幅度(MAGE)、日内血糖绝对差(MODD)、餐后血糖波动幅度(PPGE)。ELISA法检测血清内皮型一氧化氮合酶(eNOS),冠状动脉造影(CAG)检查血管病变特点,进行冠状动脉Gensini评分。结果与非T2DM组比较,T2DM组MODD、PPGE、LAGE、MAGE、FBG、HbA1c增高,eNOS水平降低,血管单、双支病变和轻中度病变较少,多支病变及重度病变较多,Gensini评分较高。与无MACE组比较,MACE组Gensini评分、LAGE、MAGE、MODD、PPGE升高,eNOS水平降低。Logistic回归显示,LAGE、MAGE、eNOS和Gensini评分是老年T2DM合并ACS患者MACE的独立危险因素;ROC曲线分析显示,LAGE和MAGE对该类患者MACE有预测价值。 结论LAGE和MAGE是老年T2DM合并ACS患者MACE的危险因素,减少血糖变异可能通过改善内皮功能降低其MACE的发生。     

晚期糖基化终末产物单克隆抗体制备与鉴定

目的：制备抗人晚期糖基化终末产物AGEs单克隆抗体（McAb）。方法：孵育D-葡萄糖和人血清白蛋白（HSA）获得AGE-HSA，取凝胶层析纯化后的第1峰AGE—HSA作为免疫原，免疫BALB／c小鼠，采用杂交瘤技术制备抗AGE．HSA的McAb，用间接ELISA和Western blot鉴定其亚类和特异性。结果：成功筛选出3株稳定分泌抗AGE-HSA的McAb杂交瘤细胞株，其分泌抗体亚类为IgM，经Western blot鉴定该McAb特异性高，亲和力强。结论：获得抗人AGE—HSA的McAb细胞株3株，为深入研究AGEs和应用提供了有力工具。     

远程医疗管理联合药物治疗老年高血压合并阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征病人的效果

目的探讨远程医疗管理联合药物治疗老年高血压合并阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(OSAHS)病人的降压效果。方法 128例高血压合并OSAHS的老年病人,根据干预方法的不同分为云平台远程医疗管理联合药物治疗组(云平台管理组)和单纯药物治疗组(非云平台管理组),每组各64例。非云平台管理组根据病人家中自测血压,每月门诊随诊调整降压药物用量;云平台管理组在常规单纯药物治疗的基础上使用云平台远程医疗管理系统,实时监测病人24 h内血压变化情况,医生随时根据血压变化情况调整药物治疗及生活方式。比较治疗后2组降压效果的差异。结果治疗前,2组病人的24 h平均血压及清晨血压比较,差异无统计学意义(P005);治疗1个月后,2组病人的血压均较治疗前有所改善,差异有统计学意义(P005),且云平台管理组的24 h平均血压和清晨血压达标率均较非云平台管理组高,差异有统计学意义(P005)。治疗6个月后,2组病人的血压均较治疗前有明显改善,差异有统计学意义(P001),但2组间24 h平均血压和清晨血压的达标率差异无统计学意义(P005)。结论应用远程医疗联合药物管理老年高血压合并OSAHS病人的清晨血压和24 h平均血压比单纯药物管理更易获得早期控制。