慢性乙型肝炎患者抗病毒治疗前后CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞的变化

目的研究慢性乙型肝炎(以下简称乙肝)患者干扰素抗病毒治疗前后外周血CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Treg)频率的变化情况。方法慢性乙肝患者30例(干扰素组),经干扰素α1b(50μg)治疗6个月;肝炎病毒标志物阴性,肝功能正常的健康志愿者10例(正常对照组);尸检正常肝组织10例(尸检组)。采集干扰素组和正常对照组6个月前后的抗凝外周血,收集干扰素组抗病毒前和尸检组的肝组织。流式细胞术检测外周血Treg的频率(Treg/淋巴细胞的百分比);免疫组化检测肝组织中Foxp3的表达;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测外周血Foxp3 mRNA的表达;并分析其与血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、HBV DNA的相关性。结果干扰素组治疗前Treg的频率为(1.18±0.45)%,明显高于正常对照组的(0.55±0.13)%(P<0.01),Treg的频率与ALT、AST的变化均呈正相关(r=0.69、0.72,均P<0.01),而与HBV DNA无明显的相关性(r=-0.06,P>0.05);干扰素组治疗6个月后Treg的频率为(0.74±0.19)%,明显低于治疗前。免疫组化和RT-PCR可以对该结果鉴定和印证。结论慢性乙肝患者外周血中Treg的频率升高,干扰素α1b治疗能改善患者的免疫功能,降低Treg的频率。     

抗-HBs抗体阳性血清中和确认HBsAg方法的建立

1 材料与方法 1．1 仪器、试剂及材料 1．1．1 WELLSCAN K3酶标仪、BHP9504化学发光仪、anthos fluido洗板机，分别是芬兰雷勃公司、北京滨松光子技术股份有限公司和郑州安图生物工程公司产品。     

90例HBV基因型与拉米夫定疗效的研究

目的 :探讨乙肝病毒 (HBV)基因型与拉米夫定疗效的关系。方法 :选用 90例慢性乙肝病人 ,采用口服拉米夫定 10 0mg/d治疗 2 4个月。根据HBV前C区保守序列作为通用包被探针 ,HBV不同基因型的序列作为基因分型显色探针 ;另外拉米夫定YMDD及耐药突变的两种形式 (YIDD/YVDD)分别作为显色探针。采用PCR微板双探针杂交ELISA技术进行HBVDNA定量、HBV基因分型、YMDD及突变耐药株 (YIDD/YVDD)的检测。结果 :90例乙肝病人C基因型占 4 3% ,B基因型 30 % ,D基因型 16 % ,混合基因型为 10 %。其中有 1例出现YIDD耐药株(称为先天性耐药 )。口服拉米夫定 12个月后 ,5 14 6 /90 )的病人HBVDNA转阴 (<0 .1pg/ml血清 ) ;YMDD耐药株发生率为 16 % (14 /90 ) ,其中C基因型 6例 ,D基因型 6例 ,混合基因型 2例 ,先天性耐药株对拉米夫定无反应。口服拉米夫定 2 4个月后 ,HBVDNA转阴率为 5 2 % (47/90 ) ,YMDD耐药株的发生率为 2 7% (2 4 /90 ) ,其中D基因型 10例 ,C基因型 9例 ,B基因型 1例 ,混合基因型 4例。结论 :本研究中乙肝病人HBV基因型主要为C型 ,其次为B型及D型。口服拉米夫定后大多数病人可以明显降低DNA水平 ;其YMDD突变耐药株的发生与HBV基因型有关 ,以D型及C型YMDD突变耐药株发生率较高。PCR微板双探针杂交技术不但     

芯片技术对南昌地区HIV-HCV合并感染者的HCV基因型研究

目的：了解芯片技术对南昌地区HIV-HCV合并感染者的HCV基因型分布。方法2008年10月至2013年11月期间，在南昌地区就诊的285例HIV感染患者进行HCV筛查，并对HCV阳性患者的基因型进行芯片技术检测，将其检测结果与测序结果进行比对；同时对HIV-HCV合并感染者进行流行病学调查。结果芯片技术可检测出约900拷贝/ml的丙型肝炎病毒的基因型，HIV感染者中，HCV阳性比率为19.3%，HIV-HCV合并感染者的HCV基因型分布情况为1b型41例，2a型9例；3b型1例,6型1例，还有1 b＋2a型3例；芯片检测结果与基因测序结果完全一致。结论芯片技术灵敏度高，准确性好，HCV基因型分布以1b基因型为主，其次为2a型；HIV感染者的感染传播途径有了新变化，性传播感染HIV比例在增加，但性传播合并感染的比例较低。     

化学发光法检测血清肝纤维化指标评价

血清肝纤维化指标(透明质酸、层粘连蛋白、Ⅳ型胶原、Ⅲ型前胶原等),广泛应用于肝纤维化的临床诊断、病情监测及疗效判断[1～3];肝纤维化指标检测多采用放射免疫法,其标记物有放射污染且报告时间长.化学发光法,性能稳定、灵敏、操作简便、报告时间短,显示出较好的应用前景,我们对其应用于肝纤维化指标检测进行了方法学评价,现报告如下.     

微板核酸杂交技术对江西地区HCV基因分型的观察

目的 采用微板核酸杂交-ELISA技术对HCV RNA进行基因分型。方法 采用PCR、核酸杂交和酶联显色技术，首先将HCV RNA进行RT-PCR扩增，并将扩增产物加入预先包被对HCV通用探针的徽孔板，再加入HCV各基因型显色探针，同时进行微板核酸杂交-ELISA显色，对江西地区129例临床诊断为丙肝RNA阳性患者血清中的HCVRNA进行基因分型研究。结果 江西地区HCV基因型可分为1b、2a、2b、3a、3b、6a、la／2a、1b／2a、1b／3a、1b／6a、3a／5a、2a／3a共12种单一基因型和混合基因型，其中以1b基因型为主，占50．39％；慢性丙肝患者的基因型较为复杂，存在较高比例的混合基因型。结论 江西地区HCV感染者以1b基因型为主．PCR徽板核酸杂交-ELISA方法可以准确、快速、简便进行HCV基因分型，在探讨HCV的流行病学及观察药物对各基因型的疗效方面具有重大的意义。     

庚型肝炎病毒NS3蛋白在杆状病毒载体中的表达及其抗原性研究

目的：利用Ｂａｃ－ｔｏ－Ｂａｃ ＨＴ杆状病毒系统在Ｓｆ９昆虫细胞中表达庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）ＮＳ３蛋白,并对表达产物的免疫原性进行研究。方法：将ＨＧＶ ＮＳ３基因片段定向克隆至转座载体ｐＥａｓｔＢｓｃ ＨＴａ,转化ＤＨ１０Ｂａｃ感受态细胞,３７℃振荡培养４ｈ使发生转座,用抗生素平皿筛选重组ｂａｃｍｉｄ。脂质体介导转染Ｓｆ９昆虫细胞,待细胞形态明显改变后收获细胞和培养上清液,将上清液再次感染Ｓｆ９细     

Ang-2和Tie-2在肝癌中表达及血管生成关系的研究

目的流式细胞术检测血管生成素2（Ang-2）及酪氨酸激酶受体2（Tie-2）在肝癌中的表达,探讨其与CD105标记的血管表达量的关系,以期为研究肝癌发生、发展及血管生成提供理论支持。方法以112例肝细胞癌标本为研究对象,60例癌旁组织、60例正常肝组织作为对照,应用流式细胞术分别检测Ang-2、Tie-2和CD105的表达,分析其在不同临床病理特征之间的意义及相互关系。结果 Ang-2、Tie-2和CD105在肝癌中的表达均明显高于癌旁组织和正常肝组织,Ang-2、Tie-2和CD105在不同肿瘤直径、不同临床分期、不同甲胎蛋白（AFP）值及有无转移患者中比较,差异有统计学意义,肝癌中Ang-2、Tie-2和CD105的表达呈正相关。结论 Ang-2和Tie-2与肝癌的发生、发展有密切关系,Ang-2和Tie-2参与CD105表达的血管生成,联合检测Ang-2、Tie-2和CD105可能有助于肝癌患者预后判断。     

Ang-2和Tie-2在肝癌中表达及血管生成关系的研究

目的流式细胞术检测血管生成素2(Ang-2)及酪氨酸激酶受体2(Tie-2)在肝癌中的表达,探讨其与CD105标记的血管表达量的关系,以期为研究肝癌发生、发展及血管生成提供理论支持。方法以112例肝细胞癌标本为研究对象,60例癌旁组织、60例正常肝组织作为对照,应用流式细胞术分别检测Ang-2、Tie-2和CD105的表达,分析其在不同临床病理特征之间的意义及相互关系。结果 Ang-2、Tie-2和CD105在肝癌中的表达均明显高于癌旁组织和正常肝组织,Ang-2、Tie-2和CD105在不同肿瘤直径、不同临床分期、不同甲胎蛋白(AFP)值及有无转移患者中比较,差异有统计学意义,肝癌中Ang-2、Tie-2和CD105的表达呈正相关。结论 Ang-2和Tie-2与肝癌的发生、发展有密切关系,Ang-2和Tie-2参与CD105表达的血管生成,联合检测Ang-2、Tie-2和CD105可能有助于肝癌患者预后判断。     

基因芯片法检测HBV多位点变异和基因分型的临床价值

目的运用基因芯片技术检测临床乙肝患者血清中HBV病毒的相关耐药基因突变及基因分型,评价该方法在监测HBV耐药及基因分型中的作用。方法在使用不同核苷类药物的260例乙肝患者血清中,采用寡核苷酸探针芯片检测其携带的HBV相关耐药基因变异情况及基因型。并随机挑取40例第2次扩增产物进行DNA序列分析。结果经基因芯片检测到拉米呋啶耐药31例（19．4％）,阿德福韦酯耐药6例（6％）。260例患者中C基因型180例（69．2％）,B型59例（22．7％）,BC混合型21例（8．1％）。结论基因芯片法可同时检测针对拉米呋啶、阿德福韦酯、恩替卡韦、替比呋啶的多重耐药基因位点以及基因分型,与基因测序法比较,结果完全一致,是一种可靠的检测方法,可为临床抗病毒药物的科学选择提供参考。