Klotho基因转染骨髓间充质干细胞移植对慢性心力衰竭大鼠心肌纤维化的影响

目的观察Klotho基因(抗衰老基因)修饰的骨髓间充质干细胞(BMSC)移植对慢性心力衰竭大鼠心肌纤维化的影响。方法分离、培养、扩增大鼠骨髓间充质干细胞。慢病毒介导Klotho转染至BMSC中,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测BMSC中Klotho mRNA的表达。制备大鼠慢性心力衰竭模型,随机分为正常对照组、模型对照组、增强型绿色荧光蛋白-BMSC组(EGFP-BMSC组)、EGFP-Klotho-BMSC组。细胞移植28天后多普勒超声检测心功能,荧光显微镜观察细胞存活及分布,HE染色观察心肌组织病理变化。Masson染色检测心肌胶原沉积含量和心肌纤维化程度。结果 Klotho转染BMSC后,BMSC中Klotho mRNA表达明显增多(P0.05)。移植28天后超声心动图结果显示,与EGFP-BMSC组及模型对照组比较,EGFP-Klotho-BMSC组左心室射血分数(LVEF)提高(P0.05)。EGFP-BMSC组及EGFP-Klotho-BMSC组心肌纤维化程度较模型对照组减轻(P0.05),EGFP-KlothoBMSC组较EGFP-BMSC组心肌纤维化改善更为明显(P0.05)。结论 Klotho基因联合BMSC治疗可进一步抑制心肌纤维化,减少心肌间质胶原沉积,改善心功能。     

成体细胞逆向分化的调控因子

目前成体细胞逆向分化的研究比较热。其中利用逆转录病毒载体携带诱导因子Oct4、Sox2、c-Myc、Klf4或Oct4、SOX2、Nanog、Lin28可以启动成纤维细胞发生重排逆向分化为胚胎样干细胞。成纤维细胞的逆向分化是一个很复杂的过程,这些诱导因子有的是促进成纤维细胞逆向分化的,有的是抑制成纤维细胞逆向分化的。总之在不同的时期这些诱导因子各自发挥着不同的作用,从而使成纤维细胞逆向分化。本文就成体细胞逆向分化的调控因子研究现状及展望作一综述。     

胎儿肌肉来源细胞的分离及其成肌分化研究

目的 观察胎儿肌肉来源细胞(flMDC)体外成肌分化能力以及在mdx鼠体内再生抗肌营养不良蛋白.方法 使用舍10％新生牛血清的DMEM/F12培养液,采用预贴壁方法从胎儿肌肉组织中分离fMDC.采用免疫染色鉴定肌肉特异标志的表达.肌内注射fMDC到6.5 Gy照射3d后的mdx小鼠股直肌,1个月后采用免疫荧光染色法和RT-PCR方法检测人抗肌营养不良蛋白和基因的表达.结果 采用预贴壁方法可从胎儿肌肉组织中分离到贴壁生长、梭型的flMDC.可在fMDC的一些长纤维细胞包浆中检测到MHC的表达,在一些细胞胞核中检测到成肌素的表达.可在注射fMDC的mdx小鼠肌肉中检测到人抗肌营养不良蛋白和基因的表达.结论 fMDC中存在MHC和成肌素的阳性表达,注射fMDC到照射过的mdx小鼠体内可以再生抗肌营养不良蛋白表达.     

骨髓干细胞移植在慢性肾功能衰竭中的研究应用

骨髓干细胞是骨髓组织中的一群具有自我更新、多向分化和高度增殖能力的未分化成熟细胞,是临床中应用最成熟的组织干细胞。各种肾脏疾病发展为终末期肾衰时传统的治疗方法不能有效的缓解肾功能,给病人也带来极大的痛苦,近年来国内外有研究报道,骨髓干细胞可以分化为肾小管和肾脏实质细胞,参与肾损伤修复,表明骨髓干细胞疗法可能成为慢性肾功能衰竭治疗的新措施,本文就近年来骨髓干细胞移植治疗肾脏疾病的研究作一综述。     

骨髓干细胞移植在慢性肾功能衰竭中的研究应用

骨髓干细胞是骨髓组织中的一群具有自我更新、多向分化和高度增殖能力的未分化成熟细胞,是临床中应用最成熟的组织干细胞。各种肾脏疾病发展为终末期肾衰时传统的治疗方法不能有效的缓解肾功能,给病人也带来极大的痛苦,近年来国内外有研究报道,骨髓干细胞可以分化为肾小管和肾脏实质细胞,参与肾损伤修复,表明骨髓干细胞疗法可能成为慢性肾功能衰竭治疗的新措施,本文就近年来骨髓干细胞移植治疗肾脏疾病的研究作一综述。     

慢性缺氧大鼠心肌HSP47 mRNA的表达及其与PⅠCP和PⅢNP含量的相关性研究

目的探讨慢性缺氧大鼠心肌HSP47 mRNA表达与血清Ⅰ型前胶原C端原肽(PⅠCP)、Ⅲ型前胶原N端原肽(PⅢNP)含量及心肌纤维化的相关性。方法模拟缺氧环境,建立慢性缺氧大鼠模型。将40只SD大鼠随机分为5组,每组8只。对照组不给于缺氧处理(A组),各慢性缺氧组大鼠分别缺氧7 d(B组)、14 d(C组)、21 d(D组)、28 d(E组)。采用实时荧光定量PCR(q-PCR)检测心肌中热休克蛋白(HSP47)mRNA的表达量;运用酶联免疫吸附测定(ELISA)方法检测血清及心肌中PⅠCP、PⅢNP的浓度;采用HE和MASSON染色法对对照组和慢性缺氧组大鼠进行组织切片染色。结果与对照组比较,模型组的HSP47 mRNA表达量增多(P0.01),血清和心肌的PⅠCP、PⅢNP浓度升高(P0.01);心肌HSP417 mRNA的表达与血清和心肌的PⅠCP、PⅢNP含量呈正相关(P0.05);HE和MASSON染色显示慢性缺氧组心肌组织广泛纤维化。结论在慢性缺氧条件下HSP47 mRNA的表达量与PⅠCP、PⅢNP浓度正相关,提示HSP47作为心肌胶原分子伴侣在慢性缺氧所致心肌纤维化中起一定作用。     

骨髓间充质干细胞及Klotho基因移植对慢性缺氧大鼠心脏重构的影响

目的观察骨髓间充质干细胞(BMSCs)及抗衰老基因(Klotho基因)移植对慢性缺氧大鼠心脏重构的影响。方法建立慢性缺氧28 d大鼠心脏重构模型,分为模型组、BMSCs组和Klotho组,并另设正常对照组不给予缺氧处理。分离、培养、鉴定大鼠BMSCs;重组慢病毒介导Klotho基因。模型建立结束后分别通过尾静脉移植BMSCs及Klotho基因至慢性缺氧大鼠体内,4周后用ELISA法检测血清和心肌中Ⅰ型前胶原羟基端肽(P I CP)和Ⅲ型前胶原羟基端肽(PⅢCP)的浓度,HE染色法观察心肌细胞的形态,MASSON染色检测心肌胶原含量,Tunel检测心肌细胞凋亡率。采用SPSS 17.0软件进行数据处理。计量资料以均数±标准差(±s)表示,组间比较采用t检验。结果移植BMSCs和Klotho基因4周后,BMSCs组和Klotho组血清和心肌中的PⅠCP及PⅢCP浓度、胶原容积分数(CVF)和心肌细胞凋亡率均较模型组显著降低(P0.01)。与Klotho组比较,BMSCs组心肌细胞凋亡率显著降低(P0.01)。结论 BMSCs和Klotho基因移植均能有效逆转心脏重构,BMSCs在抗心肌细胞凋亡方面优于Klotho基因。     

急性心肌梗死患者血清中CHOP表达水平的相关因素

目的 分析急性心肌梗死（AMI）患者发病24 h内血清内质网应激蛋白CHOP的相关因素。 方法 AMI入院的患者90例，患者发病24 h内留取外周静脉血，采用酶联免疫吸附法（ELISA）方法测定血清CHOP浓度。根据CHOP水平，取中位数1.24 ng/ml分成<1.24 ng/ml组（低表达组，n=43）和≥1.24 ng/ml组（高表达组，n=47），收集临床基本资料、实验室检验资料和影像资料并进行单因素分析、多因素分析和指标间相关性分析。 结果 单因素分析仅发现高表达组总胆固醇（TC）和空腹血糖（FPG）水平显著高于低表达组（分别P<0.01，P<0.05）；采用多因素Logistic回归模型进行多因素分析，发现TC的OR （95% CI）为10.492（2.568-42.871），P<0.01，TC是CHOP的独立相关因素；指标间的相关性分析，发现CHOP水平与TC和低密度脂蛋白胆固醇呈正相关，分别r=0.606（P<0.01），r=0.288（P<0.05）。 结论 AMI患者的血清中TC水平是CHOP的独立相关因素。     

诱导性自体干细胞移植后间质纤维化肾的结构与功能变化

目的观察诱导性自体干细胞经肾动脉移植对肾脏间质纤维化（UUO）模型免肾功能及结构的影响。方法诱导兔成纤维细胞逆向分化为自体多能干细胞，经肾动脉移植到体内，分别于UUO损伤前和UUO损伤后第1、4、8w和移植后第1、4、8w于兔耳缘静脉采血，检测血清肌酐（Scr）和尿素氮（BUN），观察肾功能情况，并于UUO损伤后第16w和移植后第8w随机于模型组和移植组各取1只兔肾做病理切片，观察肾组织病理变化。结果UUO损伤后第4w，两组动物Scr、BUN开始逐渐升高（P〈0．05或0．01）；从诱导性自体干细胞移植后第4W起，移植组Scr、BUN水平逐渐低于模型组（P〈0．05）。模型组可见肾小管数目减少、重度萎缩，萎缩的肾小管基底膜增厚、结构紊乱，肾小球囊腔扩张、囊腔内毛细血管球明显闭塞、呈缺血改变，肾间质弥漫性炎细胞浸润、重度纤维化，呈慢性病改变镜像；移植组可见肾小管中度萎缩，基底膜偏厚，小管多灶性扩张，肾小球囊腔扩张，肾间质散在炎细胞浸润、轻-中度纤维化改变。结论诱导性自体干细胞移植能降低肾脏UUO损伤后血清Scr和BUN水平，在一定程度上促进UUO损伤后的肾结构与功能修复。     

构建四氯化碳诱导的家兔肝纤维化模型

背景：四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化模型常用于抗肝纤维化药物的筛选和评价，但目前很少有四氯化碳诱导兔肝纤维化模型的报道。目的：建立家兔肝纤维化动物模型，并观察造模过程中动物的肝脏功能和组织病理学变化。设计、时间及地点：随机对照动物实验，于2007-12／2008—04存解放军成都军区昆明总医院实验动物巾心完成。材料：40只普通级日本大耳家兔，雌雄各半，体质量1．75～2．25k，用于建立家兔肝纤维化动物模型。方法：40只家兔采用随机数字表法分为实验组m=30）和对照组（n=10）。实验组腹腔注射40gm四氯化碳橄榄油溶液，对照组腹腔注射等董生理盐水。1-3周四氯化碳剂量为0．1～0．2mL／kg，根据动物的情况每周注射2次：3-6周四氯化碳剂量调整为0．3-0．4mL／kg；6～8周为0．4～0．5mL／kg。于注药后4，8，12周分别留取肝组织和血清标本，进行苏木精一伊红染色病理观察和生化检测。主要观察指标：实验家兔肝脏大体及病理学改变，静脉血生化指标的变化。结果：纳入口本大耳家兔40只，造模20d时，实验组家兔死广4只，原因主要为急性肝坏死及对药物的耐受性差。40d时死亡1只；50d腹腔注射因药物误入血管死亡1只。①对照组家兔肝脏外观呈暗红包，病理切片示：肝小叶结构完整，肝细胞围绕中央静脉呈放射状排列。实验组8周时，肝脏呈暗紫色，表面有轻微粟粒样改变，病理切片示：肝细胞点状及点灶状坏死，汇管区炎症细胞浸润，呈早期纤维化症状。12周时，肝脏呈灰褐色，有较明显粟粒样改变。病理切片示：肝小叶结构破坏，肝索排列紊乱，肝细胞脂肪变性，问质纤维组织增生，有炎性细胞浸润，为明显肝纤维化症状。③家兔血生化指标随着注药时间的延长，白蛋白含量及白球蛋白比值逐渐下降，球蛋白、间接胆红素、直接胆红素逐渐升高，谷丙转氨酶、谷草转氨酶前期明显升高后期又有所下降。结论：长期给予四氯化碳可导致家兔的肝纤维化形成，并有较明显的阶段性变化。