免疫转印法检测扩张型心肌病抗心肌线粒体ADP/ATP载体自身抗体的应用探讨

以猪心肌线粒体为材料,应用免疫转印技术检测抗心肌线粒体ADP/ATP载体自身抗体。结果表明,扩张型心肌病患者血清中存在抗心肌线粒体30kd多肽抗体。检测的特异性为100%,敏感性为52.38%。     

野生型P53基因导入对膀胱癌细胞生长抑制和H—ras基因表达调控

通过逆转录病毒载体的将外源野生型Ｐ５３基因导入膀胱癌细胞ＢＩＵ－８７和ＥＪ，使细胞在体外标准培养条件下生长速率降低，丧失裸鼠致瘤性。细胞周期分析显示Ｇ０＋Ｇ１细胞比率明显增高，已证明，ＢＩＵ－８７和ＥＪ细胞都有ｒａｓ基因突变和表达扩增。     

肝细胞物质运输单位基因表达与胆汁淤积的分子机制

人体通过肝细胞排放入胆汁的物质是依赖各种运输单位完成。胆汁淤积是由于有关胆汁分泌运输蛋白的基因损害或获得性因素引起。胆汁分泌和排泄受很多因素影响 ,如肝细胞水合状态、作用底物、细胞因子、趋化因子、毒素、激素细胞内外调节物和胆汁中各种成分 ,其中对运输蛋白的信号转导和基因转录的影响是现在研究的热点。近几年来肝胆系统一些运输单位的相继克隆 ,促使进一步了解胆汁形成和胆汁淤积的分子基础。运输单位的基因突变和暴露于淤胆性损害如 :某些药物、激素和细胞因子等获得性因素或二者同时作用 ,都可以引起肝胆运输系统功能及基…     

编码HIV—1 Pr42^gag的杆病毒转移载体的构建及鉴定

本文作者采用聚合酶链式反应（ＰＣＲ），从ＨＩＶ－１ ｃＤＮＡ克隆ＢＨ１０中扩增出Ｐｒ４２＾ｇａｇ的基因片段，经适当的限制性内切酶消化后插入到杜状病毒转移载体ｐＢａｃＰＡＫ９中，使其处于多角蛋白启动子的控制之下，构成重组转移载体ｐＢａｃＧＡＧ４２。酶切鉴定结果号预期的一致。再用载体上多克隆位点两翼的引物对连接处进行序列分析，结果表明外源基因片于多角蛋白启动子的控制下，且成功地引入了起始码和终止码。     

利用T7和PR双启动子的新型表达载体的构建及其应用

构建具有λＰＲ与Ｔ７双启动动子的新型原核表达载体ｐＤＯＧ，以便使用同一载体研究不同诱导条件下，重组蛋白在大肠杆菌中表达，降解以及折叠的情况，从而选择最佳的诱导条件。方法采用ｐＢＶ２２０与ＰＥＴ－３表达载体作为原始材料，将ＰＥＴ－３上包括Ｔ７启动子与Ｔ７ｇ－１０释译起始序列的一段序列克隆到     

生物降解左旋—18甲基长效避孕埋植剂载体材料的生物相容…

采用生物降解的嵌段型聚己内酯丙交酯高分子材料为载体制成的左旋－１８甲长效避孕埋植剂是一种新型的皮下埋植剂，为尽快在临床推广使用，按照中国药品生物制品鉴定所等单位制定的标准对这一材料进行了详细的生物相容性研究，包括皮肤刺激试验、皮肤致敏试验、体外溶血试验、急性毒性试验、细胞毒性试验、鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验－Ａｍｅｓ试验、哺乳动物增减功能染色体畸变 试验小、小鼠骨髓多染红细胞微核试验、致畸胎试验和     

一种直接高效克隆PCR产物的载体制备

Ｂｌｕｅｓｃｒｉｐｔ经ＥｃｏＲ Ｖ酶切后，在Ｔａｑ酶作用下加入ｄＴＴＰ使其３’端加上碱基“Ｔ”而成为３’端突出的粘性末端载体。用此载体直接与ＰＣＲ产物连接进行克隆。克隆效率比采用平端载体克隆的效率提高约５０倍。     

巨噬细胞炎性蛋白4的突变和原核表达

目的 探索如何抑制嗜酸细胞的趋化作用，选择β-趋化因子巨噬细胞炎性蛋白4（MIP4）的突变性（Met-MIP4)作为趋化因子受体3的拮抗剂，将Met-MIP4基因在原核细胞中进行表达。方法 设计MIP4基因的PCR引物并进行氨基酸突变，将MIP4N末端的丙氨酸突变为蛋氨酸，以正常人肺酸突变，将MIP4N末端的丙氨酸突变为蛋氨酸。以正常人肺cDNA文库为模板，PCR方法获取Met-MIP4基因，克隆入载体pUC19，测序验证序列已得到突变，将正确的基因插入到GST融合表达载体pGEX-4T中，以IPTG诱导表达。结果 PCR产物为220bp左右的片段，连接入pUC19质粒后测序验证获得正确突变，构建的pGEX-4T融合表达载体在大肠杆菌中表达，经SDS-PAGE凝胶电泳显示有大小约34kU的新生融合蛋白表达。结论 成功突变并克隆了β-趋化因子MIP4基因，SDS-PAGE表明，与GST融合的Met-MIP4突变体已得到表达，为进一步研究其生物学活性奠定了基础。     

编码霍乱肠毒素B亚单位基因植物表达载体的构建

目的：构建含霍乱肠霉素B亚单位（CTB）基因的植物双元表达载体。方法：采用高保真PCR方法调出CTB基因，定向克隆到中间载体pRTL2，经测序证实核酸序列正确后，再亚克隆到含植物双元表达载体pBI121上，采用电击法，将含CTB的植物表达载体转入根癌农杆菌中，并进行酶切证实。结果：PCR扩增的CTB片断亚克隆到中间载体，得到pRTB和pRCTBK，测序证实CTB核酸序列正确；再与根癌农杆菌双元载体pBI121连接，获得含CTB基因的植物双元表达载体pBI-CTB和pBI-CTBK，转入根癌农杆菌的载体，酶切证实正确，结论：采用正确技术路线，构建了含CTB基因的植物表达载体，为下一步的转基因植物表达研究打下了坚实的基础。