姜黄素联合阿扎胞苷对急性髓系白血病细胞增殖的影响及机制研究

目的 探讨姜黄素联合阿扎胞苷对急性髓系白血病细胞系KG-1α增殖的影响及其可能机制。方法 姜黄素和阿扎胞苷单独或联合处理KG-1α细胞,CCK-8法检测各组细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞周期和凋亡,Western blot检测细胞周期和凋亡相关蛋白以及p-AKT蛋白表达水平。结果 CCK-8结果显示,单用姜黄素和阿扎胞苷均对KG-1α细胞增殖有抑制作用,呈时间浓度依赖性,联合用药组细胞增殖抑制率明显增加;流式细胞术结果显示,联合用药组细胞明显阻滞于S期,凋亡率明显高于对照组和各单药组（P<0.05）;Western blot结果显示,与对照组相比,联合用药组p-AKT、CDK2蛋白表达水平显著降低,p27 KIP1、Caspase-3和γH2A.X蛋白表达水平显著上调(P<0.05)。结论 姜黄素联合阿扎胞苷可明显抑制KG-1α细胞增殖,其机制可能与下调AKT磷酸化水平有关     

全反式维甲酸对大鼠肾小管上皮细胞缺氧性损伤保护作用的体外研究

目的 探讨全反式维甲酸(atRA)对大鼠肾小管上皮细胞缺氧性损伤的保护作用及其相关机制.方法 对大鼠肾小管上皮细胞进行体外培养,根据研究需要分四组,分别为对照组、CoCl2刺激组、atRA刺激组以及CoCl2与atRA共同刺激组,做如检测:用凝胶电泳迟滞分析(EMSA)测定各组别细胞NFκB活性,用qRT - PCR和Western blo分别检测各组别细胞NFκB亚单位p65,Scpep1、VEGF mRNA与蛋白表达水平,用免疫共沉淀检测NFκB亚单位p65与Scpep1相互作用.结果 CoCl2刺激组中VEGF mRNA与蛋白水平的表达明显高于对照组(P＜0.01).atRA刺激组中VEGF的mRNA与蛋白水平表达明显低于对照组(P ＜0.05).CoCl2刺激组中p65 mRNA与蛋白水平的表达明显高于对照(P＜0.01).atRA刺激组中VEGF 的mRNA与蛋白水平表达明显低于对照组(P＜0.05).共同刺激组中p65的表达受到抑制,与对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).CoCl2刺激组中NFκB的DNA结合力明显高于正常组(P＜0.01).而atRA刺激组中NFκB的DNA结合力受到显著抑制,与对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.05).在共同刺激组,NFκB的活性同样受到抑制,与对照组比,差异有统计学意义(P＜0.05).atRA刺激组中Scpep1mRNA与蛋白水平的表达水平显著高于对照组(P＜0.01).与对照组比较,CoCl2刺激组中Scpep1的mRNA与蛋白水平表达无明显变化,差异无统计学意义(P＞0.05).免疫沉淀结果显示,p65与Scpep1存在相互关联.结论 atRA通过Scpep1对NFκB复合物形成及其活性产生抑制效应,从而减弱VEGF的表达,对缺氧性损伤的肾小管上皮细胞发挥保护作用.     

RTP801缺氧反应性核心序列调控下血管生长因子165和成纤维细胞生长因子2的高效共表达

目的获取人血管内皮生长因子165基因和人成纤维细胞生长因子2基因,克隆基因损伤诱导转录物4基因启动子中的缺氧反应性核心序列,以含有内核糖体进入位点的单启动子双表达载体为骨架构建真核表达载体,转染人胚肾293细胞,观察在正常和缺氧下人血管内皮生长因子165和人成纤维细胞生长因子2的表达。方法利用聚合酶链反应法从小鼠基因组中获取基因损伤诱导转录物4基因启动子的缺氧反应性核心序列337bp~511bp,替换含有内核糖体进入位点的单启动子双表达载体上的巨细胞病毒增强子(150bp~390bp)。通过聚合酶链反应法获取含有人血管内皮生长因子165基因和人成纤维细胞生长因子2基因的片段,插入含有内核糖体进入位点的单启动子双表达载体中的多克隆位点中,构建重组质粒。利用生物性可降解的聚乙烯亚胺多分支树状聚合物将重组质粒体外转染人胚肾293细胞,在正常和缺氧条件下分别培养36h,Western印迹法检测细胞内血管内皮生长因子165基因和人成纤维细胞生长因子2基因的表达,酶联免疫吸附法检测细胞培养基中分泌性蛋白血管内皮生长因子165和人成纤维细胞生长因子2的表达。结果真核表达载体经聚合酶链反应和酶切分析及测序证实构建成功,Western印迹法和酶联免疫吸附法检测证实重组质粒中血管内皮生长因子165基因和人成纤维细胞生长因子2基因在基因损伤诱导转录物4基因缺氧反应性核心序列介导下在缺氧人胚肾293细胞有高效共表达。结论获取的基因损伤诱导转录物4基因的缺氧反应性核心序列在缺氧状态下有增强下游基因表达的功能,含有该增强子的真核质粒在缺氧下高效表达血管内皮生长因子165和人成纤维细胞生长因子2。     

骨髓活检与涂片联检对153例全血细胞减少诊断价值的临床意义

目的探讨骨髓活检切片与骨髓涂片同步观察对全血细胞减少症诊断的临床意义。方法对153例全血细胞减少症患者,采用骨髓穿刺涂片、骨髓活检同步取材,涂片用瑞氏染色,骨髓活检采用塑料包埋、苏木精-姬姆萨-酸性品红染色,同时观察其骨髓涂片和骨髓活检切片。结果 153例中男67例,女86例,年龄3～83岁。血液系统疾病138例(90.2%),非血液系统疾病15例。骨髓活检切片诊断符合率87.58%,高于骨髓涂片71.90%。骨髓活检切片总误诊率为4.58%低于骨髓涂片25.36%。骨髓活检增生程度的判断优于骨髓涂片。结论骨髓活检更能客观地反映骨髓组织的真实情况,特别是在恶性血液系统疾病所致全血细胞减少的诊断、鉴别诊断等方面的价值更优于涂片。骨髓活检与涂片二者联合检测能有效提高全血细胞减少症的诊断准确性。