稀土元素对冬凌草愈伤组织生长及冬凌草甲素、乙素含量的影响

目的:探讨稀土元素镧、铈对冬凌草愈伤组织生长及冬凌草甲素、乙素含量的影响.方法:冬凌草均匀愈伤组织在添加不同浓度La3或Ce3的培养基中培养,通过质量法测定愈伤组织鲜质量、绘制生长曲线,HPLC测定甲素、乙素含量.结果:CeCl3·7H2O浓度为1μmol·L-1时,愈伤生物量最高,是空白条件下的2.4倍.空白及对照条件下甲素含量均为0;空白条件下乙素含量最低为0.11％,随着Ce3+浓度升高而升高,当浓度为10 μmol· L-1时高达0.58％;乙素随着La3+浓度升高而降低,当浓度为0.1 μmol· L-1时含量高达0.44％.结论:0～ 10 μmol·L-1的La3+及Ce3+均有利于冬凌草愈伤生物量的积累及乙素的合成,对甲素的合成无影响,将CeCl3 ·7H2O浓度10 μmol· L-1作为最佳条件选择.     

The cell death of C6 astrocytoma cells induced by oridonin and its mechanism

Many studies have shown that oridonin, a compound purified from Rabdosia rubescens, was able to suppress proliferation and induce apoptosis in many cell types. In this study, In order to investigate the proliferation suppression and apoptosis-inducing effect of oridonin on Rat C6 astrocytoma cells, we treated C6 cells with different concentrations of oridonin for various time intervals. Oridonin concentration-time viability curve were used to test the effect of oridonin on the C6 cells. The distribution of cell cycle and percentage of apoptosis cells was analyzed by flow cytometry. The protein expression of Bax, Bcl-2, and caspase-3 in the C6 cells was detected by western blot analysis. The results of viability curve demonstrated that oridonin induced suppression of proliferation in a concentration- and time-dependent manner. Hochest 33258 staining and flow cytometry revealed that oridonin induced apoptosis and arrested the entry into G2/M phase of C6 cells. According to the results of Western blot, oridonin down-regulated Bcl-2, up-regulated Bax protein, and activated caspase-3 in the oridonin-treated C6 cells. All together, our results suggested that oridonin can cause the suppression of proliferation in C6 astrocytoma cells and the cell death induced by oridonin might be associated with mitochondria- mediated apoptosis by activating caspase-3.     

冬凌草植株再生过程中冬凌草甲素的积累机制

目的:探讨冬凌草植株再生过程中培养物的生理特性与冬凌草甲素积累之间的机制。方法:采用紫外分光光度法、高效液相法测定不同时期培养物内叶绿素、可溶性糖、可溶性蛋白、丙酮酸、冬凌草甲素的含量。结果:培养物内叶绿素、丙酮酸、可溶性蛋白含量与冬凌草甲素含量呈正相关,相关系数分别为0.781,0.897,0.866;而可溶性糖含量与冬凌草甲素含量呈负相关,相关系数为-0.515。结论:冬凌草培养物内叶绿素、丙酮酸的含量、可溶性蛋白与冬凌草甲素积累有相互促进的关系,而可溶性糖变化主要与培养物细胞的生长、发育关系密切。     

前列腺癌细胞内冬凌草甲素的浓度动态变化

建立了高效液相色谱法测定人前列腺癌PC-3细胞内的冬凌草甲素.采用C<,18>色谱柱,以甲醇-水(53:47)为流动相,检测波长238 nm.细胞内冬凌草甲素在10～300 ng/ml浓度范围内线性关系良好,绝对回收率为77.79%～81.32%,RSD为3.29%～4.09%;日内和日间RSD均小于8%.人前列腺癌PC-3细胞与冬凌草甲素溶液或冬凌草甲素纳米粒孵育后,采用该法测定胞内药物浓度动态变化过程.结果表明,纳米粒可显著提高细胞内冬凌草甲素的聚集并减慢其消除.     

LC-MS法测定犬血浆中冬凌草甲素含量

目的:建立犬血浆中冬凌草甲素浓度的LC-MS测定方法,为深入研究冬凌草甲素在犬体内的药代动力学特征提供有效、可靠的检测手段。方法:采用Shim-pack VP-ODS(150 mm×2.0 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-水(50∶50)为流动相,HPLC/电喷雾离子源质谱检测(HPLC/ESI-MS),乙酸乙酯作为萃取剂,检测犬血浆中冬凌草甲素的含量,并评价方法的稳定性和重现性。结果:本方法在0.0125~6.4μg.mL-1浓度范围内线性关系良好(R2=0.9994),定量限为0.0125μg.mL-1,平均回收率为71.18%~76.99%,日内精密度为2.4%~5.0%,日间精密度为1.2%~6.3%。室温放置30 min,样品预处理后放置24 h、-24℃贮存14 d及反复冻融3次稳定性良好。其RSD均小于15%。结论:该分析方法可行性高,重现性好,可用于研究冬凌草甲素在犬体内药代动力学特征。     

冬凌草甲素对人宫颈癌HeLa细胞线粒体凋亡途径的影响

目的 观察冬凌草甲素对人宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响,并探讨其诱导HeLa细胞线粒体凋亡的机制.方法 体外培养HeLa细胞,分别以0μmol/L(设为空白对照组)、5μmol/L、10μmol/L、25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L冬凌草甲素处理12 h、24 h、36 h、48 h,CCK-8法检...     

冬凌草甲素与长春新碱、顺氯氨铂合并用药方案的实验研究

采用随机组合的方法研究冬凌草甲素、长春新碱和顺氯氨铂三药不同组合方案对S_(180)、ECA和P_(388)小鼠淋巴细胞白血病的疗效。实验表明,在三种瘤株中,冬凌草甲素与顺氯氨铂合用组的疗效优于任何其他两药和三药合并方案,表现为协同作用。三药在体外对ECA细胞杀伤作用的实验结果表明,冬凌草甲素与顺氯氨铂;长春新碱与顺氯氨铂;及三药合用方案均显示协同杀伤作用。     

冬凌草甲素诱导三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡及对细胞内活性氧水平的影响

冬凌草甲素是从中药冬凌草Rabdosia rubescens中分离得到的一种贝壳杉烯二萜类的天然有机化合物,具有抗炎、抗菌、抗肿瘤等多种生物活性。该实验观察冬凌草甲素对三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的影响及其可能的作用机制。采用MTT法检测冬凌草甲素对MDA-MB-231细胞的增殖抑制作用,PI单染、Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术分析冬凌草甲素对MDA-MB-231细胞凋亡的影响,活性氧(ROS)试剂盒检测细胞内ROS水平的变化,Western blot分析PARP,Bcl-2,caspase-3蛋白的表达情况。结果表明,冬凌草甲素对乳腺癌MDA-MB-231细胞具有明显的凋亡诱导作用,显著升高细胞内的ROS水平,下调抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,并促进caspase-3及其底物PARP的切割。提示,冬凌草甲素诱导MDA-MB-231细胞凋亡的作用可能与升高细胞内ROS水平、下调Bcl-2的表达以及激活caspase-3相关。     

冬凌草甲素抑制多发性骨髓瘤细胞H929增殖和诱导凋亡的分子机制

目的:研究不同浓度的冬凌草甲素对多发性骨髓瘤细胞H929增殖和凋亡的影响及其调控机制。方法:使用不同浓度的冬凌草甲素处理多发性骨髓瘤细胞H929；利用CCK-8法检测细胞增殖抑制率；利用Annexin-FITC/PI双染和流式细胞仪检测细胞凋亡能力；利用蛋白印迹实验检测凋亡通路中BCL-2家族蛋白及PI3K/Akt通路中相关蛋白的表达水平。结果:细胞增殖实验结果显示冬凌草甲素显著抑制了多发性骨髓瘤H929细胞的增殖，且呈浓度和时间依赖性；细胞凋亡实验结果显示冬凌草甲素显著促进了多发性骨髓瘤H929细胞的凋亡，呈浓度和时间依赖性递增；蛋白印迹实验结果显示，随着冬凌草甲素浓度的增加，多发性骨髓瘤H929细胞中BCL-2蛋白、p-PI3K蛋白和p-Akt蛋白表达量递减，Bax蛋白表达量递增。结论:冬凌草甲素能有效抑制骨髓瘤H929细胞增殖，诱导细胞发生凋亡，其机制可能与PI3K/Akt信号通路的受抑及凋亡通路的活化有关。     

冬凌草甲素协同TRAIL诱导OCM-1A细胞凋亡的作用机制

目的：通过实验研究考察肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体（TRAIL）与冬凌草甲素联合使用时对脉络膜黑色素瘤细胞株OCM-1A细胞和C918细胞的抑制作用。方法：实验研究。以体外培养OCM-1A细胞和C918 细胞为研究对象，加入不同浓度的冬凌草甲素（终浓度分别为0.625、1.25、2.5、5、10、20 μmol/L）和TRAIL（终浓度分别为6.25、12.5、25、50、100、200 ng/ml），利用MTT法检测细胞增殖活性，用PI单染结合流式细胞技术检测细胞周期分布，Annexin-V/PI双染检测细胞凋亡，用免疫印迹检测凋亡相关蛋白如死亡受体DR5、A-Caspase-3 蛋白、XIAP蛋白表达量变化。数据采用单因素方差分析和独立样本t检验进行分析。结果：TRAIL单独使用时，对OCM-1A细胞有一定程度的抑制，TRAIL浓度为200 ng/ml时抑制率最高为36.5%；冬凌草甲素单独作用时，对OCM-1A细胞的抑制不明显；当二者联合使用时，对OCM-1A的抑制作用明显增强，TRAIL 200 ng/ml联合冬凌草甲素20μmol/L作用于OCM-1A时抑制作用最强，抑制率为87%，而对C918的抑制增强效果不明显。流式细胞仪检测结果发现处于G2 期细胞显著增多，提示细胞被阻滞在G2/M期，免疫印迹结果显示DR5、A-Caspase-3 表达增强，而凋亡抑制蛋白XIAP表达减弱。TRAIL与冬凌草甲素联合使用后对C918细胞的诱导凋亡作用不明显，差异没有统计学意义。结论：冬凌草甲素和TRAIL共同作用于OCM-1A细胞时，明显增强各自单独作用时候诱导的凋亡作用。