白藜芦醇对鼠纤维肉瘤S180细胞周期影响及其机制研究

目的:研究白藜芦醇对鼠纤维肉瘤S180细胞的抗肿瘤作用,并探讨其分子机制.方法:用MTT法检测白藜芦醇对鼠纤维肉瘤细胞系S180增殖的影响;PI单标流式细胞术检测白藜芦醇对S180细胞周期分布的影响;Western blot方法检测白藜芦醇对S180细胞 cyclinD1,P21Cip1蛋白表达的影响.结果:白藜芦醇对S180细胞增殖呈双相作用:低浓度促进细胞增殖;高浓度抑制细胞增殖,其抑制作用呈时效和量效关系.白藜芦醇治疗组S180细胞周期发生变化,细胞周期被阻滞于 G0/G1期.白藜芦醇以时间依赖方式下调周期蛋白 cyclinD1 的表达.上调白藜芦醇P21Cip1蛋白表达.结论:白藜芦醇低浓度促进S180细胞增殖,高浓度抑制细胞增殖.白藜芦醇可通过凋节细胞周期蛋白 cyclinD1,p21Cip1的表达调控细胞周期进程,抑制细胞增殖.     

日本血吸虫候选疫苗研究现状与展望

血吸虫病疫苗的研制工作已纳入WHO和我国主要疾病防治规划并取得了显著进展。近年来开展的血吸虫免疫机制和血吸虫基因组研究对血吸虫疫苗的研制起了积极的推动作用。本文主要对血吸虫蛋白疫苗、DNA疫苗和多价疫苗候选抗原的研究进展作综述。     

大肠杆菌J2_5的全基因组测序及比较基因组分析

目的：分析多耐药大肠杆菌J2_5的进化分群、耐药基因及毒力基因,为临床诊断及用药提供理论依据。方法：采用高通量测序法对J2_5进行全基因组测序,并使用多种生物信息学工具和数据库进行数据比对分析。结果：该菌的全基因组总长度为4.7 Mb,GC含量为50.78%。多位点序列分型(MLST)分析发现其ST型为ST2491,和大肠杆菌野生株 MG1655分型ST10 不同。系统发育树进一步分析表明J2_5与MG1655的亲缘关系较近。抗生素耐药性综合数据库(CARD)分析发现该菌有65 个耐药基因,主要通过4类耐药机制(抗生素外排泵、抗生素失活、抗生素靶点改变、降低对抗生素的渗透性)产生耐药性。毒力因子数据库(VFDB)分析发现该菌有7类40个毒力基因,编码黏附素、侵袭、自主转运蛋白等毒素蛋白。使用Prophage Hunt? er网上工具发现J2_5基因组存在3个前噬菌体,并且前噬菌体上带有1个毒力基因。结论：全基因组测序结果表明J2_5携带更多的毒力基因及耐药基因,是其致病性强和具有多种抗生素耐药性的原因。     

人乳头瘤病毒E7与人干扰素α-2b融合基因在中国仓鼠卵巢细胞中的表达

目的：构建人乳头瘤病毒（HPV）11-E7及人干扰素（IFN）α-2b的真核表达载体，并在中国仓鼠卵巢（CHO）细胞中表达。方法：同时用KpnⅠ、EcoRⅠ酶切pET-32a-IFNα-2b-linker-HPV11-E7及peDNA3．1，将酶切产物纯化回收，两者的回收产物进行连接反应。连接产物转化大肠杆菌感受态细胞DH5α，随机挑选阳性克隆并提取质粒酶切鉴定；用脂质体法转染CHO细胞．用免疫荧光法检测融合基因的表达。结果：DNA测序结果显示，成功地将IFN-α-2b-linker-HPV11-E7装入pcDNA3．1的KpnⅠ、EcoRⅠ酶切位点之间，且其序列与设计完全一致；激光扫描共聚焦显微镜观察可见目的蛋白的表达。结论：成功地构建了HPV11-E7及IFNα-2b的真核表达载体，并在CHO细胞中表达，为提高DNA疫苗免疫效果的研究奠定了基础。     

PCR技术在血吸虫感染检测中的应用

血吸虫病目前仍是一种严重危害人类健康的寄生虫病。多聚酶链反应(PCR)是分子生物学技术检测DNA最灵敏的方法之一,在近期血吸虫病检测与诊断研究中的应用越来越多。虽然各研究所用PCR技术的检测标本、靶基因选择各异,诊断效率也不尽相同,但是PCR作为一种高特异性敏感性检测方法,与其他检测方法相比仍颇具优势。本文综述了PCR技术在血吸虫感染检测中的应用情况。     

Th1及Th2型细胞的变化与子宫内膜异位症相关性研究

目的 从免疫学角度探讨Th1及Th2型细胞的变化与子宫内膜异位症(EM)的关系.方法 应用流式细胞技术检测40例 EM 及40 例对照组外周血中Th1/Th2型细胞的百分比.结果 EM 组外周血中,Th1型细胞较对照组显著降低(P<0.05);而Th2型细胞较对照组显著升高(P<0.05);EM组Ⅲ～Ⅳ期患者外周血中,...     

H3N2流感病毒非结构蛋白-1真核表达载体的构建与表达及其对293T细胞增殖的影响

目的:构建甲型H3N2流感病毒非结构蛋白-1( nonstructal-1,NS1)真核表达载体并表达其编码蛋白;探讨NS1对细胞增殖的影响?方法:从江苏省甲型H3N2流感病毒毒株提取病毒RNA,采用RT-PCR技术扩增NS1全长基因,将其克隆至pMD18-T Simple Vector中构建pMD18-T/NS1质粒,双酶切pMD18-T/NS1与pXJ40-HA后,构建真核表达载体pXJ40-HA-NS1,经酶切及测序鉴定后将质粒转染到293T细胞中,通过免疫印迹法鉴定NS1蛋白的表达?3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐[3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di-phenytetrazoliumromide,MTT]法检测NS1转染细胞后对细胞增殖的影响? 结果:经双酶切?测序鉴定证实NS1基因的真核表达载体构建成功;免疫印迹法证实NS1蛋白的表达?MTT法证实转染NS1质粒后对细胞增殖有抑制作用?结论:成功克隆了NS1全长基因,构建了其真核表达载体,并初步验证了NS1蛋白过表达后能抑制细胞的增殖,该表达载体的构建为后期建立稳定表达NS1的细胞模型和NS1蛋白对细胞增殖和凋亡作用机制的进一步研究提供了基础?     

三种革兰阴性杆菌抗消毒剂基因检测及其对碘伏的抗性研究

目的了解临床分离的革兰阴性杆菌抗消毒剂基因携带情况及其对碘伏消毒剂抗性。方法采用基因扩增法和稀释法对临床分离的三种革兰阴性杆菌抗消毒剂基因和抗菌性能进行了检测,并与标准菌株作平行比较检测。结果临床分离的三种21株革兰阴性杆菌中,检出抗消毒剂基因(qacEΔ1-su lⅠ)阳性菌株有13株,阳性率为61.9%;三种菌抗消毒剂基因携带率之间无明显差别,大肠杆菌标准株抗消毒剂基因检测阴性。有1株抗消毒剂基因阳性的铜绿假单胞菌对碘伏的最小抑菌浓度明显高于其标准株。结论临床分离的三种21株革兰阴性杆菌抗消毒剂基因携带率比较高,但其对碘伏消毒剂的抗性未观察到明显变化。     

人IFNα-2b对HPV11-E7 DNA疫苗的免疫佐剂效应

强Th1型应答为主,对Th2型应答无明显影响.     

盐酸法舒地尔抗日本血吸虫感染小鼠肝纤维化的作用

目的观察Rho激酶抑制剂盐酸法舒地尔对日本血吸虫感染小鼠肝脏纤维化以及肝星状细胞(hepatic stel-late cells,HSCs)的影响。方法 30只雌性BALB/c小鼠随机均分为3组,分别为健康对照组、感染组和干预组,感染组和干预组小鼠经腹部皮肤感染日本血吸虫尾蚴(14±2)/只,感染后6周,干预组给予盐酸法舒地尔(10 mg/kg)腹腔注射,2次/d,连续7 d,健康对照组和感染组注射等体积生理盐水。末次注射12 h后剖杀小鼠,分别取健康对照组和感染组小鼠肝脏固定、切片,苏木素-伊红(HE)染色或天狼星红染色后镜下观察。检测3组小鼠肝脏羟脯氨酸(hydrox-yproline,Hyp)含量,以及α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、Ⅰ型胶原α1链(typeⅠcollagenα1,Col1α1)和上皮细胞转化序列2(epithelial cell transforming sequence 2,Ect2)的mRNA水平。采用原位灌注密度梯度离心法分离肝星状细胞,检测α-SMA、Col1α1和Ect2的mRNA水平。结果感染组小鼠肝内汇管区和虫卵肉芽肿周围炎症...