新生期大鼠反复惊厥的实验研究

目的建立用戊四氮(PTZ)制作的新生期大鼠反复惊厥发作的动物模型,并研究其行为学表现及远期结果。方法采用生后5 d(P5)的SD大鼠28只(随机分成实验组16只和对照组12只),予戊四氮腹腔注射连续给药5 d,每天观察实验动物的行为学变化,并在生后45 d用Y-型电迷宫测试大鼠的学习记忆能力,用尼氏染色和Timm染色法观察细胞形态学及苔藓纤维发芽的情况。应用SPSS 13.0软件进行2组均数的t检验,P<0.05定为差异有统计学意义。结果造模期,随着日龄增加,动物惊厥敏感性下降,但惊厥发作程度加重。生后45 d,实验组Y-型电迷宫测试中达到学会标准所需次数明显多于对照组(P<0.01),24 h记忆保持率明显低于对照组(P<0.01);Timm染色中,实验组大鼠的海马组织可见明显苔藓纤维发芽,而对照组则不明显(P<0.01);尼氏染色中2组均未见明显的神经元细胞坏死和丢失。结论新生期大鼠反复惊厥发作模型基本符合人类新生儿惊厥发作,可导致远期学习记忆能力下降,且有潜在的癫痫可能。本实验通过常用的致痫剂戊四氮制作新生期大鼠反复惊厥发作的动物模型,操作性强,重复性好,经济简便,为将来研究反复惊厥发作的新生儿提供了可靠的动物模型。     

加倍体半夏与野生半夏中有效成分的比较测定

 目的 以鸟嘌呤核苷、腺嘌呤核苷和麻黄碱3种生物碱类物质为指标,从药效物质基础方面对加倍体（十六倍体）半夏中这3种成分的绝对含量及它们与三者总量的相对比率进行测定,并与八倍体半夏及野生半夏进行比较。方法 利用HPLC测定半夏中鸟嘌呤核苷、腺嘌呤核苷和麻黄碱的含量,比较3种半夏中这3种成分的绝对含量以及它们之间相对比率的差异。结果 与八倍体半夏和野生半夏相比,十六倍体半夏中鸟嘌呤核苷含量分别提高了82.3%和28.6%,腺嘌呤核苷含量分别提高了71.9%和22.9%,麻黄碱含量分别提高了42.6%和15.9%。3种成分相对于其总量的比率分别为：十六倍体半夏：34.18%、12.7%、53.12%;八倍体半夏：26.9%、10.2%、62.9%;野生半夏：30.89%、12%、57.12%。结论 十六倍体半夏块茎中鸟嘌呤核苷、腺嘌呤核苷与麻黄碱的绝对含量均显著高于八倍体半夏与野生半夏;而这3种成分相对于其总量的比率稳定,说明十六倍体半夏在染色体数目倍增后,所含有效药用成分的增加是同步的。因此,十六倍体半夏可作为培育半夏新品种的优良材料。     

喷昔洛韦的合成工艺研究

目的以4-溴-2,2-二甲氧羰基-丁酸甲酯为原料合成新型抗病毒药物喷昔洛韦。方法采用2-氨基-6-氯嘌呤位置有择烷基化反应,缩合产物不经分离直接脱羧、还原、酰化、水解得到目标产物。结果总收率由文献的27%提高到33.1%。产物结构经元素分析、质谱、核磁共振氢谱及碳谱得到确证。结论该工艺简化了后处理操作,降低了原料成本,更易于工业化生产。     

3-硝基丙酸脑内注射诱导新生鼠脑室周围脑白质软化模型的建立

目的探讨脑内注射3-硝基丙酸（3-NPA）建立新生鼠脑室周围白质软化（PVL）模型的可行性，探索可靠的造模方法。方法新生5d（P5）SD大鼠64只，随机分成NPA与磷酸盐缓冲液（PBS）组，每组32只，脑立体定位仪定位于左侧脑室上方胼胝体，分别注入3-NPA（300mmol／L）和等量PBS，于造模后24h（P6）、48h（P7）、72h（P8）、9d（P14）灌注固定取脑，作HE染色及少突胶质细胞04、髓鞘碱性蛋白（MBP）免疫组织化学染色。结果HE染色显示P6、P7、P8NPA组皮质下及脑室周围白质出现疏松及液化灶，P14出现脑室扩大，脑室指数较PBS组高，有显著性差异（P〈0．01），脑皮质无明显变化；04染色示NPA组阳性细胞较PBS组明显减少，差异有显著性（P〈0．01）；MBP免疫染色示NPA组平均光密度值较PBS组低，有显著性差异（P〈0．05）。结论3-NPA脑内注射诱导新生鼠PVL模型以脑室周围白质损伤为突出表现，皮质无明显改变，可作为疾病研究的可靠模型。     

单次剂量注射重组人促红细胞生成素对围生期缺氧导致惊厥新生大鼠的远期影响

目的 探讨单次剂量注射重组人促红细胞生成素(rhEPO)对围生期缺氧导致惊厥的新生大鼠的远期神经保护作用.方法 生后10 d(即P10)新生大鼠104只,随机分成4组各26只.①缺氧-EPO组:腹腔注射rhEPO(1 000 U/kg),0.5 h后置急性缺氧模型装置(氧浓度低至4%);②缺氧-生理盐水(NS)组:腹腔注射等量生理盐水后置入同上缺氧密闭装置;③常氧-EPO组:相同时间点腹腔注射rhEPO后置常氧浓度的同样密闭装置;④常氧-生理盐水组:相同时间点腹腔注射等量生理盐水后置入同上常氧浓度密闭装置.在P30,Y-型电迷宫测试大鼠的学习记忆能力,戊四氮测试大鼠药物性惊厥的敏感性,尼氏染色评估神经元细胞的丢失情况,Timm 染色观察苔藓纤维发芽情况.结果 围生期缺氧导致惊厥的程度及敏感性在缺氧-EPO组和缺氧-NS两组间比较差异无统计学意义.在P30时间点,缺氧-EPO 组大鼠Y-型电迷宫测试中达到学会标准所需次数明显少于缺氧-NS组(P ＜ 0.05),与常氧组比较差异无统计学意义;24 h记忆保持率明显高于缺氧-NS组(P ＜ 0.05),与常氧组差异无统计学意义;对戊四氮所致惊厥的敏感性较缺氧-NS组明显降低(P ＜ 0.05),较常氧组增高(P ＜ 0.01);各组大鼠均未见明显神经元细胞丢失;缺氧-EPO组大鼠齿状回颗粒细胞上层的苔藓纤维发芽分数和缺氧-NS 组差异无统计学意义,均较常氧组增高(P ＜ 0.05),常氧两组均未见明显苔藓纤维发芽.以上各项测试结果在常氧组间差异均无统计学意义.结论 EPO提高了围生期缺氧导致惊厥的新生鼠在发育期(P30)的学习和记忆能力,降低了对化学致疒间剂的发作敏感性,rhEPO对围生期缺氧导致惊厥的大鼠有远期的神经保护作用.EPO对围生期缺氧惊厥大鼠发展为癫疒间无明显的抑制作用.     

基因多态性研究中基因芯片的应用

一、概述在生命体中基因信息的阅读、贮存、转录和翻译均通过分子识别的规则来进行。核酸包含了大量的可通过碱基互补匹配识别的分子序列。应用已知序列的核酸探针进行杂交 ,对未知核酸序列进行检测 ,是分子生物学中常用的研究手段之一 ,也是基因芯片工作的基本原理。基因芯片 ,又称ＤＮＡ微探针阵列 (ｍｉｃｒｏａｒｒａｙ) ,集成了大量的密集排列的大量已知序列探针 ,通过与被标记的若干靶核酸序列互补匹配 ,与芯片特定位点上的探针杂交 ,这样 ,利用基因芯片杂交图象 ,确定杂交探针的位置 ,便可根据碱基互补匹配的原理确定靶基因的序列[1 …     

寡核苷酸阵列芯片快速鉴定大肠杆菌O157:H7初步研究

目的设计、制作一种微型化寡核苷酸阵列芯片，评价快速鉴定肠出血性大肠杆菌O157：H7的效果。方法多重PCR扩增大肠杆菌O157：H7七个特异性基因位点（rfbE、flicH7、intimin、Shiga-like toxins Ⅰ and Ⅱ、hemolysin A和uidA）．通过PCR反应掺入SpectrumOrang^TM-dUTP获取荧光标记的靶序列，与制备的芯片寡核苷酸探针杂交。结果寡核苷酸阵列芯片检测结果与试验预期相符，获取的杂交图分辨效果明显优于多重PCR琼脂糖凝胶电泳。结论基于玻片的寡核苷酸阵列芯片制作简便，鉴定病原菌检测细菌毒力因子快速、灵敏、特异，有良好的应用前景。     

基于图像投影的基因芯片图像网格定位

对基因芯片图像进行网格定位是芯片分析的前提和关键。利用芯片图像在水平方向和竖直方向的投影,可将二维图像分析问题转化为一维信号处理问题。本文对图像的投影信号进行算术平均滤波,然后利用不同参数滤波后投影信号间的灰度偏差进行网格定位。实验表明该方法对芯片信号点的定位有很高的准确性,且算法简单易行。     

基因芯片技术在药物研究和开发中的应用

基因芯片技术能够对细胞或生物体中核酸序列信息进行快速、高通量和低成本的检测和分析。基因芯片已在化学药物的筛选和评价,新的药物作用靶分子的确定,药物的代谢和一生及其个体化差异的检测,以及药物作用机理等方面得到了应用,并将为在分子水平上建立现代中药理论方面发挥重要的作用。     

半巢式甲基化特异性聚合酶链反应在胃癌p16基因甲基化检测中的应用

目的　改进甲基化特异性聚合酶链反应 (MSP) ,采用半巢式MSP检测胃癌组织p16基因启动子区CpG岛的甲基化状态。方法　用亚硫酸氢盐修饰被测DNA后 ,采用半巢式MSP(引物分别为MS ,M1A和MS ,M2A) ,分析了 6 0例胃癌组织及相应正常组织中p16基因的甲基化状态。结果　单独用MSP ,胃癌组织中p16基因甲基化的发生率为 80 %。采用半巢式MSP ,甲基化发生率为86 7% ,比单独采用MSP提高了几个百分点 ,并提示胃癌病例的p16基因启动子区存在甲基化发生的不同模式。结论　半巢式MSP能够有效地提高灵敏度和减少假阳性。同时 ,免疫组化的结果也说明了p16基因异常甲基化与胃癌组织P16蛋白的表达密切相关。