结核杆菌Pup-蛋白酶体系统与结核杆菌持留性的相关性研究

目的:本研究通过诱导结核杆菌在低氧环境中进入持留状态,比较分析不同时间点、不同环境下结核杆菌Pup、Dop、Paf A和Mpa基因的表达水平差异,探讨研究Pup-蛋白酶体系统对结核杆菌持留性的调控作用。方法:本实验以结核杆菌国际标准强毒株H37Rv菌株(以下简称为H37Rv菌株)为研究对象,在低氧、有氧环境下进行培养,分别提取不同时间点每组样本菌株的总RNA,并进行纯度鉴定。运用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR的方法,分别检测各组结核杆菌菌株的Pup、Dop、Paf A和Mpa基因的表达;比较分析不同时间点、不同环境下的各结核杆菌菌株Pup、Dop、Paf A和Mpa基因的表达水平差异。结果:在不同时间点对低氧环境下菌株Pup、Dop、Paf A和Mpa的表达水平进行检测,Pup、Dop、Paf A和Mpa基因的相对表达水平:低氧环境下,与0 d比较,Pup基因在4 d、7 d、10 d分别上调1.66、2.43、2.76倍,Dop基因在2 d、4 d、7 d、10 d分别上调1.38、1.91、2.54、3.28倍,Paf A基因在2 d、4 d、7 d、10 d分别上调1.22、1.75、2.37、2.67倍,Mpa基因在4 d、7 d、10 d分别上调1.66、2.21、2.63倍(P<0.05);以有氧环境组做对照,低氧环境下,相同时间点,Pup基因在4 d、7 d、10 d分别上调1.85、2.81、2.93倍,Dop基因在2 d、4 d、7 d、10 d分别上调1.20、1.76、2.01、3.01倍,Paf A基因在2 d、4 d、7 d、10 d分别上调1.22、1.57、2.29、2.29倍,Mpa基因在2 d、4 d、7 d、10 d分别上调1.16、1.58、2.16、2.69倍(P<0.05)。结论:低氧环境下,不同时间点,Pup、Dop、Paf A和Mpa基因的相对表达量存在差异;以有氧环境组作对照,相同时间点,低氧环境下与有氧环境下Pup、Dop、Paf A和Mpa基因的相对表达量也存在差异。Pup-蛋白酶体系统对结核杆菌持留性具有一定的调控作用。     

拔火罐内负压和温度动态变化的实验观察

对２３ 例健康成人拔火罐留罐１０ ｍ ｉｎ，观察罐内负压和温度的变化对罐内温热的耐受性及负压与罐斑形成情况的关系。结果发现：留罐过程中，其负压与温度呈正的直线相关，ｒ＝ ０．９４９ ２，（Ｐ＜ ０．０１），负压随罐内温度的下降［由（８１．２６±６．６７）°Ｃ至（３４．７３±１．４２）°Ｃ］呈逐渐减小［负压值由（－ ０．０３８±０．００８）ＭＰа至（－ ０．０４０±０．００８） ＭＰа］，并趋恒定。罐内的较高温度，并未导致局部皮肤出现水泡等灼伤现象。还初步观察到罐内负压越小，局部出现的罐斑面积较大且色泽较深。实验观察显示：留罐过程中，罐内温度下降变化较大，负压状态可随罐内温度的变化而改变。机体对罐内较高温热的耐受，是由于温度下降较快，且罐内呈粗真空状态，热幅射减弱。而负压的大小，可能影响罐斑的形成。     

香港特区中国人群HIV辅助受体CCR5开放读码区天然突变的研究

目的研究中国人群CCR5基因开放读码区(open reading frame,ORF)突变,分析其对HIV传播和致病的影响。方法研究对象为居住在香港的1099名成年中国人,其中785人为HIV阴性健康人,另外314人为确诊HIV感染的患者。通过对非同义突变CCR5 ORF进行完整测序,确定并分析CCR5突变在人群的分布。结果在CCR5 ORF共检测到10个突变,其中7个为非同义突变;突变R223Q是发生频率最高的突变,在正常人是4.7%,在HIV患者是4.5%;发生频率第二的突变是299(FS),在正常人是0.89%,在HIV患者是1.59%;其余CCR5 ORF突变发生频率均小于1%;突变G106R位于CCR5第三跨膜区,该突变可能通过影响ECL2结构而影响其辅助受体功能。结论CCR5 ORF突变在中国人群较为常见,一些突变可能影响其作为HIV辅助受体的功能,但在流行病学范围内对HIV感染及致病的影响不明显。     

PhoP/PhoR基因过表达结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv的构建及鉴定

目的构建PhoP和PhoR基因过表达结核分枝杆菌国际标准强毒株H37Rv(以下简称H37Rv),检测不同电压条件下电转化构建的PhoP/PhoR基因过表达H37Rv菌株PhoP/PhoR基因的表达水平。方法提取并鉴定结核分枝杆菌重组穿梭质粒pMV361-PhoP和pMV361-PhoR,利用电转化技术将结核分枝杆菌重组穿梭质粒pMV361-PhoP和pMV361-PhoR导入H37Rv的感受态细胞中,构建PhoP/PhoR基因过表达H37Rv,应用实时荧光定量PCR检测不同电压条件下电转化构建的PhoP/PhoR基因过表达H37Rv的PhoP/PhoR基因表达水平。结果成功构建PhoP/PhoR基因过表达H37Rv。应用实时荧光定量PCR检测不同电压条件下电转化构建的PhoP/PhoR基因过表达H37Rv的PhoP/PhoR基因表达水平,其中在电压为2 300~2 500V的范围内,电压越高,电转化菌的PhoP/PhoR基因表达量越高。结论成功构建了PhoP/PhoR基因过表达H37Rv菌株,以电压为2 500V电转化构建的PhoP/PhoR基因过表达H37Rv的PhoP/PhoR基因表达量较高。     

结核分枝杆菌Pup、Dop、PafA、Mpa基因重组穿梭表达质粒的构建及鉴定

目的构建结核杆菌泛素样蛋白-蛋白酶体系统中Pup、Dop、PafA和Mpa基因的重组大肠埃希菌-分枝杆菌穿梭表达质粒pMV361/Pup、pMV361/Dop、pMV361/PafA和pMV361/Mpa,并对其进行鉴定。方法提取结核杆菌国际标准强毒株H37Rv基因组DNA,以此为模板PCR扩增Pup、Dop、PafA和Mpa基因编码序列并测序。扩增产物克隆至大肠埃希菌-分枝杆菌穿梭表达质粒pMV361,并转化E.coli DH5α感受态细胞,利用PCR技术、双酶切技术及基因测序技术对构建的重组穿梭表达质粒进行鉴定。结果 PCR扩增的Pup、Dop、PafA和Mpa基因片段分别为213、1 683、1 377、和1 848bp,与预期长度一致;双酶切鉴定Pup、Dop、PafA和Mpa基因均成功插入穿梭表达质粒pMV361,测序显示插入穿梭表达质粒pMV361的Pup、Dop、PafA和Mpa基因序列与GenBank公布的序列一致。结论成功构建了重组大肠埃希菌-分枝杆菌穿梭表达质粒pMV361/Pup、pMV361/Dop、pMV361/PafA和pMV361/Mpa,为进一步研究结核分枝杆菌泛素样蛋白-蛋白酶体系统奠定了基础。     

合并Hoffa骨折的股骨远端髁上-髁间骨折的治疗

Hoffa骨折是一种较少见的股骨髁冠状面骨折,由于骨折位于髁的后方,多涉及关节面,且常与股骨远端其他类型骨折合并发生,使得这类骨折无论在诊断还是治疗方面,都存在着一定困难.我院自2000至2006年间,共收治股骨远端髁上-髁间骨折132例,其中合并有Hoffa骨折的18例,5例行非手术治疗,余全部手术治疗,报告如下.     

高能量小腿损伤后期骨不连伴软组织缺损的危险因素分析

目的 探讨高能量小腿损伤后期骨不连伴软组织缺损的危险因素.方法 回顾收治的高能量小腿损伤232例,后期骨不连伴软组织缺损26例的临床资料,分析其发生的相关因素,并进行统计学处理.结果 骨折类型、治疗方法 、手术时机等与后期骨不连伴软组织缺损具有相关性(P＜0.05),而其他因素无明显相关(P＞0.05).结论 早期伤情判断及正确处理有助于减少骨坏死伴软组织缺损的发生.     

微创技术在胫骨骨折钢板内固定中的应用

目的:探讨微创技术在胫骨骨折钢板内固定临床疗效。方法:应用小切口加微创技术治疗46例胫骨骨折。结果:获得有效随访46例,随访6～12个月,优良率89．18％。结论:基层医院在胫骨骨折钢板内固定治疗中,小切口加微创技术是一种较理想成熟的技术。